一种鉴别栎叶枇杷的引物组、试剂盒及其应用制造技术

本发明专利技术属于分子生物学技术领域，具体涉及一种鉴别栎叶枇杷的引物组、试剂盒及其应用。本发明专利技术所述引物组是从枇杷转录组数据中的287对高密度SSR引物中筛选得到的，利用所述引物组进行PCR扩增后，当PCR扩增产物在200bp～300bp长度内同时显示有2个条带时，则为栎叶枇杷；当PCR扩增产物在200bp～300bp长度内显示有1个条带时，则所述待测枇杷为非栎叶枇杷。因此，本发明专利技术提供的引物组能快速、准确地将栎叶枇杷和非栎叶枇杷种质资源进行区分，对我国栎叶枇杷种质资源的保护和利用具有重要意义。叶枇杷种质资源的保护和利用具有重要意义。叶枇杷种质资源的保护和利用具有重要意义。

【技术实现步骤摘要】
一种鉴别栎叶枇杷的引物组、试剂盒及其应用


[0001]本专利技术属于分子生物学
，具体涉及一种鉴别栎叶枇杷的引物组、试剂盒及其应用。

技术介绍

[0002]栎叶枇杷(EriobotryaprinoidesRehd.etWils.)是枇杷属中耐寒性极强的一个种，其花期晚，高抗叶斑病，果实和叶片中抗氧化还原能力强，是优良的枇杷砧木和晚花育种亲本。
[0003]四川大渡河流域是世界栽培枇杷的起源地，同时也是枇杷种质资源富集地区。但在长期的引种和交流中，枇杷种质资源较为混杂，甚至出现了将枇杷野生种质和地方品种的实生种苗当做栎叶枇杷砧木进行销售的乱象，这不仅造成苗木市场混乱，还导致优良砧木无法得到保护和发掘。因此，如何快速、准确地对栎叶枇杷进行鉴定是实现栎叶枇杷种质资源保护、推广抗性砧木和选育晚花品种的关键所在。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的在于提供一种鉴别栎叶枇杷的引物组、试剂盒及其应用，所述引物组能快速、准确地将栎叶枇杷和非栎叶枇杷种质资源进行区分。
[0005]本专利技术提供了一种鉴别栎叶枇杷的引物组，所述引物组包括上游引物和下游引物；
[0006]所述上游引物的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示；
[0007]所述下游引物的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示。
[0008]本专利技术提供了一种鉴别栎叶枇杷的试剂盒，所述试剂盒包括鉴别栎叶枇杷的引物组和PCR直扩预混液。
[0009]优选的，所述PCR直扩预混液包括DNA聚合酶、dNTPs和Mg
2+
。
[0010]优选的，所述引物组中上游引物和下游引物浓度分别为10μM。
[0011]本专利技术提供了鉴别栎叶枇杷的引物组或鉴别栎叶枇杷的试剂盒在鉴别栎叶枇杷种质中的应用。
[0012]本专利技术还提供了一种鉴别栎叶枇杷的方法，包括如下步骤：以待测枇杷的基因组DNA为模板，利用鉴别栎叶枇杷的引物组对所述基因组DNA进行PCR扩增，得到PCR扩增产物；
[0013]对所述PCR扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳，当所述PCR扩增产物在200bp～300bp长度内同时显示有2个条带时，则所述待测枇杷为栎叶枇杷；
[0014]当PCR扩增产物在200bp～300bp长度内显示有1个条带时，则所述待测枇杷为非栎叶枇杷。
[0015]优选的，所述基因组DNA来源于待测枇杷的嫩叶、茎尖、根尖或韧皮部。
[0016]优选的，所述PCR扩增的反应体系以50μL计，包括：25.0μL的2
×
PCR直扩预混液，4.0μL的基因组DNA模板，2.0μL10μM的上游引物，2.0μL10μM的下游引物和17.0μL的超纯水。
[0017]优选的，所述PCR扩增的反应程序为：98℃预变性5min；98℃变性10s，59℃退火10s，72℃延伸20s，39次循环；72℃延伸5min。
[0018]有益效果：
[0019]本专利技术提供了一种鉴别栎叶枇杷的引物组，所述引物组包括上游引物和下游引物；所述上游引物的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示；所述下游引物的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示。该引物组是从枇杷转录组数据中的287对高密度SSR引物中筛选得到的，可快速、准确地将栎叶枇杷和非栎叶枇杷种质资源进行区分。
[0020]基于上述技术优势，本专利技术还提供了一种鉴别栎叶枇杷的方法，以待测枇杷的基因组DNA为模板，利用所述的引物组对所述基因组DNA进行PCR扩增，得到PCR扩增产物；对所述PCR扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳。当PCR扩增产物在200bp～300bp长度内同时显示有2个条带时，则为栎叶枇杷；当PCR扩增产物在200bp～300bp长度内显示有1个条带时，则所述待测枇杷为非栎叶枇杷。结合本专利技术的实施例结果可知，采用本专利技术提供的引物组和方法，能够特异性地将栎叶枇杷从国内外枇杷栽培种、地方种和杂交后代中鉴别出来，准确率达到100％。因此，本专利技术的技术方案对我国栎叶枇杷的种质资源保护、抗性砧木推广和晚花品种选育具有重要意义。
附图说明
[0021]为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍。
[0022]图1为实施例1中287对引物中134对引物扩增出的条带图第一部分(其中，图a～h为134对引物中的91对引物扩增出的条带)；
[0023]图2为实施例1中287对引物中134对引物扩增出的条带图第二部分(其中，图i～l为134对引物中的43对引物扩增出的条带)；
[0024]图3为实施例1中名称为EJ71的引物组对52份枇杷材料PCR扩增结果；
[0025]图4为实施例1中名称为EJ77的引物组对52份枇杷材料PCR扩增结果；
[0026]图5为实施例1中名称为EJ79的引物组对52份枇杷材料PCR扩增结果；
[0027]图6为实施例1中名称为EJ85的引物组对52份枇杷材料PCR扩增结果；
[0028]图7为实施例1中名称为EJ96的引物组对52份枇杷材料PCR扩增结果；
[0029]图8为实施例1中名称为EJ108的引物组对52份枇杷材料PCR扩增结果；
[0030]图9为实施例1中名称为EJ115的引物组对52份枇杷材料PCR扩增结果；
[0031]图10为实施例1中名称为EJ168的引物组对52份枇杷材料PCR扩增结果；
[0032]图11为实施例1中名称为EJ171的引物组对52份枇杷材料PCR扩增结果；
[0033]图12为实施例1中名称为EJ187的引物组对52份枇杷材料PCR扩增结果；
[0034]图13为实施例1中名称为EJ192的引物组对52份枇杷材料PCR扩增结果；
[0035]图14为实施例1中名称为EJ246的引物组对52份枇杷材料PCR扩增结果；
[0036]图15为实施例1中名称为EJ249的引物组对52份枇杷材料PCR扩增结果；
[0037]图16为实施例1中名称为EJ272的引物组对52份枇杷材料PCR扩增结果；
[0038]图17为实施例2中对鉴别栎叶枇杷的引物组进行扩增位点正确性验证。
具体实施方式
[0039]本专利技术提供了一种鉴别栎叶枇杷的引物组，所述引物组包括上游引物和下游引物；所述上游引物的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示；所述下游引物的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示。
[0040]在本专利技术中，所述上游引物的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示，具体为5
’‑
GGAGGCACGTAGGTATTGGA
‑3’
；所述下游引物的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示，具体为5
’‑
GATTCCAAAACGCAGACTCC
‑3’
。本专利技术所述引物组能够特异性地鉴别栎叶枇杷，将其与非栎叶枇杷种质资源进本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种鉴别栎叶枇杷的引物组，其特征在于，所述引物组包括上游引物和下游引物；所述上游引物的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示；所述下游引物的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示。2.一种鉴别栎叶枇杷的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求1所述的引物组和PCR直扩预混液。3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述PCR直扩预混液包括DNA聚合酶、dNTPs和Mg
2+
。4.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述引物组中上游引物和下游引物浓度分别为10μM。5.权利要求1所述的引物组或权利要求2～4任一项所述的试剂盒在鉴别栎叶枇杷种质中的应用。6.一种鉴别栎叶枇杷的方法，其特征在于，包括如下步骤：以待测枇杷的基因组DNA为模板，利用权利要求1中所述的引物组对所述基因组DNA进行PCR扩增，得到PCR扩增产物；对所述PCR...

【专利技术属性】
技术研发人员：宋海岩，孙淑霞，李春，赵科，江国良，陈栋，涂美艳，李靖，王玲利，何成勇，徐子鸿，银登贵，
申请(专利权)人：四川省农业科学院园艺研究所，
类型：发明
国别省市：