本发明专利技术公开了一种改进的唾液酸糖肽SGP的工业化生产方法，涉及糖肽化合物的生产技术领域。包括如下步骤：S1：将蛋黄粉利用第一提取液进行多次超声提取，过滤，收集滤饼得到脱脂蛋黄粉；S2：将滤饼利用第二提取液进行多次超声提取，过滤，收集滤液，浓缩，得到SGP浓缩液；S3：将SGP浓缩液和硅藻土依次加入到有机溶剂中，搅拌均匀后过滤，收集滤饼，然后通过纯水多次超声溶解滤饼，过滤，合并滤液，得到SGP第一次重结晶粗品水溶液；S4：重复步骤S3，得到SGP粗品水溶液；S5：将SGP粗品水溶液浓缩后过滤，制备成液相上样液，利用C18柱进行洗脱浓缩、冻干，收集得到SGP纯品。该方法不使用大毒性有机溶剂、周期短、产量和纯度高，适用于工业化生产。产。
【技术实现步骤摘要】
一种改进的唾液酸糖肽SGP的工业化生产方法
[0001]本专利技术涉及糖肽化合物的生产
，具体涉及一种改进的唾液酸糖肽SGP的工业化生产方法。
技术介绍
[0002]抗体药物是生物药的一个主要研究方向，其生物学功能来自于蛋白的翻译后修饰。糖基化修饰作为抗体重要的一种修饰，对抗体的生物活性有着极其重要的作用。体外糖基化修饰技术中糖噁唑啉底物的制备是糖抗体基化修饰的核心，传统的噁唑啉全合成因为合成过程中的一系列保护和脱保护反应，往往需要数十步反应，这种困难的长步反应极大地限制了抗体糖基化修饰乃至抗体药物的发展。因此，一种高效制备糖基转移底物的方法很有必要。
[0003]唾液酸糖肽(Sialylglycopeptides,SGP)是一种从鸡蛋黄中提取到的具有天然复杂型N糖链的糖肽，其结构如图1所示，由十一个单糖与6个氨基酸组成，其非还原末端通常为两个唾液酸，又称为双唾液酸糖肽，其结构如图1所示。因其所具有的特殊糖型结构与抗体Fc区域的糖型结构高度相似甚至一致，可以作为很多种蛋白质或抗体的糖基供体，是抗体乃至其他蛋白的糖基底物半合成的完美天然原料。
[0004]SGP的制备方法最早由Seko
[1]首次提出，并在今后一段时间内被不断改进
[2
‑
6]，但始终存在一些局限限制了SGP的大规模工业化制备。如：使用苯酚、丙酮等毒性较大有机试剂、除脂和提取的萃取效率低、纯化使用凝胶柱和活性炭柱等难以放大且极耗时工艺。
[0005]因此，开发一种低毒、短周期、高产的SGP制备方法是很有必要的。
[0006][1]Seko A,Koketsu M,Nishizono M,et al.Occurrence of a sialylglycopeptide and free sialylglycans in hen's egg yolk[J].Biochimica et Biophysica Acta(BBA)
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2):23
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‑
778.
技术实现思路
[0012]本专利技术提供的一种改进的唾液酸糖肽SGP的工业化生产方法，使用市售蛋黄粉为
原料，采用有机溶剂超声萃取的方法除脂，用乙醇水溶液提取原料中的SGP。提取液使用纳滤浓缩，后加入有机溶剂进行重结晶，得到SGP粗品，粗品SGP使用C18制备液相进一步纯化，得到高纯度的SGP产品。该方法不使用大毒性有机溶剂、周期短、产量高，适用于工业化生产。
[0013]为了实现上述技术目的，本专利技术主要采用如下技术方案：
[0014]本专利技术提供了一种改进的唾液酸糖肽SGP的工业化生产方法，包括如下步骤：
[0015]S1：将蛋黄粉加入到超声提取罐中，利用第一提取液进行多次超声提取，过滤，收集滤饼得到脱脂蛋黄粉；
[0016]S2：将步骤S1得到的滤饼加入到超声提取罐中，利用第二提取液进行多次超声提取，过滤，收集滤液，浓缩，得到唾液酸糖肽SGP浓缩液；
[0017]S3：将步骤S2得到的唾液酸糖肽SGP浓缩液和硅藻土依次加入到有机溶剂中，搅拌均匀后过滤，收集滤饼，然后通过纯水多次超声溶解滤饼，过滤，合并滤液，得到唾液酸糖肽SGP第一次重结晶粗品水溶液；
[0018]S4：重复步骤S3，得到唾液酸糖肽SGP粗品水溶液；
[0019]S5：将唾液酸糖肽SGP粗品水溶液浓缩后过滤，制备成液相上样液，然后利用C18柱进行洗脱，浓缩、冻干，收集得到唾液酸糖肽SGP纯品。
[0020]在本专利技术的较佳实施方式中，步骤S1中，80kg蛋黄粉通过多次采用150～500L的第一提取液进行超声提取，所述第一提取液为无水乙醇和乙酸乙酯的混合溶剂，且无水乙醇和乙酸乙酯的体积比为V
乙醇
:V
乙酸乙酯
＝0:1～1:0。
[0021]在本专利技术的另一较佳实施方式中，步骤S2中，所述滤饼通过多次采用150～500L的第二提取液进行超声提取，所述第二提取液为20～60％乙醇水溶液。
[0022]在本专利技术的另一较佳实施方式中，超声提取时，超声功率设置为2kw～20kw之间，超声温度20～40℃，超声频率20～50kHz，超声时长20～60min；且步骤S1
‑
S3中，过滤时均采用5μm滤膜正压过滤。
[0023]在本专利技术的另一较佳实施方式中，步骤S2中，所述唾液酸糖肽SGP浓缩液的体积为10～30L。
[0024]在本专利技术的另一较佳实施方式中，步骤S3中，所述有机溶剂为甲醇和乙醇的混合溶剂，且甲醇和乙醇的体积比为V
甲醇
:V
乙醇
＝0:1～1:0，所述有机溶剂的加入量为所述唾液酸糖肽SGP浓缩液体积的3～10倍，所述硅藻土的加入量为0.5～2kg。
[0025]在本专利技术的另一较佳实施方式中，步骤S3中，通过纯水多次超声溶解滤饼具体包括如下步骤：先用5～20L纯水超声溶解滤饼，过滤，收集滤液，然后滤饼再次用2～10L纯水超声溶解，过滤，合并两次滤液。
[0026]在本专利技术的另一较佳实施方式中，步骤S5中，将唾液酸糖肽SGP粗品水溶液浓缩后过滤，制备成液相上样液，具体包括：将唾液酸糖肽SGP粗品水溶液用旋转蒸发仪浓缩至1～5L，旋蒸水浴温度2本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种改进的唾液酸糖肽SGP的工业化生产方法，其特征在于，包括如下步骤：S1：将蛋黄粉加入到超声提取罐中，利用第一提取液进行多次超声提取，过滤，收集滤饼得到脱脂蛋黄粉；S2：将步骤S1得到的滤饼加入到超声提取罐中，利用第二提取液进行多次超声提取，过滤，收集滤液，浓缩，得到唾液酸糖肽SGP浓缩液；S3：将步骤S2得到的唾液酸糖肽SGP浓缩液和硅藻土依次加入到有机溶剂中，搅拌均匀后过滤，收集滤饼，然后通过纯水多次超声溶解滤饼，过滤，合并滤液，得到唾液酸糖肽SGP第一次重结晶粗品水溶液；S4：重复步骤S3，得到唾液酸糖肽SGP粗品水溶液；S5：将唾液酸糖肽SGP粗品水溶液浓缩后过滤，制备成液相上样液，然后利用C18柱进行洗脱，浓缩、冻干，收集得到唾液酸糖肽SGP纯品。2.根据权利要求1所述的改进的唾液酸糖肽SGP的工业化生产方法，其特征在于，步骤S1中，80kg蛋黄粉通过多次采用150～500L的第一提取液进行超声提取，所述第一提取液为无水乙醇和乙酸乙酯的混合溶剂，且无水乙醇和乙酸乙酯的体积比为V
乙醇
:V
乙酸乙酯
＝0:1～1:0。3.根据权利要求1所述的改进的唾液酸糖肽SGP的工业化生产方法，其特征在于，步骤S2中，所述滤饼通过多次采用150～500L的第二提取液进行超声提取，所述第二提取液为20～60％乙醇水溶液。4.根据权利要求1所述的改进的唾液酸糖肽SGP的工业化生产方法，其特征在于，超声提取时，超声功率设置为2kw～20kw之间，超声温度20～40℃，超声频率20～50kHz，超声时长20～60min；且步骤S1
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S3中，过滤时均采用5μm滤膜正压过滤。5.根据权利要求1所述的改进的唾液酸糖肽SGP的工业化生产方法，其特征在于，步骤S2中，所述唾液酸糖肽SGP浓缩液的体积为10～30L。6.根据权利要求1所述的改进的唾液...
【专利技术属性】
技术研发人员：丁冯玲，黄鹏飞，谷子瑞，
申请(专利权)人：武汉糖智药业有限公司，
类型：发明
国别省市：
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