一种细胞内溶物与细胞因子组合物及体外高效扩增NK细胞的方法技术

本发明专利技术提供了一种细胞内溶物与细胞因子组合物及体外高效扩增NK细胞的方法，属于免疫学技术领域；提供一种细胞内溶物与细胞因子的组合物，所述组合物组分包括：细胞内溶物、细胞因子；所述细胞内溶物为K562细胞内溶物；所述细胞因子为：IL15和IL21；所述细胞内溶物与细胞因子组合物的制备方法，包括如下步骤：将细胞因子IL15和IL21使用1XPBS溶解配置母液，取配置的母液与上述方法制备的细胞内溶物混合制得组合物；一种用制备NK细胞的试剂盒；所述组合物在制备NK细胞中的应用；本发明专利技术采用一种细胞内溶物与细胞因子组合在体外高效扩增NK细胞，细胞生长活跃，增长速度快，细胞均质而透明，且具有更强的杀伤效果。且具有更强的杀伤效果。且具有更强的杀伤效果。

【技术实现步骤摘要】
一种细胞内溶物与细胞因子组合物及体外高效扩增NK细胞的方法


[0001]本专利技术属于免疫学
，具体涉及一种细胞内溶物与细胞因子组合物及体外高效扩增NK细胞的方法。

技术介绍

[0002]研究表明自然杀伤(Natural Killer，NK)细胞能诱导有效的抗肿瘤、抗感染免疫反应，无需预先刺激，通过使用穿孔素和颗粒酶以及其它机制，无MHC限制性杀伤肿瘤细胞和病毒感染细胞。异体NK细胞移植几乎不会导致移植物抗宿主病和细胞因子风暴，有望成为一种“现货型”的产品。临床结果显示，NK疗法治疗复发或难治性非霍奇金淋巴瘤患者，大多数产生了临床缓解，且未出现主要的毒性作用。
[0003]但是限制其临床应用的瓶颈之一为NK细胞在体外大量扩增较难。K562细胞或者工程化改造K562细胞可激活及扩增NK细胞，目前主要工艺为将K562细胞或者工程化改造K562细胞辐照处理，作为饲养层细胞与外周血单个核细胞共培养，培养后的终产品具有引入外源细胞的潜在风险，安全性较低。
[0004]细胞因子在调节NK细胞活性中起重要作用。其中IL
‑...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种细胞内溶物与细胞因子的组合物，其特征在于，所述组合物组分包括：细胞内溶物、细胞因子；所述细胞内溶物为K562细胞内溶物；所述细胞因子为：IL15和IL21。2.如权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述细胞因子IL15和IL21组成质量比例为(0.8～1.2):1；优选的，所述组合物中细胞内溶物的蛋白浓度为1～5mg/ml、细胞因子的浓度为30～100ug/ml。3.权利要求1中所述细胞内溶物的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)将K562细胞进行裂解，然后离心，获得上清液；(2)将步骤(1)获得的上清液进行3KD～10KD超滤，将超滤得到的物质利用磷酸缓冲溶液重悬，再进行3KD～10KD超滤，重复1次以上，超滤得到的物质为细胞内溶物。4.如权利要求3所述的方法，其特征在于，步骤(1)中，将K562细胞与裂解液混合进行裂解，然后离心10000r/min～12000r/min，10～15min，获得上清液；优选的，将K562细胞与裂解液混合，低温条件下进行裂解；优选的，将K562细胞与裂解液混合，在冰浴条件下进行裂解3
‑
5min中；优选的，裂解液的成分组成：50mM Tris，150mM NaCl，质量分数1％Triton X
‑
100，质量分数1％SDS；步骤(2)中，超滤是利用10KD超滤管；优选的，超滤是利用10KD超滤管，离心，4000g，1～2min；优选的，步骤(2)中，重复1
‑
2次；优选的，步骤(2)中，得到的细胞内溶物利用1XPBS溶液溶解，制备成不同浓度细胞内溶物溶液。5.权利要求1所述细胞内溶物与细胞因子组合物的制备方法，包括如下步骤：
①
将细胞因子IL15和IL21使用1...

【专利技术属性】
技术研发人员：徐娟，曹启龙，梁少帅，张文茜，韩国英，况斐，黄伟，朱钰婷，
申请(专利权)人：青岛海尔生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：