检测富马酸丙酚替诺福韦原料药中基因毒性杂质含量的方法技术

本发明专利技术公开了一种检测富马酸丙酚替诺福韦原料药中基因毒性杂质含量的方法，所述基因毒性杂质包括（R）

【技术实现步骤摘要】
检测富马酸丙酚替诺福韦原料药中基因毒性杂质含量的方法


[0001]本专利技术涉及药物分析
，特别地，涉及一种检测富马酸丙酚替诺福韦原料药中基因毒性杂质含量的方法。

技术介绍

[0002]乙型肝炎病毒感染为世界性传染病，富马酸丙酚替诺福韦的开发为临床治疗乙型肝炎病毒感染提供了强有力的疗效，也被称为“历史上最强的乙型肝炎药物。
[0003]富马酸丙酚替诺福韦原料药在生产过程中可能引入原料、副产物等有机杂质，在生产、贮藏或运输中也会产生降解杂质，且由于其自身含有嘌呤结构、苯酚结构，亦会产生基因毒性杂质，因此对原料药的质量把控极其重要，其分子式为C
21
H
29
N6O5P
•
（C4H4O4），分子量为534.50，结构式如下：
[0004]药物中的基因毒性杂质由于直接或间接损伤细胞DNA，产生基因突变，存在潜在的致癌性，近年来受到广泛的关注。越来越多的药企把基因毒性杂质研究作为药品研究中的关键核心任务。人用药品注册技术要求国际协调会规定，具备潜在基因毒性的结构物质需要对其基因毒性进行评估并制定合理限度。本品制剂为富马酸丙酚替诺福韦片，最大日服剂量为25mg（以丙酚替诺福韦计），故致突变杂质限度均按照指导原则ICH M7依据TTC（1.5μg/最大日服剂量/天）计算，得出富马酸丙酚替诺福韦原料药中含（R）
ꢀ‑9‑
（2
‑
氯丙基）腺嘌呤和苯醌均不得过60ppm。
[0005]苯酚是富马酸丙酚替诺福韦的降解杂质，且在稳定性期间苯酚是其主要降解产物之一，苯酚被氧化可产生苯醌，因此原料药中存在生成苯醌的风险，苯醌是一种警示结构，存在潜在的致癌性，其分子式为，结构式如下：
[0006]（R）
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[2
‑
（苯氧基磷酰甲氧基）
‑
丙基]腺嘌呤是合成富马酸丙酚替诺福韦的中间体，也是其降解杂质，在合成中与氯化亚砜试剂反应生成（R）
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（2
‑
氯丙基）腺嘌呤，因该结构中含有卤代烃警示结构，存在潜在的致癌性，其结构式如下：
[0007]现有技术中并未对富马酸丙酚替诺福韦原料药中的上述基因毒性杂质的检测进行研究，因此开发一种检测简单、灵敏度高、准确度高的富马酸丙酚替诺福韦原料药中基因毒性杂质含量的方法，具有非常重要的社会意义和经济效益。

技术实现思路

[0008]本专利技术提供了一种检测富马酸丙酚替诺福韦原料药中基因毒性杂质含量的方法，以解决现有技术无法对（R）
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（2
‑
氯丙基）腺嘌呤和苯醌的含量进行准确的定量检测的技术问题。
[0009]本专利技术提供一种检测富马酸丙酚替诺福韦原料药中基因毒性杂质含量的方法，所述基因毒性杂质包括（R）
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（2
‑
氯丙基）腺嘌呤和苯醌，所述基因毒性杂质的检测方法包括如下步骤：S1、配置溶液：将（R）
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（2
‑
氯丙基）腺嘌呤和苯醌用第一稀释剂配置成（R）
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（2
‑
氯丙基）腺嘌呤和苯醌的浓度均为0.12
µ
g/mL～0.18
µ
g/mL的混合溶液，所述混合溶液为对照品溶液；取富马酸丙酚替诺福韦原料药，用第二稀释剂配置成浓度为2mg/mL～3mg/mL的供试品溶液，其中，所述第一稀释剂为乙腈水溶液；所述第二稀释剂为醋酸铵溶液；S2、用液相色谱法对对照品溶液和供试品溶液进行检测，记录色谱图，检测条件如下：色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱；流动相A：浓度为0.018~0.022mol/L的醋酸铵溶液；流动相B：乙腈；洗脱方式：梯度洗脱；S3、按照外标法以峰面积计算供试品溶液中（R）
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（2
‑
氯丙基）腺嘌呤和苯醌的含量。
[0010]进一步地，步骤S2所述液相色谱中的检测波长为260nm。
[0011]进一步地，步骤S2流动相A和流动相B的流速均为0.9~1.1ml/min。
[0012]进一步地，步骤S2所述液相色谱中的柱温为25~30℃。
[0013]进一步地，步骤S2进样室温度为2~8℃。
[0014]进一步地，步骤S2中所述醋酸铵溶液的pH值范围为5.5~6.8。
[0015]进一步地，步骤S1中还包括空白溶液的配置，所述空白溶液包括第一稀释剂和第二稀释剂。
[0016]进一步地，S1中所述混合溶液的制备方法包括：取苯醌，用第一稀释剂将其配置成浓度为0.6 mg/mL～0.9mg/mL的苯醌杂质储备
液；称取（R）
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（2
‑
氯丙基）腺嘌呤，用第一稀释剂将其配置成浓度为0.6 mg/mL～0.9mg/mL的（R）
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（2
‑
氯丙基）腺嘌呤杂质储备液；称取所述苯醌杂质储备液和所述（R）
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（2
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氯丙基）腺嘌呤杂质储备液，用第一稀释剂将两者配置成杂质混合储备液，再用第一稀释剂将所述杂质混合储备液稀释至（R）
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（2
‑
氯丙基）腺嘌呤和苯醌的浓度均为0.12
µ
g/mL～0.18mg/mL的混合溶液。
[0017]进一步地，所述计算供试品溶液中（R）
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（2
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氯丙基）腺嘌呤和苯醌的含量的计算公式为：；其中，杂质含量（%）：（R）
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（2
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氯丙基）腺嘌呤或苯醌的质量百分含量；A
供试
：供试品溶液中杂质的峰面积，单位为；A
对照
：对照品溶液中杂质的峰面积，单位为；W
供试
：供试品称样量，单位为mg；W
对照
：对照品称样量，单位为mg。
[0018]进一步地，所述梯度洗脱包括：在开始洗脱的0~15min，所述流动相A在所述流动相A与所述流动相B总体积中的百分含量由95%降至80%；在洗脱进行中的第15~35min，所述流动相A在所述流动相A与所述流动相B总体积中的百分含量由80%降至60%；在洗脱进行中的第35~50 min，所述流动相A在所述流动相A与所述流动相B总体积中的百分含量由60%降至30%；在洗脱进行中的第50~55 min，所述流动相A在所述流动相A与所述流动相B总体积中的百分含量维持30%；在洗脱进行中的第55~56min，所述流动相A在所述流动相A与所述流动相B总体积中的百分含量由30%上升至95%。
[0019]本专利技术具有以下有益效果：（1）本申请提供的检测方法系统适用性良好：对照品溶液中苯醌和（R）
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（2
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氯丙基）腺嘌呤的理论塔板数分别为21154和87786（均大于3000）， 拖尾因子分别为1.本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种检测富马酸丙酚替诺福韦原料药中基因毒性杂质含量的方法，其特征在于，所述基因毒性杂质包括（R）
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氯丙基）腺嘌呤和苯醌，所述基因毒性杂质的检测方法包括如下步骤：S1、配置溶液：将（R）
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（2
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氯丙基）腺嘌呤和苯醌用第一稀释剂配置成（R）
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氯丙基）腺嘌呤和苯醌的浓度均为0.12
µ
g/mL～0.18
µ
g/mL的混合溶液，所述混合溶液为对照品溶液；取富马酸丙酚替诺福韦原料药，用第二稀释剂配置成浓度为2 mg/mL～3
µ
g/mL的供试品溶液，其中，所述第一稀释剂为乙腈水溶液；所述第二稀释剂为醋酸铵溶液；S2、用液相色谱法对对照品溶液和供试品溶液进行检测，记录色谱图，检测条件如下：色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱；流动相A：浓度为0.018~0.022mol/L的醋酸铵溶液；流动相B：乙腈；洗脱方式：梯度洗脱；S3、按照外标法以峰面积计算供试品溶液中（R）
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氯丙基）腺嘌呤和苯醌的含量。2.根据权利要求1所述的检测富马酸丙酚替诺福韦原料药中基因毒性杂质含量的方法，其特征在于，步骤S2所述液相色谱中的检测波长为260nm。3.根据权利要求1所述的检测富马酸丙酚替诺福韦原料药中基因毒性杂质含量的方法，其特征在于，步骤S2流动相A和流动相B的流速均为0.9~1.1ml/min。4.根据权利要求1所述的检测富马酸丙酚替诺福韦原料药中基因毒性杂质含量的方法，其特征在于，步骤S2所述液相色谱中的柱温为25~30℃。5.根据权利要求1所述的检测富马酸丙酚替诺福韦原料药中基因毒性杂质含量的方法，其特征在于，步骤S2进样室温度为2~8℃。6.根据权利要求1所述的检测富马酸丙酚替诺福韦原料药中基因毒性杂质含量的方法，其特征在于，步骤S2中所述醋酸铵溶液的pH值范围为5.5~6.8。7.根据权利要求1所述的检测富马酸丙酚替诺福韦原料药中基因毒性杂质含量的方法，其特征在于，步骤S1中还包括空白溶液的配置，所述空白溶液包括第一稀释剂和第二稀释剂。8.根据权利要求1所述的检测富马酸丙酚替诺福韦原料药中基因毒性杂质含量的方法，其特征在于，S1中...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵晓娅，蒋艳，刘卫国，黎鸠鸠，
申请(专利权)人：湖南一格制药有限公司，
类型：发明
国别省市：