一种无异种T细胞培养基及其制备方法和应用技术

本发明专利技术提供了一种无异种T细胞培养基，包括有胰岛素样生长因子1、IL

【技术实现步骤摘要】
DLRRLEMYCAPLKPAKSA*；
[0010]IL
‑
2(白细胞介素
‑
2)的氨基酸序列如SEQ ID No.2所示：
[0011]TYRMQLLSCIALSLALVTNSAPTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINN YKNPKLTRMLTFKFYMPKKATELKHLQCLEEELKPLEEVLNLAQSKNFHLRP RDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFCQSIISTLT*；
[0012]IL17(白细胞介素
‑
17A)的氨基酸序列如SEQ ID No.3所示：
[0013]PRNPGCPNSEDKNFPRTVMVNLNIHNRNTNTNPKRSSDYYNRSTSPWN LHRNEDPERYPSVIWEAKCRHLGCINADGNVDYHMNSVPIQQEILVLRREPP HCPNSFRLEKILVSVGCTCVTPIVHHVA*。
[0014]可选地，上述的一种无异种T细胞培养基，所述培养基由胰岛素样生长因子1、IL
‑
2、IL17和DMEM培养基组成，各组分的含量按照培养基总体积1L计算为：胰岛素样生长因子1为40ng/ml，IL
‑
2为100ng/ml，IL17为60ng/ml，DMEM培养基补足至1L。
[0015]本专利技术的第二个专利技术点是提供了上述一种无异种T细胞培养基的制备方法，是将添加剂胰岛素样生长因子1、IL
‑r/>2和IL17通过0.20
‑
0.25μm的滤膜过滤除菌，再将其按照配比加入至DMEM培养基中，完全溶解后静置4
‑
6min，4℃震荡混匀1小时，最后通过0.20
‑
0.25μm的滤膜过滤除菌即可得到所述无异种T细胞培养基。
[0016]可选地，上述的制备方法，以培养基总体积1L计，是将添加剂胰岛素样生长因子1、IL
‑
2和IL17通过0.22μm的滤膜过滤除菌；先向DMEM培养基中加入配比量的IL
‑
2，完全溶解后静置4min；再加入配比量的胰岛素样生长因子1，完全溶解后静置6min；然后加入配比量的IL17，完全溶解后静置6min；4℃震荡混匀1小时，最后通过0.22μm的滤膜过滤除菌即可得到所述无异种T细胞培养基。
[0017]本专利技术的第三个专利技术点是提供了上述无异种T细胞培养基、上述制备方法制备得到的无异种T细胞培养基在提高T细胞培养效率、增加细胞活性中的应用。
[0018]本专利技术的第四个专利技术点是提供了一种T细胞的培养方法，所述培养方法是采用上述的无异种T细胞培养基、上述的制备方法制备得到的无异种T细胞培养基对T细胞进行培养。
[0019]可选地，上述的培养方法，包括以下步骤：
[0020]S1.培养基制备：
[0021]采用上述的制备方法制备得到无异种T细胞培养基；
[0022]S2.T细胞复苏：
[0023]将液氮罐中取出的细胞迅速放入37℃水浴中，摇动使其在1min内完全融化，然后在无菌条件下取出复苏T细胞；在1000rpm速度下离心5min，弃去上层液，加入2ml步骤S1所述的无异种T细胞培养基后接种于细胞培养摇瓶中，置于37℃，120rpm，8％二氧化碳浓度的摇床培养箱中培养；
[0024]S3.培养T细胞：
[0025]复苏次日750rpm离心2min弃上清，更换一次无异种T细胞培养基普通培养液，继续培养5天。
[0026]可选地，上述的培养方法，所述步骤S1中，是采用上述的制备方法制备得到无异种T细胞培养基。
[0027]可选地，上述的培养方法，所述步骤S2中，接种浓度为1
×
106cells/mL，接种体积
为20mL。
[0028]可选地，上述的培养方法，培养至分瓶时每个T25细胞培养瓶中T细胞密度为0.6
×
106cells/mL。
[0029]与现有技术相对比，本专利技术具有以下优点：
[0030]本专利技术提供的无异种T细胞培养基，配方明确，具有更好的一致性，可更高效的进行细胞实验。培养基中所添加的添加剂，是经过活性验证的免疫蛋白，同时，本专利技术还创新性的在DMEM培养基基础上加入了多种营养物质，如IL
‑
2、IL17和/或胰岛素样生长因子1，并确定了具体的加入量，加入量确定后，也就使得培养基中的各种成分浓度固定，提高了T细胞培养效率，增加细胞活性，保证后续实验的可重复性，降低了T细胞培养基的使用成本，而且避免动物血清蛋白的掺入，节省了T细胞培养基的配置工序和成本。
附图说明
[0031]图1为本专利技术实施例2
‑
10的试验组T细胞、对比例1
‑
4的T细胞和对照组T细胞的增殖数据对比图，其中，纵坐标为活性细胞总数1
×
106，横坐标为天数0
‑
4d。
[0032]图2为本专利技术实施例4、实施例2
‑
3的试验组T细胞增殖数据对比图，横纵坐标与图1相同。
[0033]图3为本专利技术实施例2
‑
3、实施例8
‑
10的试验组T细胞增殖数据对比图，横纵坐标与图1相同。
[0034]图4为本专利技术实施例8
‑
10、实施例5
‑
7的试验组T细胞增殖数据对比图，横纵坐标与图1相同。
[0035]图5为本专利技术实施例5
‑
7、对比例1
‑
4的试验组T细胞增殖数据对比图，横纵坐标与图1相同。
[0036]图6为本专利技术对比例1
‑
4的试验组T细胞和对照组T细胞的增殖数据对比图，横纵坐标与图1相同。
具体实施方式
[0037]为使本专利技术的目的、技术方案和优点更加清楚明了，下面对本专利技术进行进一步详细说明。但是应该理解，此处所描述仅仅用以解释本专利技术，并不用于限制本专利技术的范围。
[0038]除非另有定义，本文所使用的所有的技术术语和科学术语与属于本专利技术的
的技术人员通常理解的含义相同，本文中在本专利技术的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施例的目的，不是旨在限制本专利技术。本文中所使用的试剂和仪器均商购可得，所涉及的表征手段均可参阅现有技术中的相关描述，本文中不再赘述。
[0039]为了进一步了解本专利技术，下面结合最佳实施例对本专利技术作进一步的详细说明。
[0040]实施例1
[0041]一种无异种T细胞培养基，由基础培养基和添加剂组成，所述基础培养基为DMEM培养基，添加剂为胰岛素样生长因子1、IL
‑
2和/或IL17；各组分的含量，以培养基总体积1L计算，分别为：胰岛素样生长因子1为30
‑
50ng/ml、IL
‑
2为本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种无异种T细胞培养基，其特征在于，所述无异种T细胞培养由基础培养基和添加剂组成，所述基础培养基为DMEM培养基，所述添加剂为胰岛素样生长因子1、IL
‑
2和/或IL17；各组分的含量，以培养基总体积1L计算，分别为：胰岛素样生长因子1为30
‑
50ng/ml、IL
‑
2为90
‑
110ng/ml、IL17为50
‑
70ng/ml、DMEM培养基为补足至1L。2.根据权利要求1所述的一种无异种T细胞培养基，其特征在于，所述培养基由胰岛素样生长因子1、IL
‑
2、IL17和DMEM培养基组成，各组分的含量按照培养基总体积1L计算为：胰岛素样生长因子1为40ng/ml，IL
‑
2为100ng/ml，IL17为60ng/ml，DMEM培养基补足至1L。3.根据权利要求1或2所述的一种无异种T细胞培养基的制备方法，其特征在于，是将添加剂胰岛素样生长因子1、IL
‑
2和IL17通过0.20
‑
0.25μm的滤膜过滤除菌，再将其按照配比加入至DMEM培养基中，完全溶解后静置4
‑
6min，4℃震荡混匀1小时，最后通过0.20
‑
0.25μm的滤膜过滤除菌即可得到所述无异种T细胞培养基。4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，以培养基总体积1L计，是将添加剂胰岛素样生长因子1、IL
‑
2和IL17通过0.22μm的滤膜过滤除菌；先向DMEM培养基中加入配比量的IL
‑
2，完全溶解后静置4min；再加入配比量的胰岛素样生长因子1，...

【专利技术属性】
技术研发人员：胡静，
申请(专利权)人：南京碳硅人工智能生物医药技术研究院有限公司，
类型：发明
国别省市：