【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】T细胞制造组合物和方法
交叉引用
[0001]本申请要求享有申请日为2020年8月13日、申请号为63/065,327的美国临时申请的权益，其通过引用以其整体并入本文。
技术介绍
[0002]肿瘤疫苗通常由肿瘤抗原和免疫刺激分子(例如佐剂、细胞因子或TLR配体)组成，它们共同作用以诱导识别和裂解肿瘤细胞的抗原特异性细胞毒性T细胞(CTL)。此类疫苗含有共享的组织限制性肿瘤抗原，或以全肿瘤细胞制剂的形式含有共享抗原和患者特异性抗原的混合物。共享的组织限制性肿瘤抗原是理想的免疫原性蛋白，在许多个体的肿瘤中选择性表达，通常作为合成多肽或重组蛋白递送给患者。相比之下，全肿瘤细胞制剂是作为自体辐照细胞、细胞裂解物、细胞融合物、热休克蛋白制剂或总mRNA递送给患者。由于全肿瘤细胞是从自体患者身上分离出来的，因此这些细胞可包括患者特异性肿瘤抗原以及共享的肿瘤抗原。最后，还有第三类肿瘤抗原，即新抗原(可能是患者特异性的，也可能是共享的)，这类抗原很少用于疫苗，其由具有导致氨基酸序列改变的肿瘤特异性突变的蛋白质组成。此类突变的蛋白质：(a)由于突变及其相应的蛋白质只存在于肿瘤中，因此对肿瘤细胞来说是独一无二的；(b)避免中枢性耐受，并因此更有可能具有免疫原性；(c)为包括体液免疫和细胞免疫在内的免疫识别提供了优良的靶点。
[0003]过继性免疫疗法或过继性细胞疗法(ACT)是将淋巴细胞转移到对象以治疗疾病。过继性免疫疗法尚未实现其治疗包括癌症、传染病、自身免疫性疾病、炎症性疾病和免疫缺陷在内的各种疾病的潜力。然而，大多数(即使不是全部)...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种用于生产治疗性T细胞群体的方法，其包括：(a)在包括抗原呈递细胞(APC)的第一细胞培养基中培养来自对象的生物样品的T细胞以生产第一T细胞群体，其中所述APC呈递与MHC蛋白质复合的肽抗原的表位；(b)任选地，在第二细胞培养基中培养所述第一T细胞群体以生产第二T细胞群体；(c)从所述第一T细胞群体或所述第二T细胞群体中富集表达CD137(4
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1BB)的T细胞和/或表达CD69的T细胞以生产第三T细胞群体；以及(d)在第三细胞培养基中扩增所述第三T细胞群体以获得包括抗原特异性T细胞的治疗性T细胞群体。2.根据权利要求1所述的方法，其中所述方法包括：在第二细胞培养基中培养所述第一T细胞群体以生产所述第二T细胞群体，以及从所述第二T细胞群体中富集表达CD137(4
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1BB)的T细胞和/或表达CD69的T细胞以生产所述第三T细胞群体。3.一种用于生产治疗性T细胞群体的方法，其包括：(a)在包括抗原呈递细胞(APC)的第一细胞培养基中培养来自对象的生物样品的T细胞，其中所述APC呈递与MHC蛋白质复合的肽抗原的表位；(b)在第二细胞培养基中培养所述第一T细胞群体以生产第二T细胞群体；(c)任选地，从所述第二T细胞群体中富集表达CD137(4
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1BB)的T细胞和/或表达CD69的T细胞以生产第三T细胞群体；以及(d)在第三细胞培养基中扩增所述第二T细胞群体或所述第三T细胞群体，以获得包括抗原特异性T细胞的治疗性T细胞群体；其中所述第三培养基中的所述肽抗原的浓度是所述第一培养基和/或所述第二培养基中的所述肽抗原的浓度的至多1/2。4.根据权利要求3所述的方法，其中所述方法包括：从所述第二T细胞群体中富集表达CD137(4
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1BB)的T细胞和/或表达CD69的T细胞以生产第三T细胞群体。5.根据权利要求1
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4中任一项所述的方法，其中在开始所述在第一细胞培养基中培养来自对象的生物样品的T细胞后10、11、12、13、14、15、16、17或18天，开始从所述第二T细胞群体中富集表达CD137(4
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1BB)的T细胞和/或表达CD69的T细胞。6.根据权利要求1
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5中任一项所述的方法，其中所述APC(i)包括编码所述肽抗原的多核苷酸序列，或(ii)负载所述肽抗原表位。7.根据权利要求1
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6中任一项所述的方法，其中所述肽抗原直接添加到所述第一细胞培养基。8.根据权利要求1
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7中任一项所述的方法，其中所述第一细胞培养基包括第一浓度的所述肽抗原。9.根据权利要求1
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7中任一项所述的方法，其中所述方法进一步包括：向所述第一细胞培养基补充一定量的所述肽抗原，使得所述第一细胞培养基包括第一浓度的所述肽抗原。10.根据权利要求8或9所述的方法，其中所述肽抗原的所述第一浓度是1nM至100μM或100nM至10μM。11.根据权利要求8
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10中任一项所述的方法，其中所述肽抗原的所述第一浓度是约1μM、2μM、3μM、4μM或5μM。12.根据权利要求1
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11中任一项所述的方法，其中所述第二细胞培养基包括第二浓度的所述肽抗原。
13.根据权利要求1
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11中任一项所述的方法，其中所述方法进一步包括：向所述第二细胞培养基补充一定量的所述肽抗原，使得所述第二细胞培养基包括第二浓度的所述肽抗原。14.根据权利要求12或13所述的方法，其中所述肽抗原的所述第二浓度高于、低于或约等于所述肽抗原的所述第一浓度。15.根据权利要求12
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14中任一项所述的方法，其中所述肽抗原的所述第二浓度是1nM至100μM或100nM至10μM。16.根据权利要求12
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15中任一项所述的方法，其中所述肽抗原的第二浓度是约1μM、2μM、3μM、4μM或5μM。17.根据权利要求12
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16中任一项所述的方法，其中在开始所述在第一细胞培养基中培养来自对象的生物样品的T细胞后9、10、11、12、13、14、15、16或17天，开始在所述第二细胞培养基中培养所述第一T细胞群体。18.根据权利要求1
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17中任一项所述的方法，其中所述第三细胞培养基包括第三浓度的所述肽抗原。19.根据权利要求1
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17中任一项所述的方法，其中所述方法进一步包括：向所述第三细胞培养基补充一定量的所述肽抗原，使得所述第三细胞培养基包括第三浓度的所述肽抗原。20.根据权利要求18或19所述的方法，其中所述肽抗原的所述第三浓度是所述肽抗原的所述第一浓度的至多1/2。21.根据权利要求18
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20中任一项所述的方法，其中所述肽抗原的所述第三浓度是所述肽抗原的所述第二浓度的至多1/2。22.根据权利要求18
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21中任一项所述的方法，其中所述肽抗原的所述第三浓度是所述肽抗原的所述第一浓度的至多1/3、1/4、1/5、1/6、1/7、1/8、1/9或1/10。23.根据权利要求18
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22中任一项所述的方法，其中所述肽抗原的所述第三浓度是所述肽抗原的所述第二浓度的至多1/3、1/4、1/5、1/6、1/7、1/8、1/9或1/10。24.根据权利要求18
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23中任一项所述的方法，其中所述肽抗原的所述第三浓度是0.1nM至10μM。25.根据权利要求18
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24中任一项所述的方法，其中所述肽抗原的所述第三浓度是约0.1nM、0.5，nM、1nM、10nM、25nM、50nM、100nM、150nM、200nM、300nM、400nM、500nM、1μM或10μM。26.根据权利要求18
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25中任一项所述的方法，其中在开始所述在第一细胞培养基中培养来自对象的生物样品的T细胞后11、12、13、14、15、16、17、18或19天，开始在所述第三细胞培养基中扩增所述第二T细胞群体或所述第三T细胞群体。27.根据权利要求18
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26中任一项所述的方法，其中在从所述第二T细胞群体中富集表达CD137(4
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1BB)的T细胞和/或表达CD69的T细胞后1、2、3、4或5天，开始在所述第三细胞培养基中扩增所述第二T细胞群体或所述第三T细胞群体。28.根据权利要求1
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27中任一项所述的方法，其中在第三细胞培养基中扩增所述第二T细胞群体或所述第三T细胞群体包括在所述肽抗原的浓度增加的情况下扩增所述第二T细胞群体或所述第三T细胞群体。
29.根据权利要求28所述的方法，其中在所述肽抗原的浓度增加的情况下扩增所述第二T细胞群体或所述第三T细胞群体包括在第四细胞培养基中扩增所述第二T细胞群体或所述第三T细胞群体，所述第四细胞培养基包括第四浓度的所述肽抗原。30.根据权利要求28所述的方法，其中在所述肽抗原的浓度增加的情况下扩增所述第二T细胞群体或所述第三T细胞群体包括向所述第三细胞培养基补充一定量的所述肽抗原，使得所述第三细胞培养基包括第四浓度的所述肽抗原，其中所述肽抗原的所述第四浓度是所述肽抗原的所述第三浓度的至少1.1倍。31.根据权利要求29或30所述的方法，其中所述肽抗原的所述第四浓度是所述肽抗原的所述第三浓度的至少2、3、4、5、6、7、8、9或10倍。32.根据权利要求29
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31中任一项所述的方法，其中所述肽抗原的所述第四浓度是1nM至50μM。33.根据权利要求29
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32中任一项所述的方法，其中所述肽抗原的所述第四浓度是约1nM、10nM、25nM、50nM、100nM、150nM、200nM、300nM、400nM、500nM、600nM、700nM、800nM、900nM、1μM、10μM、25μM或50μM。34.根据权利要求29
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33中任一项所述的方法，其中在开始所述在第一细胞培养基中培养来自对象的生物样品的T细胞后12、13、14、15、16、17、18、19或20天，开始在包括第四浓度的所述肽抗原的第四细胞培养基中扩增所述第二T细胞群体或所述第三T细胞群体，或者向所述第三细胞培养基补充一定量的所述肽抗原，使得所述第三细胞培养基包括第四浓度的所述肽抗原。35.根据权利要求29
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34中任一项所述的方法，其中在开始在包括第三浓度的所述肽抗原的第三细胞培养基中扩增所述第二T细胞群体或所述第三T细胞群体后1、2、3、4或5天，或者在向所述第三细胞培养基补充一定量的所述肽抗原以使得所述第三细胞培养基包括第三浓度的所述肽抗原后1、2、3、4或5天，开始在包括第四浓度的所述肽抗原的第四细胞培养基中扩增所述第二T细胞群体或所述第三T细胞群体，或者向所述第三细胞培养基补充一定量的所述肽抗原，使得所述第三细胞培养基包括第四浓度的所述肽抗原。36.根据权利要求29
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35中任一项所述的方法，其中在所述肽抗原的浓度增加的情况下扩增所述第二T细胞群体或所述第三T细胞群体包括在第五细胞培养基中扩增所述第二T细胞群体或所述第三T细胞群体，所述第五细胞培养基包括第五浓度的所述肽抗原。37.根据权利要求29
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35中任一项所述的方法，其中在所述肽抗原的浓度增加的情况下扩增所述第二T细胞群体或所述第三T细胞群体包括向所述第四细胞培养基补充一定量的所述肽抗原，使得所述第四细胞培养基包括第五浓度的所述肽抗原，其中所述肽抗原的所述第五浓度是所述肽抗原的所述第四浓度的至少1.1倍。38.根据权利要求36或37所述的方法，其中所述肽抗原的所述第五浓度是所述肽抗原的所述第三浓度和/或所述肽抗原的所述第四浓度的至少2、3、4、5、6、7、8、9或10倍。39.根据权利要求36
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38中任一项所述的方法，其中所述肽抗原的所述第五浓度是10nM至100μM。40.根据权利要求36
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39中任一项所述的方法，其中所述肽抗原的所述第五浓度是约10nM、25nM、50nM、100nM、150nM、200nM、300nM、400nM、500nM、600nM、700nM、800nM、900nM、1μM、10μM、25μM、50μM、75μM或100μM。
41.根据权利要求36
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40中任一项所述的方法，其中在开始所述在第一细胞培养基中培养来自对象的生物样品的T细胞后13、14、15、16、17、18、19、20或21天，开始在包括第五浓度的所述肽抗原的第五细胞培养基中扩增所述第二T细胞群体或所述第三T细胞群体或者向所述第四细胞培养基补充一定量的所述肽抗原，使得所述第四细胞培养基包括第五浓度的所述肽抗原。42.根据权利要求36
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41中任一项所述的方法，其中在包括第四浓度的所述肽抗原的第四细胞培养基中扩增所述第二T细胞群体或所述第三T细胞群体后1、2、3、4或5天，或者在向所述第四细胞培养基补充一定量的所述肽抗原以使得所述第四细胞培养基包括第四浓度的所述肽抗原后1、2、3、4或5天，开始在包括第五浓度的所述肽抗原的第五细胞培养基中扩增所述第二T细胞群体或所述第三T细胞群体或者向所述第四细胞培养基补充一定量的所述肽抗原，使得所述第四细胞培养基包括第五浓度的所述肽抗原。43.根据权利要求36
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42中任一项所述的方法，其中在包括第三浓度的所述肽抗原的第三细胞培养基中扩增所述第二T细胞群体或所述第三T细胞群体后2、3、4、5或6天，或者在向所述第三细胞培养基补充一定量的所述肽抗原以使得所述第三细胞培养基包括第三浓度的所述肽抗原后2、3、4、5或6天，开始在包括第五浓度的所述肽抗原的第五细胞培养基中扩增所述第二T细胞群体或所述第三T细胞群体或者向所述第四细胞培养基补充一定量的所述肽抗原，使得所述第四细胞培养基包括第五浓度的所述肽抗原。44.根据权利要求1
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43中任一项所述的方法，其中所述第二T细胞群体或所述第三T细胞群体中抗原特异性T细胞的数目大于所述第一T细胞群体中抗原特异性T细胞的数目。45.根据权利要求1
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44中任一项所述的方法，其中所述第二T细胞群体或所述第三T细胞群体中抗原特异性T细胞的频率大于所述第一T细胞群体中抗原特异性T细胞的频率，其中T细胞群体中抗原特异性T细胞的频率是[所述群体中抗原特异性T细胞的数目]/[所述群体中T细胞的总数目]x100。46.根据权利要求1
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45中任一项所述的方法，其中所述治疗性T细胞群体中抗原特异性T细胞的频率大于所述第一T细胞群体中抗原特异性T细胞的频率，其中...
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