特异性结合Trop2的核酸适配体、其筛选方法及应用技术

本发明专利技术公开了一种特异性结合Trop2的核酸适配体、其筛选方法及应用。所述核酸适配体是通过工程化细胞SELEX筛选法进行多轮筛选获得多条Trop2的核酸适配体候选序列。所述核酸适配体具有SEQ ID No.1～SEQ ID No.3中任意一者所示的核苷酸序列。本发明专利技术筛选的核酸适配体能和Trop2特异、稳定的结合，在Trop2相关的肿瘤诊断和治疗等方面具有广阔的应用前景；同时本发明专利技术提供的Trop2核酸适配体可以与DM1偶联，从而实现对肿瘤的有效杀伤，并减轻其副作用，为针对Trop2精准治疗提供了新的方案和思路。为针对Trop2精准治疗提供了新的方案和思路。为针对Trop2精准治疗提供了新的方案和思路。

【技术实现步骤摘要】
特异性结合Trop2的核酸适配体、其筛选方法及应用


[0001]本专利技术涉及一种核酸适配体，具体涉及一种特异性结合Trop2的核酸适配体、其筛选方法及应用，属于生物


技术介绍

[0002]Trop2是近年来发现的肿瘤相关基因，可调控肿瘤细胞的信号转导和增殖。Trop2在如乳腺癌、肺癌、结直肠癌、前列腺癌、胃癌、宫颈癌、胰腺癌以及卵巢癌在内的各种上皮恶性肿瘤中都有表达。Trop2的过表达在肿瘤生长中起着关键作用，并且已经证实与癌症中更广泛的侵袭性疾病和疾病的不良预后相关。近年来，在Trop2的精准治疗方面，抗癌药物的靶向已经取得很好的进展，例如单克隆抗体和ADC，其中ADC的研究成果尤为丰硕。FDA批准的ADC主要是基于新的高毒性化疗药物以及改进的抗体与药物连接子的发现。例如，FDA已批准Trop2人源化单抗(hRS7)与拓扑异构酶I抑制剂伊立替康的活性代谢产物7
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乙基
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10
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羟基喜树碱(7
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ethyl
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10
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hydroxycamptothecin，SN
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38)结合。除此之外，现在也有多种Trop2的ADC药物正在进行临床试验，比如，抗Trop2的人源化IgG1单克隆抗体与拓扑异构酶I抑制剂DXd的偶联药等。
[0003]适配体能够作为新的靶向剂出现，因其具有许多优势，例如较高的亲和力，约为皮摩尔至纳摩尔范围内；分子量低，可以更容易进入肿瘤细胞和组织，进而更有效地靶向治疗；并且化学合成和修饰非常简单，可以更快更易于获得更多的适配体。此外，适配体的致病性和免疫原性已被证明是很低的，这对于其实际应用至关重要，为肿瘤治疗带来更多的机会和选择。这就要求研究人员需要进一步改良和发展适配体的筛选技术，以提高适配体的结合亲和力，并且探索其作为靶向配体材料的应用潜力。
[0004]常规的适配体是通过SELEX方法从随机寡核苷酸文库产生。对于已知的肿瘤细胞膜标志蛋白，大多数适配体是使用纯化的蛋白质筛选获得的。然而，由于纯化蛋白质的分子结构和存在形式与它们在细胞膜上的天然状态不同，得到的适配体不一定与靶标细胞中的自然空间结构的膜蛋白质相互作用。因此，适配体常常缺乏用于靶向目的的基本的结合亲和力和特异性。基于此，为了获得与肿瘤细胞上的Trop2膜蛋白特异结合的DNA适配体，采用改进的细胞
‑
SELEX的方法具有明显优势。筛选的主要策略是将Trop2蛋白转染后高表达的细胞作为阳性筛选对象，而将没有被转染的CHO
‑
K1作为阴性筛选对象。所分离的适配体能够与天然构象的细胞膜蛋白特异性结合，从而通过适配体与Trop2膜蛋白的相互作用识别整个细胞。
[0005]DM1是一种作用机理清楚、抑制微管解聚的天然生物碱，能防止细胞有丝分裂期间纺锤体的形成，并且具有抑制肿瘤细胞生长的能力。由于有限的治疗给药窗口和缺乏选择性而产生的毒副作用，例如神经毒性和胃肠道副作用等问题，不鼓励在临床治疗中直接使用DM1。然而，DM1的高细胞毒性满足ADC药物的要求，这使得DM1及其衍生物在ADC开发中被广泛使用。例如，Kadcyla(曲妥珠单抗
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美登素偶联体，Trastuzumab Emtansine，T
‑
DM1)是第一个以DM1衍生物为基础的ADC，于2013年在临床上已被FDA认定为治疗HER
‑
2阳性晚期或
转移性乳腺癌患者的肿瘤靶向药物。因此，构建并评估新型的靶向Trop2的适配体与药物偶联体的肿瘤杀伤效力很有必要，尤其是将小分子药物美登素衍生物DM1化学连接到筛选获得的适配体上。

技术实现思路

[0006]本专利技术的主要目的在于提供一种特异性结合Trop2的核酸适配体、其筛选方法及应用，以解决上述
技术介绍
中提出的问题。
[0007]为实现前述专利技术目的，本专利技术采用的技术方案包括：
[0008]本专利技术实施例提供了一种特异性结合Trop2的核酸适配体，所述核酸适配体具有SEQ ID No.1、SEQ ID No.2、SEQ ID No.3中任意一者所示的核苷酸序列。
[0009]本专利技术实施例还提供了一种核酸适配体的筛选方法，其包括：利用cell
‑
SELEX技术，以慢病毒转染稳定表达Trop2的CHO
‑
K1为靶细胞，以正常细胞CHO
‑
K1为对照细胞，进行Trop2核酸适配体筛选，从而获得前述的特异性结合Trop2的核酸适配体。
[0010]本专利技术实施例还提供了前述的特异性结合Trop2的核酸适配体在制备能够特异性识别和结合靶蛋白Trop2的产品中的应用。
[0011]本专利技术实施例还提供了前述的特异性结合Trop2的核酸适配体在制备肿瘤检测试剂或预防和/或治疗肿瘤的药物中的应用。
[0012]本专利技术实施例还提供了一种试剂盒，其包括前述的特异性结合Trop2的核酸适配体。
[0013]本专利技术实施例还提供了一种核酸适配体与化学小分子药物的偶联体，其包括前述的特异性结合Trop2的核酸适配体、连接子和化学小分子药物，所述核酸适配体通过连接子与化学小分子药物偶联。
[0014]本专利技术实施例还提供了一种核酸适配体与化学小分子药物的偶联体的制备方法，其包括：将前述的特异性结合Trop2的核酸适配体经连接子与化学小分子药物偶联。
[0015]本专利技术实施例还提供了一种抗体偶联药物，其包括前述的核酸适配体与化学小分子药物的偶联体。
[0016]与现有技术相比，本专利技术以上所提供的技术方案的优点至少包括：
[0017](1)本专利技术通过细胞
‑
SELEX技术筛选得到的核酸适配体，与传统以纯化蛋白或人工合成蛋白为靶点相比，具有亲和力高、特异性强，能更好的与天然状态下的表达Trop2的细胞进行结合；
[0018](2)本专利技术筛选出的一种Trop2核酸适配体能够高效特异的结合靶蛋白Trop2，具有明显的亲和力，这对于癌症的早期诊断和治疗等方面应用提供了一种有效的工具和手段；
[0019](3)本专利技术将筛选出的Trop2适配体与DM1这一高细胞毒性药物偶联，首次构建了基于Trop2这一靶点的适配体与药物偶联的设计，并实现对肿瘤杀伤的有效性及较轻的副作用，本专利技术为针对Trop2精准治疗提供了新的方案和思路。
附图说明
[0020]为了更清楚地说明本专利技术的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要
使用的附图进行简单的介绍，显而易见地，下面描述的附图仅仅作为本文专利技术的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他附图。
[0021]图1a
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图1b是本专利技术一典型实施方式中工程化高表达Trop2稳转细胞系的验证图；
[0022]图2是本专利技术一典型实施方式中利用细胞
...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种特异性结合Trop2的核酸适配体，其特征在于：所述核酸适配体具有SEQ ID No.1、SEQ ID No.2、SEQ ID No.3中任意一者所示的核苷酸序列。2.根据权利要求1所述的特异性结合Trop2的核酸适配体，其特征在于：所述核酸适配体具有SEQ ID No.3所示的核苷酸序列。3.根据权利要求1或2所述的特异性结合Trop2的核酸适配体，其特征在于：所述核酸适配体能够特异性识别并稳定结合靶蛋白Trop2。4.一种核酸适配体的筛选方法，其特征在于包括：利用cell
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SELEX技术，以慢病毒转染稳定表达Trop2的CHO
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K1为靶细胞，以正常细胞CHO
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K1为对照细胞，进行Trop2核酸适配体筛选，从而获得权利要求1
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3中任一项所述的特异性结合Trop2的核酸适配体。5.权利要求1
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3中任一项所述的特异性结合Trop2的核酸适配体在制备能够特异性识别和结合靶蛋白Trop2的产品中的应用。6.权利要求1
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3中任一项所述的特异性结合Trop2的核酸适配体在制备肿瘤检测试剂或预防和/或治疗肿瘤的药物中的应用。7.根据权利要求...

【专利技术属性】
技术研发人员：裴仁军，李文静，
申请(专利权)人：中国科学院苏州纳米技术与纳米仿生研究所，
类型：发明
国别省市：