一种毛豆腐抗氧化活性肽及其制备方法技术

本发明专利技术公开了一种毛豆腐抗氧化活性肽及其制备方法，所述毛豆腐抗氧化活性肽的氨基酸序列为VFEEDDK(Val

【技术实现步骤摘要】
一种毛豆腐抗氧化活性肽及其制备方法


[0001]本专利技术涉及生物
，尤其是涉及一种毛豆腐抗氧化活性肽及其制备方法。

技术介绍

[0002]食源性活性肽是直接或间接来源于食物蛋白质水解并具有特定生理活性的一些特殊氨基酸序列，具有高安全性、高吸收性、多且高的生理活性优点，是极具发展前景的功能因子。大豆发酵食品是以大豆或大豆制品为发酵基质，经微生物作用形成的食品。它因发酵过程产生了丰富的活性肽，故比非发酵大豆食品具有更强的生物活性。徽州呈坎罗氏毛豆腐毛豆腐是典型的大豆发酵食品，在发酵过程中，毛霉菌将豆腐的大豆蛋白质分解成多种氨基酸和肽的混合物，不仅增加了味道的鲜美，还让毛豆腐具有帮助消化、防治动脉硬化、高血压、便秘、中风、冠心病、抑制胆固醇等多种重要保健功能。
[0003]活性肽中的抗氧化肽在清除自由基，抑制脂质过氧化，提高机体抵抗衰老与疾病等方面具有重要的作用，在食品、化妆品、医学等领域具有极高应用价值。
[0004]目前对大豆发酵食品毛豆腐的研究主要集中在发酵技术与化学成分的分析方面，对其活性肽的制备、功能及作用机制研究匮乏。徽州呈坎罗氏毛豆腐为地方非遗产品，是典型的大豆发酵食品，其营养成分的生化指标优于普通毛豆腐。本专利技术以徽州呈坎罗氏毛豆腐为原料，从毛豆腐中获取特定氨基酸序列的抗氧化活性肽，进行功能产品开发以提高毛豆腐的附加值，从而为促进传统产业的转型注入新的动力。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的是提供一种毛豆腐抗氧化活性肽及其制备方法，解决现有毛豆腐产业附加值低及没有对毛豆腐中抗氧化活性肽进行深入研究的问题，为开发基于食品源的抗氧化活性肽以及探索其在食品、化妆品和医学上的广泛应用奠定基础。
[0006]本专利技术解决其技术问题所采用的技术方案是：一种毛豆腐抗氧化活性肽，所述毛豆腐抗氧化肽的氨基酸序列为VFEEDDK(Val
‑
Phe
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Glu
‑
Glu
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Asp
‑
Asp
‑
Lys，分子量为880.38Da)。
[0007]上述毛豆腐抗氧化肽的制备方法，包括以下步骤：
[0008]1)将毛豆腐和去离子水按照料液比1:10g/mL的比例进行混合后研磨；
[0009]2)在冰浴中对研磨后的混合溶液进行超声波破碎1h，然后在高速冷冻离心机中以4℃，12000rpm离心15min，静置分离得上清液为蛋白质提取液；
[0010]3)向获得的蛋白质提取液中加入胰酶后在37℃下酶解2h，胰酶与蛋白质提取液按1:50g/mL的比例进行添加，溶液的pH值调整为10，酶解完成后，通过沸水浴5min对酶进行灭活处理；
[0011]4)将酶解后的蛋白质提取液在高速冷冻离心机中以4℃，12000rpm离心10min，静置后取上清，调节pH至7.2，得混合肽溶液并冻干浓缩；
[0012]5)将冻干浓缩的混合肽溶液复溶，然后用Sephadex G
‑
25凝胶色谱柱(1cm
×
15cm)
进行分离，并以0.3mL/min的流速用去离子水洗脱，收集各吸收峰对应的组分，冻干并在
‑
20℃下保存；
[0013]6)测定步骤5收集的各组分的抗氧化活性(ABTS、DPPH和OH自由基的清除活性和总抗氧化能力T
‑
AOC)，获得抗氧化活性综合最优的组分；
[0014]7)采用C18固相萃取柱对步骤6)收集的抗氧化活性综合最优的组分进行脱盐纯化，采用反相高效液相色谱(RP
‑
HPLC)对抗氧化活性综合最优的组分进行反相色谱分离，使用全梯度方法根据峰图收集每个出峰物质，旋干后进行各组分的抗氧化活性(ABTS、DPPH和OH自由基的清除活性和总抗氧化能力T
‑
AOC)测定，得抗氧化活性综合最优的三个峰组分(峰3、峰4、峰5)；
[0015]8)对步骤7)的峰3、峰4、峰5进行三重串联液质联用仪(LC
‑
MS/MS)测定活性肽的氨基酸序列，得9个抗氧化活性较强的活性肽；
[0016]9)根据步骤8)获得的活性肽氨基酸序列，采用人工合成的方式获得对应的活性肽，以293T细胞做抗氧化活性测试，以MDA、SOD和POD为评价指标，得抗氧化活性最强的活性肽，其序列为VFEEDDK(Val
‑
Phe
‑
Glu
‑
Glu
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Asp
‑
Asp
‑
Lys，分子量为880.38Da)。
[0017]本专利技术还公开了一种面膜，其特征在于含有氨基酸序列为VFEEDDK(Val
‑
Phe
‑
Glu
‑
Glu
‑
Asp
‑
Asp
‑
Lys，分子量为880.38Da)的毛豆腐抗氧化活性肽。
[0018]本专利技术还公开了氨基酸序列为VFEEDDK(Val
‑
Phe
‑
Glu
‑
Glu
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Asp
‑
Asp
‑
Lys，分子量为880.38Da)的毛豆腐抗氧化活性肽在制备面膜中的应用。
[0019]本专利技术的有益效果：本专利技术通过毛豆腐中获取抗氧化活性肽，具有抗氧化活性高，分子量小且安全易吸收的优点。作为抗氧化剂，本专利技术获得的抗氧化活性肽运用在面膜产品上，能够提高面膜产品的抗氧化性能，减缓衰老，且能较好抑制酪氨酸酶的活性，具有一定的美白效果。
[0020]以下将结合附图和实施例，对本专利技术进行较为详细的说明。
附图说明
[0021]图1为7种酶酶解制备的活性肽的抗氧化活性比较图。
[0022]图2为Sephadex G
‑
25凝胶色谱图曲线。
[0023]图3为反相高效液相(RP
‑
HPLC)色谱图曲线。
[0024]图4a为293T细胞经Peptide1至3三个活性肽处理的MDA含量变化。
[0025]图4b为293T细胞经Peptide4至6三个活性肽处理的MDA含量变化。
[0026]图4c为293T细胞经Peptide7至9三个活性肽处理的MDA含量变化。
[0027]图5a为293T细胞经Peptide1至3三个活性肽处理的SOD含量变化。
[0028]图5b为293T细胞经Peptide4至6三个活性肽处理的SOD含量变化。
[0029]图5c为293T细胞经Peptide7至9三个活性肽处理的SOD含量变化。
[0030]图6a为293T细胞经Peptide1至3三个活性肽处理的POD含量变化。
[0031]图6b为293T细胞经Peptide4至6三个活性肽处理的POD含量变化。...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种毛豆腐抗氧化活性肽，其特征在于：所述毛豆腐抗氧化活性肽的氨基酸序列为VFEEDDK。2.一种氨基酸序列为VFEEDDK的毛豆腐抗氧化活性肽的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：1)将毛豆腐和去离子水按照料液比1:10g/mL的比例进行混合后研磨；2)在冰浴中对研磨后的混合溶液进行超声波破碎1h，然后在高速冷冻离心机中以4℃，12000rpm离心15min，静置分离所得上清液为蛋白质提取液；3)向获得的蛋白质提取液中加入胰酶并在37℃下酶解2h，胰酶与蛋白质提取液按1:50g/mL的比例进行添加，并调整溶液的pH值至10，酶解完成后，通过沸水浴5min对酶进行灭活处理；4)将酶解后的蛋白质提取液在高速冷冻离心机中以4℃，12000rpm离心10min，静置后取上清，调节pH至7.2，得混合肽溶液并冻干浓缩；5)将冻干浓缩的混合肽溶液复溶，然后用Sephadex G
‑
25凝胶色谱柱进行分离，并用去离子水洗...

【专利技术属性】
技术研发人员：胡晓倩，吴永祥，吴丽萍，汪欢，柯象涛，汪盼，蒋尚悦，马世纪，
申请(专利权)人：黄山学院，
类型：发明
国别省市：