高效液相色谱法测定帕博西尼及其胶囊杂质的方法技术

本发明专利技术属于分析化学领域，具体涉及高效液相色谱法测定帕博西尼及其胶囊杂质的方法，该方法是采用Waters高效液相色谱仪，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱，流动相以有机酸或无机酸的水溶液为流动相A，以乙腈为流动相B，进行梯度洗脱。该方法可分离检测帕博西尼及其胶囊的杂质Ⅰ，同时分离检测帕博西尼及其胶囊的其他8种已知杂质，且利用本发明专利技术的方法还能分离检测帕博西尼及其胶囊的其他未知杂质，可以更简便，高效，准确的确保帕博西尼及其胶囊的质量可控，并最终确定产品的安全。并最终确定产品的安全。并最终确定产品的安全。

【技术实现步骤摘要】
高效液相色谱法测定帕博西尼及其胶囊杂质的方法


[0001]本专利技术属于分析化学领域，具体涉及用高效液相色谱法测定帕博西尼及其胶囊杂质的方法。

技术介绍

[0002]帕博西尼（Palbociclib），化学名为6
‑
乙酰基
‑8‑
环戊基
‑5‑
甲基
‑2‑
［［5
‑
( 1
‑
哌嗪基)
ꢀ‑2‑
吡啶基］氨基］吡啶并［2，3
‑
d］嘧啶
‑
7( 8H)
ꢀ‑
酮，其分子式为C
24
H
29
N7O2，分子量为447.54，CAS号为571190
‑
30
‑
2，其结构式见下式（a）化合物。
[0003][0004]帕博西尼是由辉瑞公司研发的一种口服细胞周期素依赖性激酶(CDKs)4和6抑制剂，用于治疗晚期乳腺癌的靶向药物。2015年2月3日，FDA加速批准上市，商品名为爱搏新。在帕博西尼的合成过程中，会产生一些相关的工艺杂质或降解杂质，这些杂质可能会由于去除不完全而影响原料的纯度和质量，而相关的降解杂质会影响帕博西尼及其胶囊的质量和稳定性，根据研究结果，将杂质Ⅰ及其他8种已知杂质在帕博西尼原料药及其胶囊中进行质量控制，因此，实现帕博西尼原料药及其胶囊杂质的分离和测定对帕博西尼原料药及其胶囊的生产和贮存具有重要的意义，杂质的结构式如下：
[0005][0006]目前对于帕博西尼及其胶囊杂质的分析检测方法在各国药典中均未收载，在袁铎等发表的文章“Palbociclib有关物质的分析及合成”中，并未提及对帕博西尼各杂质进行分离检测和含量测定的方法，其主要目的在于采用质谱、核磁的方法对提及的3个帕博西尼相关杂质进行结构鉴定，无法对帕博西尼的质量控制提供数据支持，与本专利技术目的不符；在许海群等发表的“帕博昔布胶囊的制备及其有关物质HPLC检测方法的建立”文章中，采用高效液相色谱法对帕博昔布胶囊相关的5个杂质进行了测定，该方法中以乙酸胺缓冲液为流动相A，乙腈为流动相B，进行梯度洗脱，经验证，该方法无法将上述杂质Ⅰ及其他8种已知杂质进行有效分离，各峰拖尾严重，灵敏度低，而且其未考虑原料药帕博西尼相关的杂质情况，无法保证对帕博昔布胶囊质量检测的可靠性。
[0007]因此，亟需提供一种帕博西尼原料药及其胶囊有关物质的高效液相色谱方法，以实现帕博西尼与有关物质之间的高效分离及灵敏度测定，从而为帕博西尼原料药及其胶囊的质量控制提供有力保障，实现人民用药安全、有效、质量可控。

技术实现思路

[0008]有鉴于此，本领域人员专利技术了一种高效液相色谱法测定帕博西尼及其胶囊杂质的方法，该方法能够实现在一个液相色谱系统中同时达到帕博西尼、杂质Ⅰ及其他8种已知杂质的有效分离和含量检测的目的，该方法分离度高，灵敏度良好，准确度良好，耐用性强，对实现帕博西尼及其胶囊质量控制具有实际意义。
[0009]为实现上述目的，本专利技术的技术方案为：高效液相色谱法测定帕博西尼及其胶囊杂质的方法，所述高效液相色谱法分析过程中采用的色谱柱是以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，流动相以有机酸或无机酸的水溶液为流动相A，以乙腈为流动相B，进行梯度洗脱，所述梯度洗脱方法为：0分钟至5分钟，流动相A为97%，流动相B为3%；5分钟至30分钟，流动相A线性减少至70%，流动相B线性增加至30%；30分钟至45分钟，流动相A线性减少至60%，流动相B线性增加至40%；45分钟至60分钟，流动相A线性减少至40%，流动相B线性增加至60%；60分钟至70分钟，流动相A线性减少至5%，流动相B线性增加至95%；70分钟至75分钟，流动相A线性增加至97%，流动相B线性减少至3%；75分钟至80分钟，流动相A维持97%，流动相B维持3%。
[0010]本专利技术所述的高效液相色谱法为反相液相色谱法，采用的色谱柱是以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，所述的十八烷基硅烷键合硅胶颗粒粒径为5
µ
m，色谱柱柱长为250mm，内径为4.6mm，优选Agilent ZORBAX Extend
‑
C18色谱柱。采用所述的色谱柱进行分离时，色谱柱适用的柱温范围为25
‑
40℃，优选35℃。
[0011]上述的方法中，所述的流动相A为有机酸或无机酸的水溶液。
[0012]上述的方法中，所述的有机酸为冰醋酸，甲酸或两种的混合物。所述的无机酸为磷酸，高氯酸或两种的混合物，优选磷酸。
[0013]上述的方法中，所述流动相A中有机酸或无机酸的浓度为0.02%
‑
0.1%，优选为0.05%。
[0014]上述的方法中，高效液相色谱法测定帕博西尼及其胶囊杂质的方法，当采用所述的高效液相色谱法，所述的流动相进行洗脱时，流动相的流速为0.8
‑
1.2ml/min，，优选为1.0ml/min。
[0015]上述方法中，进样量为5
‑
50
µ
l，优选10
µ
l。
[0016]洗脱后采用紫外检测器进行检测，检测波长为240
‑
260nm，优选250nm。
[0017]本专利技术的具体步骤为：分别量取溶剂，杂质混合溶液，原料供试品溶液，胶囊供试品溶液及对照溶液进样，通过帕博西尼对照品外标法计算供试品中各杂质的含量。
[0018]上述杂质混合溶液为：分别取杂质Ⅰ及其他8种杂质对照品约12.5mg，精密称定，置25ml量瓶中，加溶剂适量使溶解并定容至刻度，摇匀，作为杂质贮备液，上述各杂质贮备液分别量取0.3
‑
3ml置50ml量瓶中，用溶剂稀释至刻度，摇匀，作为系统适用液；上述溶剂为乙腈
‑
水
‑
高氯酸的体积比为50:50:0.05的混合溶液。
[0019]上述原料供试品溶液的配制：取帕博西尼供试品适量，精密称定，用溶剂溶解并稀释制成含帕博西尼浓度为1mg/ml的供试品溶液。
[0020]上述胶囊供试品溶液的配制：取帕博西尼胶囊内容物适量，精密称定，用溶剂溶解并稀释制成含帕博西尼浓度为1mg/ml的供试品溶液。
[0021]上述对照溶液的配制：取帕博西尼对照品适量，精密称定，用溶剂溶解并稀释制成含帕博西尼浓度为2
µ
g/ml的对照溶液；本专利技术具有明显的改进，通过上述技术方案，获得了理想的效果：1、本专利技术采用高效液相色谱法，线性梯度洗脱的方式，能够有效分离帕博西尼及其胶囊的杂质Ⅰ及其他8种已知杂质，同时可用于检测其他相关的未知杂质，与现有技术相比，本专利技术的方法更快捷，具有显著的进步性。
[0022]2、本专利技术所述的方法采用帕博西尼对照品外标法进行计算，可准确检测产品中各杂质的含量，保证检测结果的可靠性，同时该方法操作简便，缩短进样时间，提高了工作效率，为产品的放大生产及放行检本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1. 高效液相色谱法测定帕博西尼及其胶囊杂质的方法，其特征在于，采用十八烷基硅烷键合硅胶为填料的色谱柱，流动相以有机酸或无机酸的水溶液为流动相A，以乙腈为流动相B，检测波长为240
‑
260nm，柱温25
‑
40℃，流速为0.8
‑
1.2ml/min，进样量为5
‑
50
µ
l，采用梯度洗脱；该方法可分离检测帕博西尼及其胶囊的杂质，包括杂质Ⅰ及其他8种已知杂质帕博西尼杂质Ⅰ杂质1杂质2杂质3杂质4杂质5杂质6杂质7杂质8。2.根据权利要求1所述的高效液相色谱法测定帕博西尼及其胶囊杂质的方法，其特征在于，色谱柱填充剂的颗粒粒径为5
µ
m，色谱柱柱长为250mm，内径为4.6mm。3. 根据权利要求1
‑
2任一项所述的高效液相色谱法测定帕博西尼及其胶囊杂质的方法，其特征在于，色谱柱为Agilent ZORBAX Extend
‑
C18色谱柱。4.根据权利要求1所述的高效液相色谱法测定帕博西尼及其胶囊杂质的方法，其特征在于，梯度洗脱程序如下：0分钟至5分钟，流动相A为95%
‑
99%，流动相B为1%
‑
5%；5分钟至30分钟，流动相A线性减少至68%
‑
72%，流动相B线性增加至28%
‑
32%；30分钟至45分钟，流动相A
线性减少至58%
‑
62%，流动相B线性增加至38%
‑
42%；45分钟至60分钟，流动相A线性减少至38%
‑
42%，流动相B线性增加至58%
‑
62%；60分钟至70分钟，流动相A线性减少至3%
‑
7%，流动相B线性增加至93%
...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘亚方，杨琪，王金虎，姜鹰雁，刘燕，张治云，王颖超，鲜婧，刘彩霞，王静，
申请(专利权)人：山东省药学科学院，
类型：发明
国别省市：