基于HPLC-DAD结合UPLC-MS/MS法检测18种中药非法染色色素的方法技术

本发明专利技术涉及基于HPLC

【技术实现步骤摘要】
基于HPLC
‑
DAD结合UPLC
‑
MS/MS法检测18种中药非法染色色素的方法


[0001]本专利技术属于中药分析
，具体涉及基于HPLC
‑
DAD结合UPLC
‑
MS/MS法检测18种中药非法染色色素的方法。

技术介绍

[0002]现行非法染色补充检验方法多以70％乙醇(乙醇/甲醇)等作为提取溶剂，采用TLC初筛、HPLC
‑
DAD确证的筛查模式，针对的多为中药材(饮片)中1种或少数几种色素，检测种类远低于市面上可能的非法染色剂种类，在日常监督检验中易造成漏检。此外，虽然TLC筛查及HPLC
‑
DAD确证模式在中药非法染色检测中应用较为普遍，但其分辨力及检测灵敏度有一定局限性，也不适用于高通量筛查。

技术实现思路

[0003]本专利技术针对现有技术中存在的技术问题，提供基于HPLC
‑
DAD结合UPLC
‑
MS/MS法检测18种中药非法染色色素的方法，有效解决现有非法染色补充检验方法存在的检测种类较少，分辨力和检测灵敏度较差，以及不适用于高通量筛查等问题中的至少一个。
[0004]本专利技术解决上述技术问题的技术方案如下：
[0005]基于HPLC
‑
DAD结合UPLC
‑
MS/MS法检测18种中药非法染色色素的方法，包括如下步骤：
[0006]S1.HPLC
‑
DAD筛查：
[0007]1)分别配制10种水溶性色素(S组)的混合对照品溶液、8种偏脂溶性色素(Z组)的混合对照品溶液以及供试品溶液；
[0008]2)分别对S组混合对照品溶液、Z组混合对照品溶液及供试品溶液进行高效液相色谱检测，得到对照品HPLC色谱图与供试品HPLC色谱图；
[0009]3)将供试品HPLC色谱图与对照品HPLC色谱图进行比对，得到供试品中所含色素；
[0010]S2.UPLC
‑
MS/MS确证：
[0011]1)分别配制10种水溶性色素(S组)的混合对照品溶液、8种偏脂溶性色素(Z组)的混合对照品溶液以及供试品溶液；
[0012]2)分别对S组混合对照品溶液、Z组混合对照品溶液及供试品溶液进行超高效液相色谱
‑
串联质谱检测；
[0013]3)对检测结果进行分析，确定各色素结构及各色素相对保留时间，得到对照品UPLC
‑
MS/MS提取离子流色谱图与供试品UPLC
‑
MS/MS提取离子流色谱图；
[0014]4)将供试品UPLC
‑
MS/MS提取离子流色谱图与对照品UPLC
‑
MS/MS提取离子流色谱图进行比对，确证供试品中所含色素。
[0015]在上述技术方案的基础上，本专利技术还可以做如下改进。
[0016]进一步，S1中，供试品溶液的配制过程为：向研细后的药材或中成药中加入10％乙
醇(检查水溶性色素S组)或70％乙醇溶液(检查偏脂溶性色素Z组)，超声处理30min，摇匀，滤过，取续滤液，即得；其中，供试品与乙醇的质量体积比(g/ml)为1:10。
[0017]进一步，S1中，S组混合对照品溶液的配制过程为：取10种水溶性色素对照品适量，加10％乙醇溶液，制成每1ml含柠檬黄、新红、苋菜红、胭脂红、日落黄、诱惑红、偶氮玉红(酸性红)、酸性红73、金橙Ⅱ和赤藓红色素各20μg的混合溶液；
[0018]Z组混合对照品溶液的配制过程为：取8种偏脂溶性色素对照品适量，加70％乙醇溶液，制成每1ml含酸性黄36、金胺O、罗丹明B、碱性橙2、苏丹红Ⅰ和苏丹红Ⅲ各10μg,含苏丹红Ⅳ20μg，含808猩红25μg的混合溶液。
[0019]进一步，S1中，色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相：S组采用甲醇(A)
‑
0.02mol/L乙酸铵溶液(B)为流动相进行梯度洗脱，Z组采用乙腈(A)
‑
0.02mol/L乙酸铵溶液(B)为流动相进行梯度洗脱；流速：0.9
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1.1ml/min；柱温：25℃
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35℃；进样体积：5μl(S组)、10μl(Z组)；检测波长：430nm(柠檬黄、酸性黄36、金胺O、碱性橙2)、510nm(新红、苋菜红、胭脂红、日落黄、诱惑红、偶氮玉红、酸性红73、金橙Ⅱ、赤藓红、罗丹明B、苏丹红Ⅰ、808猩红、苏丹红Ⅲ、苏丹红Ⅳ)。
[0020]进一步，S1中，色谱检测条件：流速为1.0ml/min；柱温为30℃。
[0021]进一步，S1中，S组的梯度洗脱程序为：0
‑
8min，8％
→
12％A；8
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20min，12％
→
55％A；20
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28min，55％
→
70％A；28
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30min，70％
→
8％A；30
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35min，8％A；Z组的梯度洗脱程序为：0
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8min，20％
→
60％A；8
‑
15min，60％A；15
‑
17min，60％
→
90％A；17
‑
43min，90％
→
92％A；43
‑
45min，92
→
20％A；45
‑
47min，20％A。
[0022]进一步，S2中，供试品溶液的配制过程为：取S1中的供试品溶液稀释5倍即得。
[0023]进一步，S2中，S组混合对照品溶液的配制过程为：取10种水溶性色素对照品适量，加10％乙醇溶液，制成每1ml含柠檬黄、新红、苋菜红、胭脂红、日落黄、诱惑红、偶氮玉红(酸性红)、酸性红73、金橙Ⅱ和赤藓红色素各2μg的混合溶液；
[0024]Z组混合对照品溶液的配制过程为：取8种偏脂溶性色素对照品适量，加70％乙醇溶液，制成每1ml含酸性黄36、金胺O、罗丹明B、碱性橙2、苏丹红Ⅰ、苏丹红Ⅲ、苏丹红Ⅳ和808猩红各0.5μg的混合溶液。
[0025]进一步，S2中，色谱检测条件为：色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相：S组采用甲醇(A)
‑
0.02mol/L乙酸铵溶液(B)为流动相进行梯度洗脱，Z组采用乙腈(A)
‑
0.02mol/L乙酸铵溶液(B)为流动相进行梯度洗脱；流速：0.2ml/min；柱温：35℃；进样体积：2μl；
[0026]质谱检测条件为：离子源：ESI；扫描类型：多反应监测(MRM)；极性：负离子(S组)或正离子(Z组)；毛细管电压：3.0kV(S组)或5.0kV(Z组)；离子源温度：150℃；脱溶剂温度(TEM)：500℃本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.基于HPLC
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DAD结合UPLC
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MS/MS法检测18种中药非法染色色素的方法，其特征在于，包括如下步骤：S1.HPLC
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DAD筛查：1)分别配制10种水溶性色素(S组)的混合对照品溶液、8种偏脂溶性色素(Z组)的混合对照品溶液以及供试品溶液；2)分别对S组混合对照品溶液、Z组混合对照品溶液及供试品溶液进行高效液相色谱检测，得到对照品HPLC色谱图与供试品HPLC色谱图；3)将供试品HPLC色谱图与对照品HPLC色谱图进行比对，得到供试品中所含色素；S2.UPLC
‑
MS/MS确证：1)分别配制10种水溶性色素(S组)的混合对照品溶液、8种偏脂溶性色素(Z组)的混合对照品溶液以及供试品溶液；2)分别对S组混合对照品溶液、Z组混合对照品溶液及供试品溶液进行超高效液相色谱
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串联质谱检测；3)对检测结果进行分析，确定各色素结构及各色素相对保留时间，得到对照品UPLC
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MS/MS提取离子流色谱图与供试品UPLC
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MS/MS提取离子流色谱图；4)将供试品UPLC
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MS/MS提取离子流色谱图与对照品UPLC
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MS/MS提取离子流色谱图进行比对，确证供试品中所含色素。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，S1中，供试品溶液的配制过程为：向研细后的药材或中成药中加入10％乙醇(检查水溶性色素S组)或70％乙醇溶液(检查偏脂溶性色素Z组)，超声处理30min，摇匀，滤过，取续滤液，即得；其中，供试品与乙醇的质量体积比(g/ml)为1:10。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，S1中，S组混合对照品溶液的配制过程为：取10种水溶性色素对照品适量，加10％乙醇溶液，制成每1ml含柠檬黄、新红、苋菜红、胭脂红、日落黄、诱惑红、偶氮玉红(酸性红)、酸性红73、金橙Ⅱ和赤藓红色素各20μg的混合溶液；Z组混合对照品溶液的配制过程为：取8种偏脂溶性色素对照品适量，加70％乙醇溶液，制成每1ml含酸性黄36、金胺O、罗丹明B、碱性橙2、苏丹红Ⅰ和苏丹红Ⅲ各10μg,含苏丹红Ⅳ20μg，含808猩红25μg的混合溶液。4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，S1中，色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相：S组采用甲醇(A)
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0.02mol/L乙酸铵溶液(B)为流动相进行梯度洗脱，Z组采用乙腈(A)
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0.02mol/L乙酸铵溶液(B)为流动相进行梯度洗脱；流速：0.9
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1.1ml/min；柱温：25℃
‑
35℃；进样体积：5μl(S组)、10μl(Z组)；检测波长：430nm(柠檬黄、酸性黄36、金胺O、碱性橙2)、510nm(新红、苋菜红、胭脂红、日落黄、诱惑红、偶氮玉红、酸性红73、金橙Ⅱ、赤藓红、罗丹明B、苏丹红Ⅰ、808猩红、苏丹红Ⅲ、苏丹红Ⅳ)。5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，S1中，色谱检测条件：流速为1.0ml/min；柱温为30℃。6.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，S1中，S组的梯度洗脱程序为：0
‑
8min，8％
→
12％A；8
‑
...

【专利技术属性】
技术研发人员：宋德芳，范晓磊，陈艳霞，李恒，余平，刘亚丽，王婧，喻悦，吴健鸿，聂小春，
申请(专利权)人：武汉药品医疗器械检验所，
类型：发明
国别省市：