干细胞外泌体在制备治疗眼部碱烧伤药物中的应用制造技术

本申请涉及干细胞外泌体在制备治疗角膜盲的药物中的应用，间充质干细胞和人胚胎干细胞分泌的外泌体可促进迁移和增殖，为角膜盲提供新的治疗途径。供新的治疗途径。

【技术实现步骤摘要】
干细胞外泌体在制备治疗眼部碱烧伤药物中的应用


[0001]本专利技术涉及干细胞
，特别是涉及干细胞外泌体在制备治疗碱烧伤药物中的应用。

技术介绍

[0002]角膜盲(Corneal blindness)是全球主要的致盲原因，而角膜内皮功能障碍致角膜内皮失代偿是引起角膜盲的主要病因之一。人角膜内皮细胞(human corneal endothelial cells，HCECs)对维持角膜正常功能具有重要作用。因其在体内不可再生，当遇到外伤、手术、眼内炎症及病理因素等影响，都会引起角膜内皮细胞的损伤和缺失。当角膜内皮损伤超过一定限度，角膜内皮功能障碍致角膜内皮失代偿，导致角膜盲。角膜移植术是目前角膜盲患者复明的唯一手术方式。然而，由于供体角膜缺乏，很多角膜盲患者不能得到及时有效的治疗。角膜碱烧伤是临床常见眼部化学伤疾病，是眼科急重症，是角膜盲的一个重要的动物模型，碱性物质能直接破坏角结膜等眼表组织并向眼部深层渗透，引起一系列复杂的病理生理反应，致使角膜混浊，明显影响患者视功能；严重角膜碱烧伤可导致角膜溃疡穿孔，致残、致盲，给个人、家庭生活带来极为不利影响。因此采取及时有效的治疗措施对于保护眼球、减少并发症，挽救视功能具有重要的意义。角膜碱烧伤的具体发病机制尚不明确，除了碱性物质的直接损伤作用外，免疫系统的参与也起着非常重要的作用，目前认为角膜碱烧伤的病理变化是机体细胞免疫和体液免疫共同作用的结果。角膜碱烧伤不但损伤眼前段组织包括角膜内皮细胞层，还造成视神经、视网膜损伤。其中，角膜内皮细胞因其不可再生出现损伤后会导致失代偿，容易造成角膜盲。角膜的高度透明性和光学性是正常发挥生理功能的必要条件之一，而角膜内皮细胞在维持角膜的正常生理功能方面起重要作用。角膜内皮细胞是角膜内层的单层细胞，构成了后弹力层和房水之间的物理屏障，通过离子“泵”功能调节角膜中离子浓度和水分，维持角膜的半脱水状态，保证角膜的正常厚度和透明度。目前临床上治疗角膜盲多采用药物抗炎、抑制免疫反应及手术等方法，但疗效不甚理想。研究治疗角膜盲的新方法尤为重要。

技术实现思路

[0003]基于此，本申请有必要提供一种干细胞外泌体在制备治疗角膜盲的药物或促进角膜内皮细胞迁移、创伤愈合或增值的药物中的应用。
[0004]具体技术方案如下：
[0005]第一方面，本申请提供了干细胞外泌体在制备治疗角膜盲的药物中的应用。
[0006]在其中一个实施方式中，所述角膜盲包括角膜内皮细胞损伤的特征。
[0007]第二方面，本申请提供了干细胞外泌体在制备促进角膜内皮细胞迁移、创伤愈合或增值的药物中的应用。
[0008]在其中一个实施方式中，所述干细胞外泌体包括胚胎干细胞外泌体和/或间充质干细胞外泌体。
[0009]在其中一个实施方式中，所述干细胞外泌体为胚胎干细胞外泌体。
[0010]在其中一个实施方式中，所述干细胞外泌体的制备方法，包括如下步骤：
[0011]培养干细胞，收集细胞培养上清液；将所述上清液梯度离心；梯度离心后，所得沉淀中用PBS重悬，再次离心纯化；以及向再次离心所得沉淀中加入PBS重悬，过滤除菌，制备干细胞外泌体。
[0012]在其中一个实施方式中，所述梯度离心包括300g～500g离心4min～6min，1500g～2000g离心15min～20min，8000g～12000g离心20min～30min，8000g～12000g离心80min～100min；和/或，所述再次离心为8000g～12000g离心80min～100min。
[0013]在其中一个实施方式中，所述药物包括活性成分和药学上可接受的辅料，所述活性成分包括所述干细胞外泌体。
[0014]在其中一个实施方式中，所述药学可接受的辅料包括稀释剂、粘合剂、湿润剂、崩解剂、润滑剂、增溶剂、pH调节剂及渗透压调节剂中的一种或多种。
[0015]在其中一个实施方式中，所述药物的剂型包括口服剂、注射剂或结膜给药剂型。
[0016]与现有技术相比，本申请的有益效果如下：
[0017]本申请提供了干细胞外泌体用于治疗角膜盲的药物中的应用，专利技术人发现间充质干细胞和人胚胎干细胞分泌的外泌体可促进迁移和增殖，同时，具有恢复小鼠眼角膜碱烧伤作用，为角膜盲提供新的治疗途径。
附图说明
[0018]图1为倒置显微镜下观察角膜内皮细胞形态图；
[0019]图2为激光扫描共聚焦显微镜(Confocol)观察角膜内皮细胞形态图；
[0020]图3为hUCMSC和hESC外泌体的鉴定；其中，A和E：电镜下的观察结果结果；B、C、F和G：Nanosight粒度仪检测hUCMSC和hESC外泌体的物理学参数，分别分析粒子大小(X轴)和浓度/强度分布(Y轴)的关系；D和H为免疫印迹鉴定hUCMSC和hESC外泌体常见的标志；图中hESC
‑
Eoxs代表胚胎干细胞外泌体组，hUC
‑
MSC
‑
Eoxs代表间充质干细胞外泌体组；
[0021]图4为角膜内皮细胞划痕实验图片(A)和统计结果(B)；
[0022]图5为hUCMSC和hESC外泌体治疗角膜碱烧伤模型第3天和第7天的荧光素染色结果；
[0023]图6为hUCMSC和hESC外泌体治疗角膜碱烧伤模型第3天与第7天HE染色结果。
具体实施方式
[0024]为了便于理解本专利技术，下面将对本专利技术进行更全面的描述，本专利技术可以以许多不同的形式来实现，并不限于本文所描述的实施例。相反地，提供这些实施例的目的是使本专利技术公开内容更加透彻全面。
[0025]本申请所使用的术语“和/或”的选择范围包括两个或两个以上相关所列项目中任一个项目，也包括相关所列项目的任意的和所有的组合，所述任意的和所有的组合包括任意的两个相关所列项目、任意的更多个相关所列项目、或者全部相关所列项目的组合。比如，“A和/或B”包括A、B和A+B三种并列方案。又比如，“A，B，C，及/或，D”的技术方案，包括A、B、C、D中任一项，也包括A、B、C、D的任意的和所有的组合，即包括A、B、C、D中任两项或任三项
的组合，还包括A、B、C、D的四项组合。
[0026]本申请中涉及“多个”、“多种”、“多次”、“多组”等，如无特别限定，指在数量上大于2或等于2。例如，“一种或多种”表示一种或大于等于两种。“以上”包括本数，比如“两种以上”包括两种、三种或更多种。
[0027]本申请中，“优选”仅为描述效果更好的实施方式或实施例，应当理解，并不构成对本申请保护范围的限制。
[0028]本申请中，“进一步”、“更进一步”等用于描述目的，表示内容上的差异，但并不应理解为对本申请保护范围的限制。
[0029]本申请中，“第一方面”、“第二方面”中，术语“第一”、“第二”仅用于描述目的，不能理解为指示或暗示相对重要性或数量，也不能理解为隐含指明所指示的技术特征的重要性或数量。而且“第一本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.干细胞外泌体在制备治疗角膜盲的药物中的应用。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述角膜盲包括角膜内皮细胞损伤的特征。3.干细胞外泌体在制备促进角膜内皮细胞迁移、创伤愈合或增殖的药物中的应用。4.根据权利要求1～3任一项所述的应用，其特征在于，所述干细胞外泌体包括胚胎干细胞外泌体、间充质干细胞外泌体和诱导多能干细胞外泌体中的一种或多种。5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述干细胞外泌体为胚胎干细胞外泌体。6.根据权利要求1～3任一项所述的应用，其特征在于，所述干细胞外泌体的制备方法，包括如下步骤：培养干细胞，收集细胞培养上清液；将所述上清液梯度离心；梯度离心后，所得沉淀用PBS重悬，再次离心；以及向再次离心所得沉淀中加入PBS重悬，过滤除菌，制备干细胞外泌体。7.根据权利要求...

【专利技术属性】
技术研发人员：姬广聚，宫玉波，杨智广，毕友坤，
申请(专利权)人：源生生物科技青岛有限责任公司，
类型：发明
国别省市：