基于链置换扩增和引物交换反应无标记检测miR-21的荧光生物传感器制造技术

本文公开了一种基于链置换扩增(SDA)和引物交换反应(PER)级联扩增的方法用于miR

【技术实现步骤摘要】
基于链置换扩增和引物交换反应无标记检测miR
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21的荧光生物传感器


[0001]本专利技术属于生物化学分析方法，具体涉及一种基于链置换扩增和引物交换反应级联扩增的无标记检测miR
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21的荧光生物传感器。
[0002]MicroRNAs(miRNAs)是一类内源性小RNA分子，参与转录后基因表达调控，miRNAs的异常表达与人类癌症的发生、肿瘤分期和肿瘤治疗密切有关。因此，miRNAs被认为是一种潜在的生物标志物，定量分析miRNAs的表达能够更好地了解它们在癌症中的作用，从而实现对癌症的早期诊断和抗癌靶向药物的研发。然而，由于miRNAs家族成员间序列高度同源及其在总RNA样本中低丰度，易降解等特点，使得它们的检测十分困难。目前常用的检测miRNAs的方法主要有实时聚合酶链反应(qPCR)、微阵列和Northern印迹。这些方法虽然能够有效检测到miRNAs，但也存在一定的局限性，如引物设计复杂和成本较高等。越来越多的检测方法采用等温扩增方法取代传统的检测方法，已开发的等温扩增技术常存在灵敏度不理想、核酸序列设计本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.基于链置换扩增和引物交换反应无标记检测miR
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21的荧光生物传感器，其特征在于，所述生物传感器包括链置换扩增(SDA)模板H1、引物交换反应(PER)模板H2、miR
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21、Bst DNA聚合酶、Nb.BbvCI内切酶和硫磺素T(ThT)。2.如权利要求1所述的生物传感器，其特征在于，所述模板H2的3
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末端修饰有倒置的T，防止非特异性扩增；H2中间位置的CG碱基对还进行了羟甲基化修饰，作为终止位点。3.如权利要求1所述的生物传感器，其特征在于，所述生物传感器还包括dNTPs，所述dNTPs由四种去氧核苷酸三磷酸即dATP、dCTP、dGTP和dTTP按等比例混合而组成。4.一种检测miR
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21的方法，其特征在于，所述方法包括采用权利要求1
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3任一项所述生物传感器进行检测。5.如权利要求4所述的方法，其特征在于，所述方法包括：S1、用含Mg
2+
的1*TE缓冲液将SDA模板H1和PER模板H2退火形成发夹；S2、把待测样品加入反应溶液I中，进行miR
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21识别以及链置换扩增(SDA)和引物交换反应(PER)级联扩增反应，产生大量G
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四链体片段，然后高温灭活处理；S3、向步骤S2反应后的溶液中加入ThT染料，得到嵌入ThT的大量G
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四链体...

【专利技术属性】
技术研发人员：向华，杜昱旻，祁银肖，
申请(专利权)人：重庆医科大学国际体外诊断研究院，
类型：发明
国别省市：