生地黄或者熟地黄的特征图谱的构建方法以及鉴别方法技术

本发明专利技术涉及一种生地黄或者熟地黄的特征图谱的构建方法以及鉴别方法。本申请针对生地黄和熟地黄的研究，综合调整超高效液相色谱条件，既能实现生地黄特征图谱的构建又能实现熟地黄特征图谱的构建，且构建所得特征图谱能有效将生地黄和熟地黄鉴别开来，并能有效缩短耗时。时。时。

【技术实现步骤摘要】
生地黄或者熟地黄的特征图谱的构建方法以及鉴别方法


[0001]本专利技术属于中药材检测
，涉及一种生地黄或者熟地黄的特征图谱的构建方法以及鉴别方法。

技术介绍

[0002]地黄为玄参科地黄Rehmannia glutinosa Libosch的新鲜或干燥块根，秋季采挖，除去芦头、须根及泥沙，将地黄缓缓烘焙至八成干，即为“生地黄”。熟地黄为生地黄的炮制加工品。生地黄、熟地黄主要包括环烯醚萜苷类、苯乙醇类和紫罗兰酮类化合物，此外还含有三萜类、黄酮类、木脂素类、酚酸类等化合物。生地黄清热凉血，养阴生津，用于热入营血，温毒发斑，吐血衄血，热病伤阴，舌绛烦渴，津伤便秘，阴虚发热，骨蒸劳热，内热消渴；熟地黄性甘，微温，归肝、肾经，功在补血滋阴，益精填髓，用于血虚微黄，心悸怔忡，月经不调，崩漏下血，肝肾阴虚，腰膝酸软，骨蒸潮热，盗汗遗精，内热消渴，眩晕，耳鸣，须发早白等症。中药材生品与炮制品的性味、功效不同，临床对应治疗的病症亦存在差异，建立生品与炮制品的鉴别方法和质量控制方法，对于临床用药的安全性和有效性具有重要的实际意义。
[0003]《中国药典》2015年版地黄含量测定项下指标成分为梓醇、毛蕊花糖苷，《中国药典》2020年版地黄含量测定项下指标成分为梓醇、地黄苷D，《中国药典》2015年版熟地黄含量测定项下指标成分为毛蕊花糖苷，《中国药典》2020年版熟地黄含量测定项下指标成分为地黄苷D，可见《中国药典》中地黄和熟地黄的主要指控指标包括环烯醚萜苷类(梓醇、地黄苷D)和苯乙醇苷类成分(毛蕊花糖苷)。地黄中含有的化学成分复杂，依据《中国药典》2020年版的质控指标，无法有效鉴别生地黄与熟地黄饮片。
[0004]中药所含有的化学成分众多，多种化学成分协同发挥药理作用，单一活性成分含量并不能反映其内在质量，也不能反映中医用药所体现的整体疗效。中药特征图谱是中药材中依赖于不同提取方法所得的各种不同化学成分浓度分布的一个整体表征，能反映中药的整体化学信息，可用于鉴别药材原料的真伪，鉴别药材生品与炮制品以及区分植物药材的不同部位，可判断商品药材的质量、监测原料与成品的批间质量稳定性等方面来评价中药质量。地黄相关的传统的中药特征图谱技术方案例如：CN113945674A记载了一种地黄炮制品的特征图谱及分析方法，其以升麻素苷为内标构建了一种地黄炮制品的特征图谱，指认的成分为梓醇、尿苷、腺苷、地黄苷D、地黄苷A、益母草苷、肉苁蓉苷A和毛蕊花糖苷等8个成分，多为核苷类和环烯醚萜苷类成分，地黄中主要的苯乙醇苷类成分除了毛蕊花糖苷外未能有效表征，且缺少生地黄与熟地黄专属性的鉴别成分。《基于标准汤剂的鲜地黄配方颗粒质量标准研究》构建了鲜地黄环烯醚萜苷类成分的UPLC特征图谱和苯乙醇苷类成分的UPLC特征图谱，其中环烯醚萜苷类成分特征图谱共标定了10个共有峰，指认峰3、4、6分别为梓醇、地黄苷D、益母草苷；苯乙醇苷类成分特征图谱共标定了8个共有峰，指认峰1、4、5、6分别为洋地黄叶苷C、毛蕊花糖苷、焦地黄苯乙醇苷B1、异毛蕊花糖苷。《一种鲜地黄标准汤剂的特征图谱检测方法》分别构建了鲜地黄标准汤剂环烯醚萜苷类和苯乙醇苷类成分的特征图谱，该方法未能将环烯醚萜苷类成分和苯乙醇苷类成分呈现在同一张色谱图上，操作复
杂，检测成本高；此外，鲜地黄未经干燥、发汗以及蒸制等工序，其与生地黄、熟地黄的化学成分存在差异，不能用于生地黄与熟地黄的区分鉴别。另外，还有CN108226313B、张智慧等(基于HPLC指纹图谱与多元统计分析的生地黄与熟地黄差异评价.时珍国医国药2021年第32卷第6期)也记载了地黄相关的检测。然而，传统技术方案整体上存在方法耗时长的问题。

技术实现思路

[0005]基于此，本申请实施例的主要目的在于提供生地黄或者熟地黄的特征图谱的构建方法，该构建方法耗时短，并且采用该构建方法构建的特征图谱进行生地黄和熟地黄鉴别的耗时也短。
[0006]在本申请的第一方面，提供一种生地黄或者熟地黄的特征图谱的构建方法，所述构建方法包括如下步骤：
[0007]制备生地黄或者熟地黄的供试品溶液；
[0008]分别采用超高效液相色谱法检测所述的供试品溶液，并将所得供试品图谱导入中药色谱指纹图谱相似度评价系统，生成生地黄或者熟地黄的特征图谱；
[0009]所述超高效液相色谱法的条件包括：
[0010]固定相为T3色谱柱；
[0011]流动相包括流动相A和流动相B，所述流动相A包含乙腈，所述流动相B包含磷酸浓度为0.08wt％～0.12wt％的磷酸溶液；
[0012]采用梯度洗脱，梯度洗脱的程序包括：
[0013]0min～5min，所述流动相A的体积占比保持0％；
[0014]5min～14min，所述流动相A的体积占比由0％上升至16％；
[0015]14min～21min，所述流动相A的体积占比由16％上升至22％；
[0016]21min～28min，所述流动相A的体积占比由22％上升至35％；
[0017]28min～34min，所述流动相A的体积占比由35％上升至100％；
[0018]34min～36min，所述流动相A的体积占比由100％下降至0％；以及，
[0019]36min～40min，所述流动相A的体积占比保持0％。
[0020]在本申请的一些实施方式中，所述超高效液相色谱法还包括如下条件中的一个或者多个：
[0021](1)0min～7min，检测波长为200nm～220nm；7min～9.5min，检测波长为260nm～300nm；9.5min～40min，检测波长为200nm～220nm；
[0022](2)柱温为33℃～37℃；以及，
[0023](3)流速为0.25mL/min～0.4mL/min。
[0024]在本申请的一些实施方式中，所述供试品溶液的制备步骤包括：
[0025]采用提取溶剂1对生地黄或者熟地黄进行提取，收集提取液1，制备供试品溶液。
[0026]在本申请的一些实施方式中，所述供试品溶液的制备步骤满足如下条件中的一个或者多个：
[0027]1)所述提取溶剂1包含甲醇浓度为25％～35％(v/v)的甲醇溶液；
[0028]2)提取的方式包括：超声提取；可选地，超声提取的条件包括：功率为200W～300W，频率35kHz～45kHz，时间为25min～35min；
[0029]3)收集所述提取液1的方式包括：膜过滤；可选地，膜过滤采用的过滤膜的孔径为0.2μm～0.3μm；以及，
[0030]4)每1g所述生地黄或者熟地黄对应的所述提取溶剂1的用量为30mL～50mL。
[0031]在本申请的一些实施方式中，所述构建方法还包括如下步骤：
[0032]提供对照品溶液，采用所述超高效液相色谱法检测所述对照品溶液，并根据所得对照数据对所述特征图谱的色谱峰进行标定；
[0033]所述对照品溶液中的对照品包含本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种生地黄或者熟地黄的特征图谱的构建方法，其特征在于，所述构建方法包括如下步骤：制备生地黄或者熟地黄的供试品溶液；分别采用超高效液相色谱法检测所述的供试品溶液，并将所得供试品图谱导入中药色谱指纹图谱相似度评价系统，生成生地黄或者熟地黄的特征图谱；所述超高效液相色谱法的条件包括：固定相为T3色谱柱；流动相包括流动相A和流动相B，所述流动相A包含乙腈，所述流动相B包含磷酸浓度为0.08wt％～0.12wt％的磷酸溶液；采用梯度洗脱，梯度洗脱的程序包括：0min～5min，所述流动相A的体积占比保持0％；5min～14min，所述流动相A的体积占比由0％上升至16％；14min～21min，所述流动相A的体积占比由16％上升至22％；21min～28min，所述流动相A的体积占比由22％上升至35％；28min～34min，所述流动相A的体积占比由35％上升至100％；34min～36min，所述流动相A的体积占比由100％下降至0％；以及，36min～40min，所述流动相A的体积占比保持0％。2.根据权利要求1所述的生地黄或者熟地黄的特征图谱的构建方法，其特征在于，所述超高效液相色谱法还包括如下条件中的一个或者多个：(1)0min～7min，检测波长为200nm～220nm；7min～9.5min，检测波长为260nm～300nm；9.5min～40min，检测波长为200nm～220nm；(2)柱温为33℃～37℃；以及，(3)流速为0.25mL/min～0.4mL/min。3.根据权利要求1或者2所述的生地黄或者熟地黄的特征图谱的构建方法，其特征在于，所述供试品溶液的制备步骤包括：采用提取溶剂1对生地黄或者熟地黄进行提取，收集提取液1，制备供试品溶液。4.根据权利要求3所述的生地黄或者熟地黄的特征图谱的构建方法，其特征在于，所述供试品溶液的制备步骤满足如下条件中的一个或者多个：1)所述提取溶剂1包含甲醇浓度为25％～35％(v/v)的甲醇溶液；2)提取的方式包括：超声提取；可选地，超声提取的条件包括：功率为200W～300W，频率35kHz～45kHz，时间为25min～35min；3)收集所述提取液1的方式包括：膜过滤；可选地，膜过滤采用的过滤膜的孔径为0.2μm～0.3μm；以及，4)每1g所述生地黄或者熟地黄对应的所述提取溶剂1的用量为30mL～50mL。5.根据权利要求1、2或者4所述的生地黄或者熟地黄的特征图谱的构建方法，其特征在于，所述构建方法还包括如下步骤：提供对照品溶液，采用所述超高效液相色谱法检测所述对照品溶液，并根据所得对照数据对所述特征图谱的色谱峰进行标定；所述对照品溶液中的对照品包含腺苷、梓醇、地黄苷D、地黄苷A、益母草苷、5
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羟甲基糠
醛、洋地黄叶苷C、焦地黄苯乙醇苷A1、焦地黄苯乙醇苷B1、毛蕊花糖苷和异毛蕊花...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘燎原，纪玉华，张正，王文丽，周颖欣，汪梅，徐杰，曾昭君，
申请(专利权)人：陇西一方制药有限公司，
类型：发明
国别省市：