一种注射用无菌粉末中抗氧化剂和硫化剂的高效液相色谱分析方法技术

本发明专利技术涉及一种注射用无菌粉末中抗氧化剂和硫化剂的高效液相色谱分析方法，包括以下步骤：(1)配制内标物为4

【技术实现步骤摘要】
一种注射用无菌粉末中抗氧化剂和硫化剂的高效液相色谱分析方法


[0001]本专利技术属于药物检测分析
，具体涉及一种注射用无菌粉末中抗氧化剂和硫化剂的高效液相色谱分析方法。

技术介绍

[0002]注射用无菌粉末(sterile powder for injection)俗称粉针，是指原料药物或与适宜的辅料制成的供临用前用无菌溶液配制成注射液的无菌粉末或无菌块状物。可用适宜的注射用溶剂配制后注射，也可以用静脉输液配制后静脉滴注。凡是在水溶液中不稳定的药物，如某些抗生素青霉素类、头孢菌素类、甘氨酰四环素类、一些酶制剂胰蛋白、辅酶A及血浆等生物制剂均须制成注射用无菌粉末。一般采用无菌分装或冷冻干燥法制备,根据制备工艺的不同，注射用无菌粉末分为两大类：注射用无菌分装制品和注射用冷冻干燥制品。
[0003]《化学药品注射剂生产所用的塑料组件系统相容性研究技术指南(试行)》(国家药监局药审中心通告2020年第33号)及《化学药品与弹性体密封件相容性研究技术指导原则(试行)》(国家药品监督管理局通告2018年第14号)中指出须对药品与包装所用密封件(如胶塞)的相容性进行研究，包括抗氧剂(如2,6
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2叔丁基
‑4‑
甲基苯酚，即BHT)、硫化剂(酚醛树脂)等。
[0004]注射用无菌粉末中的抗氧化剂、硫化剂通常采用二氯甲烷、正己烷直接对注射用无菌粉末进行浸提，或进一步浓缩，制得供试品溶液，采用GC法、HPLC法、GC
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MS等分析，从而测定注射用无菌粉末中二者的含量。但上述现有技术均存在一定的局限性,注射用无菌粉末中抗氧化剂和硫化剂的含量测定结果不准确。

技术实现思路

[0005]本专利技术针对现有技术中存在的技术问题，提供一种注射用无菌粉末中抗氧化剂和硫化剂的高效液相色谱分析方法，以模拟临床使用实际情况，取市售包装药品一次注射用量，在每支市售包装中注入适量0.9％氯化钠注射液，进行振摇提取，合并提取液，用含内标物质的二氯甲烷
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环己烷(1∶1)混合溶液进行萃取，用甲醇稀释提取液，采用HPLC法同时控制抗氧化剂(BHT)、硫化剂(对
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特辛基苯酚，即PTOP)，内标法分析方法更准确，并进行了方法学验证，注射用无菌粉末中抗氧化剂、硫化剂的检出量更符合临床使用时人每日实际摄入量，从而确保该药品使用安全。
[0006]本专利技术解决上述技术问题的技术方案如下：
[0007]一种注射用无菌粉末中抗氧化剂和硫化剂的高效液相色谱分析方法，包括以下步骤：(1)配制内标物为4
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叔丁基二苯硫醚的内标溶液；(2)配制注射用无菌粉末供试品溶液；(3)配制含BHT(2,6
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2叔丁基
‑4‑
甲基苯酚)、PTOP(对
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特辛基苯酚)的混合对照品溶液；(4)色谱检测：分别量取供试品溶液、混合对照品溶液，注入高效液相色谱仪进行色谱分析，记录色谱图，根据色谱图计算所述注射用无菌粉末中抗氧化剂和硫化剂的含量；
[0008]其中，步骤(4)中的色谱条件为：流动相：乙腈
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0.2％甲酸溶液；流速：1.0m l/mi n；柱温：30℃；波长：278nm；梯度洗脱：0
‑
5mi n，70％乙腈；5
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15mi n，70％
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90％乙腈；15
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20mi n，95％乙腈。
[0009]在上述技术方案的基础上，本专利技术还可以做如下改进。
[0010]进一步，所述步骤(1)中，内标溶液的配制方法为：精密称取4
‑
叔丁基二苯硫醚10mg，加入体积比为1:1的二氯甲烷和环己烷的混合溶液进行溶解、稀释至50ml，摇匀，配制得到内标贮备液；量取所述内标贮备液5ml，再加入体积比为1:1的二氯甲烷和环己烷的混合溶液稀释至100ml，摇匀，配制得到内标溶液。
[0011]进一步，所述步骤(2)中，供试品溶液的配制方法为：注射用无菌粉末经生理盐水溶解后，转移至离心管中，加入所述内标溶液，振摇、离心；量取上清液，再次离心，量取第二次离心后的上清液，加入甲醇，混匀，制得供试品溶液。
[0012]进一步，所述步骤(3)中，混合对照品溶液的配制方法为：精密称取BHT和PTOP各10mg，加入体积比为1:1的二氯甲烷和环己烷的混合溶液进行溶解、稀释至50ml,摇匀，制备得到对照贮备溶液；定量量取所述对照贮备溶液，加入所述内标溶液后，再加入甲醇稀释，摇匀，制得混合对照品溶液。
[0013]进一步，所述混合对照品溶液中4
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叔丁基二苯硫醚的浓度为2μg/ml，BHT、PTOP的浓度均为0.5
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20μg/ml。
[0014]进一步，所述步骤(4)中的色谱条件为：色谱柱:phenomenex Luna C18(4.6mm
×
250mm，5μm)。
[0015]本专利技术的有益效果是：本专利技术通过含有内标物4
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叔丁基二苯硫醚的二氯甲烷和环己烷混合溶液，对注射用无菌粉末溶液进行萃取，采用高效液相色谱分析法同时控制抗氧化剂和硫化剂，利用色谱图分析、计算得到注射用无菌粉末中抗氧化剂和硫化剂的含量，测定结果的准确度较高，且抗氧化剂和硫化剂的检出限均较低，对注射用无菌粉末的质量控制以及确保药品使用安全具有重要意义。
附图说明
[0016]图1为本专利技术实施例1中空白溶液1、未加内标的供试品溶液2、供试品溶液3、混合对照品溶液4、PTOP对照品溶液5、BHT对照品溶液6以及内标溶液7的分离色谱图；
[0017]图2为本专利技术实施例1中混合对照品溶液的线性关系图。
具体实施方式
[0018]以下对本专利技术的原理和特征进行描述，所举实例只用于解释本专利技术，并非用于限定本专利技术的范围。
[0019]除非另有说明，本专利技术采用的原料为本
常规原料，皆可于市场购得。以下实施例的试验方法和检测方法中，如无特别说明，均为常规方法，试验中所用器具仪器皆可通过商业途径获得。本说明书未详细阐述的部分均属于现有技术。
[0020]实施例1
[0021]1.色谱条件
[0022]色谱柱:phenomenex Luna C18(4.6mm
×
250mm，5μm)；
[0023]流动相：乙腈
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0.2％甲酸溶液；
[0024]梯度洗脱：0
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5mi n，70％乙腈；5
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15mi n，70％
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90％乙腈；15
‑
20mi n，95％乙腈；
[0025]流速：1.0ml/mi n；
[0026]柱温：30℃；
[0027]波长：278nm。
[0028]2.溶液的配制
[0029]a.内标溶液:精密称取4
‑...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种注射用无菌粉末中抗氧化剂和硫化剂的高效液相色谱分析方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)配制内标物为4
‑
叔丁基二苯硫醚的内标溶液；(2)配制注射用无菌粉末供试品溶液；(3)配制含BHT、PTOP的混合对照品溶液；(4)色谱检测：分别量取供试品溶液、混合对照品溶液，注入高效液相色谱仪进行色谱分析，记录色谱图，根据色谱图计算所述注射用无菌粉末中抗氧化剂和硫化剂的含量；其中，步骤(4)中的色谱条件为：流动相：乙腈
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0.2％甲酸溶液；流速：1.0ml/min；柱温：30℃；波长：278nm；梯度洗脱：0
‑
5min，70％乙腈；5
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15min，70％
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90％乙腈；15
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20min，95％乙腈。2.根据权利要求1所述的高效液相色谱分析方法，其特征在于，所述步骤(1)中，内标溶液的配制方法为：精密称取4
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叔丁基二苯硫醚10mg，加入体积比为1:1的二氯甲烷和环己烷的混合溶液进行溶解、稀释至50ml，摇匀，配制得到内标贮备液；量取所述内标贮备液5ml，再加入体积比为1:1的二氯甲烷和环己烷的混合溶液稀释至10...

【专利技术属性】
技术研发人员：李恒，晏菊姣，范晓磊，李克，陆海涛，
申请(专利权)人：武汉药品医疗器械检验所，
类型：发明
国别省市：