一种鸡粪堆肥用地衣芽孢杆菌制造技术

本发明专利技术属于鸡粪堆肥用菌种的技术领域，具体涉及一种鸡粪堆肥用地衣芽孢杆菌。该地衣芽孢杆菌已于2023年4月13日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号为CGMCC NO.27103，分类命名为Bacillus licheniformis；所述的地衣芽孢杆菌的16S rDNA全序列如SEQ ID No:1所示；本发明专利技术的地衣芽孢杆菌具备耐高氨氮、耐高温、异养硝化性能。异养硝化性能。异养硝化性能。

【技术实现步骤摘要】
一种鸡粪堆肥用地衣芽孢杆菌


[0001]本专利技术属于鸡粪堆肥用菌种的
，具体涉及一种鸡粪堆肥用地衣芽孢杆菌。

技术介绍

[0002]在鸡的养殖的过程，由于鸡的消化道较短，摄入的饲料营养难以完全消化吸收，一大部分最终以粪便的形式排放到体外，所以鸡粪中含有丰富的有机质、粗蛋白、氮、磷、钾等物质，其未经妥善处理时会排放甲烷、氨气等气体及大量氮、磷等，而以上物质会对大气、水体、土壤等环境造成严重污染。并且鸡粪腐熟化程度低，直接将其大量用于农田会造成农作物减产。目前，对鸡粪的处理主要是使用好氧堆肥的方式，该好氧堆肥方式是利用多种功能微生物的共同作用实现鸡粪稳定化和无害化的有效方式，可用于生产有机肥料。然而，与其他禽畜粪便相比，鸡粪的碳氮比偏低，一般在5
‑
13之间，在鸡粪堆肥过程中，微生物会通过氨化作用将有粪便中的机氮转化为氨氮。但是鸡粪的低碳氮比会导致微生物代谢所需的碳源不足，产生大量氨氮，加剧了堆体的氨气释放，产生恶臭，影响场内空气环境，威胁人畜健康，并造成堆肥氮素损失，降低堆肥的肥效。而在鸡粪堆肥过程中，市场上常用的硝化细菌剂多为自养硝化菌，不易在富含有机物的堆肥中快速生长，而且氨气挥发主要发生在高温期，然而多数硝化细菌对温度敏感，为中温微生物，且易受到高浓度氨氮的抑制作用，难以在堆肥高温阶段充分发挥硝化作用，也有部分微生物具有耐高温性，如中国专利技术专利“一株地衣芽孢杆菌SCAU1602及其应用”该专利公开号为CN115786163A中所述地衣芽孢杆菌SCAU1602具有耐高温特性，可在28<br/>‑
70℃生长，最适温度范围45～60℃；同时该菌株在鸡粪堆肥处理中具有良好的抑制氨气产生能力，但是该菌种虽然具有抑制氨气产生能力却并没有将氨气转化的能力，因此对减少氨气排放的效果较差，因此，现有技术需要进一步的改进。

技术实现思路

[0003]本专利技术的目的是提供一种耐高氨氮、耐高温、异养硝化的鸡粪堆肥用地衣芽孢杆菌。
[0004]一种鸡粪堆肥用地衣芽孢杆菌，所述的地衣芽孢杆菌已于2023年4月13日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号为CGMCC NO.27103，分类命名为Bacillus licheniformis。
[0005]所述的地衣芽孢杆菌的16S rDNA全序列如SEQ ID No:1所示。
[0006]一种所述的地衣芽孢杆菌分离纯化的方法，由以下步骤组成：(1)将鸡粪与松木粉混合至碳氮比为15
‑
17，在25
‑
75℃下进行好氧堆肥25
‑
30d，取堆肥后的样品与无菌生理盐水混合，搅拌制得悬浮液；(2)取步骤(1)中悬浮液接种至无菌富集培养基上，在45
‑
55℃、130
‑
150r/min的条件下进行分批培养，以7天为分批培养的周期，每批培养结束时，以9
‑
11％的体积比例将所得菌液接种到富集培养基继续培养，共进行4
‑
6次分批培养。(3)取培
养后的菌液加入无菌磷酸盐缓冲溶液中混匀，按照10倍梯度稀释至10
‑8，依次从梯度稀释液中吸取0.05
‑
0.2mL涂布于硝化细菌分离培养基平板上，在28
‑
32℃下培养24
‑
48h，挑选形态各异的菌落于分离培养基中划线培养，直至得到纯化的单个菌落；(4)挑取单个菌落，接种至80
‑
120mL种子培养基中扩增培养，在45
‑
55℃、130
‑
150r/min的条件下培养45
‑
50h，将菌液在2500
‑
3500r/min离心3
‑
8min，用无菌的磷酸盐缓冲溶液对沉淀洗涤三次，并将菌液浓度OD
600
调整为1，然后以8
‑
12％的体积比例接种至富集培养基中，在45
‑
55℃、130
‑
150r/min的条件下培养3
‑
6d，筛选得地衣芽孢杆菌。
[0007]所述的步骤(1)中堆肥后的样品、无菌生理盐水的质量体积比为8
‑
12g∶80
‑
120mL；所述的无菌生理盐水的质量浓度为0.8
‑
1％；所述的步骤(2)中悬浮液∶无菌富集培养基的体积比为8
‑
12mL∶100
‑
140mL；所述的培养后的菌液、无菌磷酸盐缓冲溶液的体积比0.4
‑
0.6mL∶4
‑
5mL；所述的无菌磷酸盐缓冲溶液由以下原料制得：NaCl，KCl，Na2HPO4，KH2PO4，去离子水，该无菌磷酸盐缓冲溶液中NaCl、KCl、Na2HPO4、KH2PO4、去离子水的质量体积比为7
‑
9g∶0.1
‑
0.3g∶1.2
‑
1.6g∶0.1
‑
0.3g∶985
‑
1100mL。
[0008]所述的富集培养基由以下原料制得：(NH4)2SO4，C4H4Na2O4，K2HPO4，KH2PO4，MgSO4，CaCl2，去离子水，NaHCO3溶液，FeSO4溶液，微量元素溶液；该无菌富集培养基中(NH4)2SO4、C4H4Na2O4、K2HPO4、KH2PO4、MgSO4、CaCl2、去离子水、NaHCO3溶液、FeSO4溶液、微量元素溶液的质量体积比为2
‑
3g∶3
‑
5g∶3
‑
5g∶2
‑
3g∶0.1
‑
0.2g∶0.002
‑
0.005g∶950
‑
1000mL∶15
‑
25mL∶1
‑
3mL∶0.5
‑
1.5mL；所述的NaHCO3溶液的质量浓度为8
‑
12％；所述的FeSO4溶液由以下原料制得：Na2EDTA，FeSO4·
7H2O，去离子水；该FeSO4溶液中Na2EDTA、FeSO4·
7H2O、去离子水的质量体积比为2
‑
4g∶2
‑
3g∶900
‑
1100mL；所述的微量元素溶液由以下原料制得：CoCl2·
6H2O，H3BO3，MnSO4·
4H2O，Na2MoO4·
4H2O，ZnSO4·
7H2O，CuSO4·
5H2O，NiCl2·
6H2O，去离子水；该微量元素溶液中CoCl2·
6H2O、H3BO3、MnSO4·
4H2O、Na2MoO4·
4H2O、ZnSO4·
7H2O、CuSO4·
5H2O、NiCl2·...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种鸡粪堆肥用地衣芽孢杆菌，其特征在于，所述的地衣芽孢杆菌已于2023年4月13日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号为CGMCC NO.27103，分类命名为Bacillus licheniformis。2.根据权利要求1所述的鸡粪堆肥用地衣芽孢杆菌，其特征在于，所述的地衣芽孢杆菌的16S rDNA全序列如SEQ ID No:1所示。3.一种权利要求1或2所述的地衣芽孢杆菌分离纯化的方法，其特征在于，由以下步骤组成：(1)将鸡粪与松木粉混合至碳氮比为15
‑
17，在25
‑
75℃下进行好氧堆肥25
‑
30d，取堆肥后的样品与无菌生理盐水混合，搅拌制得悬浮液；(2)取步骤(1)中悬浮液接种至无菌富集培养基上，在45
‑
55℃、130
‑
150r/min的条件下进行分批培养，以7天为分批培养的周期，每批培养结束时，以9
‑
11％的体积比例将所得菌液接种到富集培养基继续培养，共进行4
‑
6次分批培养。(3)取培养后的菌液加入无菌磷酸盐缓冲溶液中混匀，按照10倍梯度稀释至10
‑8，依次从梯度稀释液中吸取0.05
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0.2mL涂布于硝化细菌分离培养基平板上，在28
‑
32℃下培养24
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48h，挑选形态各异的菌落于分离培养基中划线培养，直至得到纯化的单个菌落；(4)挑取单个菌落，接种至80
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120mL种子培养基中扩增培养，在45
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55℃、130
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150r/min的条件下培养45
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50h，将菌液在2500
‑
3500r/min离心3
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8min，用无菌的磷酸盐缓冲溶液对沉淀洗涤三次，并将菌液浓度OD
600
调整为1，然后以8
‑
12％的体积比例接种至富集培养基中，在45
‑
55℃、130
‑
150r/min的条件下培养3
‑
6d，筛选得地衣芽孢杆菌。4.根据权利1
‑
2所述的地衣芽孢杆菌分离纯化的方法，其特征在于，所述的步骤(1)中堆肥后的样品、无菌生理盐水的质量体积比为8
‑
12g∶80
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120mL；所述的无菌生理盐水的质量浓度为0.8
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1％；所述的步骤(2)中悬浮液∶无菌富集培养基的体积比为8
‑
12mL∶100
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140mL；所述的培养后的菌液、无菌磷酸盐缓冲溶液的体积比0.4
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0.6mL∶4
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5mL；所述的无菌磷酸盐缓冲溶液由以下原料制得：NaCl，KCl，Na2HPO4，KH2PO4，去离子水，该无菌磷酸盐缓冲溶液中NaCl、KCl、Na2HPO4、KH2PO4、去离子水的质量体积比为7
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9g∶0.1
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0.3g∶1.2
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1.6g∶0.1
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0.3g∶985
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1100mL。5.根据权利要求3所述的纯化方法，其特征在于，所述的富集培养基由以下原料制得：(NH4)2SO4，C4H4Na2O4，K2HPO4，KH2PO4，MgSO4，CaCl2，去离子水，NaHCO3溶液，FeSO4溶液，微量元素溶液；该无菌富集培养基中(NH4)2SO4、C4H4Na2O4、K2HPO4、KH2PO4、MgSO4、CaCl2、去离子水、NaHCO3溶液、FeSO4溶液、微量元素溶液的质量体积比为2
‑
3g∶3
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5g∶3
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5g∶2
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3g∶0.1
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0.2g∶0.002
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0.005g∶950
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1000mL∶15
‑
25mL∶1
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3mL∶0.5
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1.5mL；所述的NaHCO3溶液的...

【专利技术属性】
技术研发人员：胡晓娜，景阳森，付娜娜，王岩，
申请(专利权)人：郑州大学，
类型：发明
国别省市：