一种试剂盒、以及细胞损伤程度的检测方法技术

本发明专利技术公开一种试剂盒、以及细胞损伤程度的检测方法。本发明专利技术提供的试剂盒，生物素标记的Annexin V或其类似物通过亲和素与生物素标记的细胞膜损伤指示序列连接，将其用于检测待测细胞的损伤程度时，连接有细胞膜损伤指示序列的膜联蛋白Annexin V通过磷脂酰丝氨酸连接在待测细胞的细胞膜表面，从而使每个待测细胞带有不同数量的细胞膜损伤指示序列，得到待测液；将待测液进行单细胞测序，能在获得单个待测细胞转录组的同时，检测出该待测细胞实时的损伤程度；将待测液加入荧光定量PCR反应体系进行测量，可以在大量细胞的层面上反应细胞损伤程度。因此，本发明专利技术提供的试剂盒，对药物开发、病理检测和发育过程中的研究具有重要意义。义。义。

【技术实现步骤摘要】
一种试剂盒、以及细胞损伤程度的检测方法


[0001]本专利技术涉及检测试剂盒
，特别涉及一种试剂盒、以及细胞损伤程度的检测方法。

技术介绍

[0002]对细胞损伤程度的鉴定在组织发育研究、肿瘤药物开发等方面有着广泛的应用。检测细胞损伤程度常用的方法包括对细胞膜损伤的检测，对细胞核形态和基因组DNA破碎的检测，对线粒体膜电位的检测以及对生化分子标签的检测等。
[0003]对细胞损伤和死亡程度的检测在药物开发、病理检测和发育过程中细胞凋亡的检测等方面有着重要的应用。在药物开发方面，对于组成复杂、细胞异质性较强的肿瘤细胞，在单细胞的层面上灵敏地检测细胞对药物处理的反应，结合其单细胞转录组的状态解析药物的作用机制，对药物的机理探寻和靶点鉴定有着重要意义。在发育生物学研究中，在单细胞层面上反映细胞发育过程中自发的凋亡和损伤过程，对阐明器官发育的分子机理有着重要的作用。
[0004]目前常用的细胞损伤程度检测方法主要依赖荧光显微成像，无法在单细胞层面检测细胞的损伤程度、也无法在鉴定细胞损伤程度的同时高通量地获得单细胞层面的转录组信息。

技术实现思路

[0005]本专利技术的主要目的是提出一种试剂盒、以及细胞损伤程度的检测方法，旨在提供一种能在单细胞层面检测细胞损伤程度、且能高通量地获得单细胞层面的转录组信息的试剂盒。
[0006]为实现上述目的，第一方面，本专利技术提出一种试剂盒，所述试剂盒包括：第一试剂，包括生物素或其类似物标记的细胞膜损伤指示序列，所述细胞膜损伤指示序列包括特异指示细胞损伤程度的条形码核苷酸序列；
[0007]第二试剂，包括标记物标记的第一物质，所述标记物包括生物素或其类似物，所述第一物质包括Annexin V或其类似物；以及，
[0008]第三试剂，包括亲和素或其类似物。
[0009]第二方面，本专利技术还提出一种试剂盒，所述试剂盒包括：
[0010]试剂R1，包括生物素或其类似物标记的细胞膜损伤指示序列，所述细胞膜损伤指示序列包括特异指示细胞损伤程度的条形码核苷酸序列；
[0011]试剂R2，包括第一物质与第二物质的融合蛋白，所述第一物质包括Annexin V或其类似物，所述第二物质包括亲和素或其类似物。
[0012]第三方面，本专利技术还提出一种试剂盒，所述试剂盒包括细胞膜损伤指示复合物，所述细胞膜损伤指示复合物包括依次连接的标记物标记的第一物质、第二物质、以及生物素或其类似物标记的细胞膜损伤指示序列；
[0013]其中，所述标记物包括生物素或其类似物，所述第一物质包括Annexin V或其类似物，所述第二物质包括亲和素或其类似物；
[0014]所述细胞膜损伤指示序列包括特异指示细胞损伤程度的条形码核苷酸序列。
[0015]可选的，所述生物素或其类似物标记的细胞膜损伤指示序列中，所述细胞膜损伤指示序列还包括第一引物结合序列，所述第一引物结合序列一端与所述生物素或其类似物连接，另一端与所述条形码核苷酸序列连接。
[0016]可选的，所述细胞膜损伤指示序列还包括第二引物结合序列和多聚腺苷酸尾序列，所述细胞膜损伤指示序列包括依次连接的第一引物结合序列、条形码核苷酸序列、多聚腺苷酸尾序列和第二引物结合序列。
[0017]可选的，所述亲和素包括链霉亲和素。
[0018]基于上述目的，本专利技术还提出一种细胞损伤程度的检测方法，所述检测方法包括以下步骤：
[0019]S10、提供一试剂盒，所述试剂盒包括：第一试剂，包括生物素或其类似物标记的细胞膜损伤指示序列，所述细胞膜损伤指示序列包括特异指示细胞损伤程度的条形码核苷酸序列；第二试剂，包括生物素或其类似物标记的Annexin V或其类似物；以及，第三试剂，包括亲和素或其类似物。；
[0020]S20、将标记物标记的第一物质、亲和素或其类似物、生物素标记的细胞膜损伤指示序列混匀后进行孵育，得到混合物，将所述混合物进行纯化处理，得到纯化后的细胞膜损伤指示复合物，所述标记物包括生物素或其类似物，所述第一物质包括Annexin V或其类似物；
[0021]S30、将所述纯化后的细胞膜损伤指示复合物与待测细胞孵育后，清洗所述待测细胞，得到标记细胞；
[0022]S40、将所述标记细胞重悬后，测试所述标记细胞上结合的细胞膜损伤指示序列的数量，得到细胞膜的损伤程度。
[0023]可选的，步骤S40包括：
[0024]将所述标记细胞进行单细胞测序，根据测序结果得到单个细胞上所结合的细胞膜损伤指示序列数量，从而得到单个细胞的细胞损伤程度。
[0025]可选的，步骤S40包括：
[0026]将所述标记细胞重悬，然后加入荧光定量PCR反应体系进行测量，根据测量得到的荧光信号计算出每个细胞上结合的细胞膜损伤指示序列的数量，从而得到细胞损伤程度。
[0027]本专利技术提供的试剂盒，生物素标记的Annexin V或其类似物通过亲和素与生物素标记的细胞膜损伤指示序列连接，而生物素标记的膜联蛋白Annexin V可以特异性地结合细胞死亡时暴露在细胞膜表面的磷脂酰丝氨酸，如此，连接有细胞膜损伤指示序列的膜联蛋白Annexin V或其类似物通过磷脂酰丝氨酸连接在待测细胞的细胞膜表面，从而使每个待测细胞带有不同数量的细胞膜损伤指示序列，得到待测液；将待测液进行单细胞测序，能在获得单个待测细胞转录组的同时，检测出该待测细胞实时的损伤程度；此外，将待测液加入荧光定量PCR反应体系进行测量，可以在大量细胞的层面上反应细胞损伤程度。因此，本专利技术提供的试剂盒，对药物开发、病理检测和发育过程中的研究具有重要意义。
附图说明
[0028]为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅为本专利技术的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他相关的附图。
[0029]图1为本专利技术一实施例中的生物素标记的细胞膜损伤指示序列示意图；
[0030]图2为本专利技术一实施例中的标记细胞的部分结构示意图；
[0031]图3为本专利技术实施例3中的细胞膜损伤指示复合物标记经不同浓度的肿瘤化疗药物拓补替康处理后的MCF7细胞的实验结果图；
[0032]图4为本专利技术实施例4中的细胞膜损伤指示复合物标记经不同浓度的肿瘤化疗药物拓补替康处理后的MCF7细胞的单细胞RNA测序实验结果图。
[0033]本专利技术目的的实现、功能特点及优点将结合实施例，参照附图做进一步说明。
具体实施方式
[0034]为使本专利技术实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。
[0035]另外，全文中出现的“和/或”的含义，包括本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种试剂盒，用于检测细胞损伤程度，其特征在于，包括：第一试剂，包括生物素或其类似物标记的细胞膜损伤指示序列，所述细胞膜损伤指示序列包括特异指示细胞损伤程度的条形码核苷酸序列；第二试剂，包括标记物标记的第一物质，所述标记物包括生物素或其类似物，所述第一物质包括Annexin V或其类似物；以及，第三试剂，包括亲和素或其类似物。2.一种试剂盒，用于检测细胞损伤程度，其特征在于，包括：试剂R1，包括生物素或其类似物标记的细胞膜损伤指示序列，所述细胞膜损伤指示序列包括特异指示细胞损伤程度的条形码核苷酸序列；试剂R2，包括第一物质与第二物质的融合蛋白，所述第一物质包括Annexin V或其类似物，所述第二物质包括亲和素或其类似物。3.一种试剂盒，用于检测细胞损伤程度，其特征在于，包括细胞膜损伤指示复合物，所述细胞膜损伤指示复合物包括依次连接的标记物标记的第一物质、第二物质、以及生物素或其类似物标记的细胞膜损伤指示序列；其中，所述标记物包括生物素或其类似物，所述第一物质包括Annexin V或其类似物，所述第二物质包括亲和素或其类似物；所述细胞膜损伤指示序列包括特异指示细胞损伤程度的条形码核苷酸序列。4.如权利要求1至3任意一项所述的试剂盒，其特征在于，所述生物素或其类似物标记的细胞膜损伤指示序列中，所述细胞膜损伤指示序列还包括第一引物结合序列，所述第一引物结合序列一端与所述生物素或其类似物连接，另一端与所述条形码核苷酸序列连接。5.如权利...

【专利技术属性】
技术研发人员：胡宇慧，胡琪楠，赵研，
申请(专利权)人：南方科技大学，
类型：发明
国别省市：