具有α-葡萄糖苷酶抑制活性的两种多肽及其应用制造技术

本发明专利技术属于生物技术领域，特别涉及两个具有α

【技术实现步骤摘要】
具有
α
‑
葡萄糖苷酶抑制活性的两种多肽及其应用


[0001]本专利技术属于生物
，特别涉及两个具有α
‑
葡萄糖苷酶抑制活性的多肽及其应用。

技术介绍

[0002]糖尿病是一种广泛存在的代谢紊乱疾病，根据国际糖尿病联合会的数据，2021年全球有5.37亿成年人患有糖尿病，糖尿病患者中90％为2型糖尿病。高血糖是2型糖尿病的主要特征，长期高血糖会导致各种组织的慢性损伤和功能障碍，并引起视网膜损伤、慢性肾衰竭、等并发症。因此控制血糖，尤其是餐后血糖，是2型糖尿病有效的治疗方法，而延迟碳水化合物的代谢则是控制餐后血糖的主要措施。位于小肠上皮黏膜的a
‑
葡萄糖苷酶是参与碳水化合物代谢的关键酶，α
‑
葡萄糖苷酶抑制剂能通过抑制α
‑
葡萄糖苷酶的活性，延缓碳水化合物的代谢，从而控制血糖的生成速度。目前α
‑
葡萄糖苷酶抑制剂已广泛应用于糖尿病治疗中，如阿卡波糖、伏格列波糖和米格列醇等。然而长期服用这些化学合成的药物，会导致不良反应。因此，从天然食品中寻找a
‑
葡萄糖苷酶抑制剂，作为2型糖尿病的补充疗法已收到广泛关注。
[0003]生物活性肽是两个或两个以上的氨基酸以肽键相连的化合物，在人体内起重要生理作用，且具有溶解性好、活性高、易消化吸收，安全无毒等特点，且越来越受到人们关注。近几年有研究也发现火腿、大豆、苋菜、鸡蛋、藜麦蛋白水解肽具有α
‑
葡萄糖苷酶抑制活性，目前已从干腌火腿、水牛奶、鹰嘴豆、黑茶等蛋白水解物中鉴定出多种具有α
‑
葡萄糖苷酶抑制活性的抑制活性肽，如干腌火腿AEEEYPDL、LGVGG、GGLGP的IC
50
分别为5.58mM(5.38mg/mL)、6.36mM(2.55mg/mL)、8.71mM(3.48mg/mL)；水牛奶蛋白中的YLGYLEQLLR,TKVIPYVRYL,RNAVPITPTLNR的IC
50
分别为470.5μM(0.596mg/mL)、498.0μM(0.623mg/mL)、503.6μM(0.681mg/mL)；鹰嘴豆蛋白中的SPGAGKG和GLAR的IC
50
分别为1.78mg/mL和8.74mg/mL，黑茶蛋白中的CGKKFVR,AVPANLVDLNVPALLK的IC
50
分别为0.52mg/mL,1.03mg/mL。说明：上述IC
50
是针对a
‑
葡萄糖酶抑制活性而言。
[0004]2017103998437的专利技术《具有降血糖功能的三肽CGP及其用途》告知：三肽CGP在5.0mg/mL时的α
‑
葡萄糖苷酶抑制活性为35.9％。
[0005]2017104006528的专利技术《具有降血糖功能的三肽SPF及其用途》告知：三肽SPF在5.0mg/mL时的α
‑
葡萄糖苷酶抑制活性为30.5％。

技术实现思路

[0006]本专利技术要解决的技术问题是提供新的具有α
‑
葡萄糖苷酶抑制活性的两种多肽以及用途。
[0007]为解决上述技术问题，本专利技术提供具有α
‑
葡萄糖苷酶抑制活性的以下两种多肽：
[0008]多肽EGEPKLP，该多肽的氨基酸序列为：Glu
‑
Gly
‑
Glu
‑
Pro
‑
Lys
‑
Leu
‑
Pro。
[0009]多肽TPELKL，该多肽的氨基酸序列为：Thr
‑
Pro
‑
Glu
‑
Leu
‑
Lys
‑
Leu。
[0010]多肽EGEPKLP和TPELKL均是从香菇中性蛋白酶解液中鉴定获得；实际中，也可由多肽合成公司通过化学合成制备而得。
[0011]本专利技术提供的两种多肽均具有较强的α
‑
葡萄糖苷酶抑制活性，且具有安全无毒副作用、易于吸收等优点，可用于降血糖产品(包括降血糖药物)中。
[0012]本专利技术的多肽EGEPKLP和TPELKL针对a
‑
葡萄糖酶抑制活性而言，EGEPKLP的IC
50
为0.41mg/ml，TPELKL的IC
50
为0.34mg/ml。
[0013]综上，本专利技术的多肽具有α
‑
葡萄糖苷酶抑制活性，且该活性未见报道，活性效应与剂量具有相关性，属于新的具有α
‑
葡萄糖苷酶活性功能肽。
[0014]本专利技术的具有α
‑
葡萄糖苷酶抑制活性的两种多肽的用法和用量如下：口服，每次约0.5g，每日3次。
附图说明
[0015]下面结合附图对本专利技术的具体实施方式作进一步详细说明。
[0016]图1为不同分子量香菇酶解肽组分的α
‑
葡萄糖苷酶抑制活性；不同的字母表示不同处理之间存在显著差异；
[0017]图2为Sephadex G
‑
10凝胶层析法分离分子量<1kDa的组分；
[0018]图2中：A洗脱曲线；B.α
‑
葡萄糖苷酶抑制活性；不同字母表示不同处理之间有显著差异(P<0.05)。
[0019]图3为质谱鉴定图。
具体实施方式
[0020]下面结合具体实施例对本专利技术进行进一步描述，但本专利技术的保护范围并不仅限于此：
[0021]实例1、
[0022]1、香菇肽的制备
[0023]称取5.0g的香菇蛋白于150mL锥形瓶中，加入100mL蒸馏水搅拌混匀，调pH值至7，按酶底比3000U
·
g
‑1加入中性蛋白酶混合均匀，于45℃的温度下，放入摇床中以150r
·
min
‑1的转速酶解4h，酶解结束后，沸水浴5min使中性蛋白酶失活，冷却至室温，4000r/min离心20min，取上清液进行下一步实验。
[0024]2、超滤
[0025]将步骤1所得的上清液用1k Da、3k Da、5k Da超滤膜分离。得到的组分分别命名为UF
‑
I(>5k Da)、UF
‑
II(3
‑
5kDa)、UF
‑
III(1
‑
3kDa)和UF
‑
IV(<1k Da)，并分别采集，测定活性。
[0026]在5mg/mL的浓度下，不同分子量香菇酶解肽组分的α
‑
葡萄糖苷酶抑制活性如图1所示，因此可知UF
‑Ⅳ
(＜1K Da)活性较好。
[0027]3、凝胶本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.具有α
‑
葡萄糖苷酶抑制活性的多肽，其特征是为以下任一：多肽EGEPKLP，其氨基酸序列为：Glu
‑
Gly
‑
Glu
‑
Pro
‑
Lys
‑
Leu
‑
Pro；多肽TPELKL，其氨基酸序列为：Thr
...

【专利技术属性】
技术研发人员：张玉，王伟，王君虹，李雪，孙素玲，白丽萍，陈祥坤，
申请(专利权)人：浙江省农业科学院，
类型：发明
国别省市：