【技术实现步骤摘要】
用于检测玉米植物DBN9229的核酸序列及其检测方法
[0001]本专利技术涉及植物分子生物学领域,特别是农业生物技术研究中的转基因农作物育种领域。具体地,本专利技术涉及昆虫抗性和草铵膦除草剂耐受性的转基因玉米事件DBN9229和用于检测生物样品中是否包含特定转基因玉米事件DBN9229的核酸序列及其检测方法。
技术介绍
[0002]玉米(Zea mays L.)在世界上很多地区都是主要的粮食作物。生物技术已经应用于玉米以改善其农艺性状和品质。在玉米生产中昆虫抗性是一项重要的农艺性状,特别是对鳞翅目昆虫的抗性,例如玉米螟、棉铃虫、东方黏虫、小地老虎、草地贪夜蛾等。玉米对鳞翅目昆虫的抗性可以通过转基因的方法使鳞翅目昆虫的抗性基因在玉米植物中表达而获得。另一个重要的农艺性状是除草剂耐受性,如已有成功的玉米转化事件NK603、GA21等,美国等玉米主要种植区域已广泛种植。值得一提的是,草铵膦除草剂与草甘膦除草剂的作用机理不同,其为灭生性的触杀型除草剂,且可以作为一种有效管理草甘膦抗性杂草的手段。玉米对草铵膦除草剂的耐受性可以通过转基因的方法使草铵膦除草剂耐受型基因(如pat)在玉米植物中表达而获得。
[0003]已知外源基因在植物体内的表达受到它们的染色体位置的影响,可能是由于染色质结构(如异染色质)或转录调节元件(如增强子)接近整合位点。为此,通常需要筛选大量的事件才有可能鉴定出可以商业化的事件(即导入的目标基因得到最优表达的事件)。例如,在植物和其他生物体中已经观察到导入基因的表达量在事件间可能有很大差异;在表
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种具有以下核酸序列的核酸分子,其特征在于,所述核酸序列具有SEQ ID NO:3或其互补序列第1
‑
487位中至少11个连续的核苷酸和SEQ IDNO:3或其互补序列第488
‑
1105位中至少11个连续的核苷酸、和/或SEQ IDNO:4或其互补序列第1
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397位中至少11个连续的核苷酸和SEQ ID NO:4或其互补序列第398
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860位中至少11个连续的核苷酸;优选地,所述核酸序列具有SEQ ID NO:3或其互补序列第1
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487位中22
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25个连续的核苷酸和SEQ ID NO:3或其互补序列第488
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1105位中22
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25个连续的核苷酸、和/或SEQ ID NO:4或其互补序列第1
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397位中22
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25个连续的核苷酸和SEQ ID NO:4或其互补序列第398
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860位中22
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25个连续的核苷酸;优选地,所述核酸序列包含SEQ ID NO:1或其互补序列、和/或SEQ IDNO:2或其互补序列;优选地,所述核酸序列包含SEQ ID NO:3或其互补序列、和/或SEQ IDNO:4或其互补序列。2.根据权利要求1所述的核酸分子,其特征在于,所述核酸序列包含SEQ ID NO:5或其互补序列。3.一种检测样品中转基因玉米事件DBN9229的DNA存在的方法,其特征在于,包括:使待检测样品与用于扩增目标扩增产物的至少两种引物在核酸扩增反应中接触;进行核酸扩增反应;和检测所述目标扩增产物的存在;所述目标扩增产物包含权利要求1或2所述核酸序列;优选地,所述目标扩增产物包含SEQ ID NO:1或其互补序列、SEQ ID NO:2或其互补序列、SEQ ID NO:6或其互补序列、和/或SEQ ID NO:7或其互补序列。4.根据权利要求3所述检测样品中转基因玉米事件DBN9229的DNA存在的方法,其特征在于,所述两种引物包括SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:8和SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:2的互补序列和SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:10和SEQ ID NO:11、或者SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2的互补序列。5.一种检测样品中转基因玉米事件DBN9229的DNA存在的方法,其特征在于,包括:使待检测样品与探针接触,所述探针包含权利要求1所述核酸序列;优选地,所述探针包含SEQ ID NO:1或其互补序列、SEQ ID NO:2或其互补序列、SEQ ID NO:6或其互补序列、和/或SEQ ID NO:7或其互补序列;使所述待检测样品和所述探针在严格杂交条件下杂交;和检测所述待检测样品和所述探针的杂交情况。6.根据权利要求5所述检测样品中转基因玉米事件DBN9229的DNA存在的方法,其特征在于,至少一个所述探针用至少一种荧光基团标记。7.一种检测样品中转基因玉米事件DBN9229的DNA存在的方法,其特征在于,包括:使待检测样品与标记物核酸分子接触,所述标记物核酸分子包括权利要求1所述核酸序列;优选地,所述标记物核酸分子包括选自以下的至少一种:SEQ ID NO:1或其互补序列、SEQ ID NO:2或其互补序列、和/或SEQ ID NO:6
‑
11或其互补序列;使所述待检测样品和所述标记物核酸分子在严格杂交条件下杂交;检测所述待检测样品和所述标记物核酸分子的杂交情况,进而通过标记物辅助育种分
析以确定昆虫抗性和/或除草剂耐受性与标记物核酸分子在遗传学上是连锁的。8.一种DNA检测试剂盒,其特征在于,包括至少一个DNA分子,所述DNA分子包含权利要求1所述核酸序列,其可以作为对于转基因玉米事件DBN9229或其后代具有特异性的DNA引物之一或探针;优选地,所述DNA分子包含SEQ ID NO:1或其互补序列、SEQ ID NO:2或其互补序列、SEQ IDNO:6或其互补序列、和/或SEQ ID NO:7或其互补序列。9.一种保护玉米植物免于昆虫侵袭的...
【专利技术属性】
技术研发人员:王利君,刘海利,张铭,陶梦梦,于彩虹,王诚,
申请(专利权)人:北京大北农生物技术有限公司,
类型:发明
国别省市:
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