一种萨利尔斯氏拟杆菌菌株及其在降解制备硫酸软骨素寡糖及透明质酸寡糖中的应用制造技术

本发明专利技术涉及硫酸软骨素或透明质酸的降解菌株领域，具体涉及一种萨利尔斯氏拟杆菌菌株及其在降解制备硫酸软骨素寡糖及透明质酸寡糖中的应用。萨利尔斯氏拟杆菌菌株具体为萨利尔斯氏拟杆菌菌株CSP6(Bacteroides salyersiae CSP6)，该菌株分离自健康人体粪便，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：M20221993。该菌株能够将分子量为5～50KDa的硫酸软骨素降解为聚合度主要为4和6的不饱和硫酸软骨素寡糖，或者将分子量为20～2000KDa的透明质酸降解为聚合度主要为4和8的不饱和透明质酸寡糖。的不饱和透明质酸寡糖。的不饱和透明质酸寡糖。

【技术实现步骤摘要】
一种萨利尔斯氏拟杆菌菌株及其在降解制备硫酸软骨素寡糖及透明质酸寡糖中的应用


[0001]本专利技术涉及硫酸软骨素或透明质酸的降解菌株领域，具体涉及一种萨利尔斯氏拟杆菌菌株及其在降解制备硫酸软骨素寡糖及透明质酸寡糖中的应用。

技术介绍

[0002]糖胺聚糖(Glycosaminoglycan,GAGs)属于杂多糖，为不分支的长链聚合物，主要存在于高等动物结缔组织中，根据二糖单元组成的不同分为不同的种类。目前研究较多的是硫酸软骨素(Chondroitinsulfate,CS)，肝素和透明质酸(Hyaluronic acid，HA)。其中，硫酸软骨素是一种由交替二糖单元葡萄糖醛酸(GlcA)和N
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乙酰半乳糖胺(GalNAc)组成的天然糖胺聚糖，在N
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乙酰半乳糖胺的不同位羟基上发生硫酸酯化(PMID:30879253)。在中国和美国，硫酸软骨素主要作为一种协助治疗骨关节炎的功能食品使用(PMID:20521042)。透明质酸作为细胞外基质的重要组成部分，主要由二糖重复单元葡萄糖醛酸和N
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乙酰葡萄糖胺(GlcNAc)连接而成，具有维持细胞结构和提供能量来源等多种生理功能。研究表明，硫酸软骨素寡糖具有良好的抗炎活性，其可以抑制TLRs介导的白细胞介素
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6的分泌(PMID:21737940)。此外，透明质酸寡糖也可以竞争性结合TLR4受体，降低细菌脂多糖引起的炎症反应，抑制肿瘤坏死因子和白细胞介素
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6的分泌(PMID:34823813)。
[0003]人体肠道是一个由数万亿微生物组成的多样而复杂的微生物生态系统，肠道菌群作为人体共生微生物的一个关键部分，对宿主的发育、免疫和代谢等多种生理学过程具有重要调控作用(PMID:33239790)。研究表明多糖具有多种生物活性，包括调节免疫功能、降脂降血糖、抗肥胖等(PMID:33648176)。部分多糖如淀粉可以在人的胃和小肠中被消化吸收，但绝大部分多糖无法被宿主消化进入结肠，在结肠内与肠道菌群相互作用，从而发挥营养或药理作用(PMID:33219555)。
[0004]拟杆菌门在复杂碳水化合物的分解中起着重要作用。文献报道Bacteroides salyersiae DSM 18765/WAL10018通过T9SS指导分泌至少109种不同功能的蛋白质，能够降解利用酵母甘露聚糖(DOI:10.1101/2022.07.15.500217)。此外，Bacteroides salyersiae具有潜在的粘液蛋白降解能力，能够抑制肠上皮炎症，调节紧密连接屏障功能(PMID:36311778)。但是，Bacteroides salyersiae是否能够降解硫酸软骨素及透明质酸等糖胺聚糖目前并未有研究报道。本研究首次发现，萨利尔斯氏拟杆菌(Bacteroides salyersiae)CSP6能够将硫酸软骨素降解为聚合度主要为4和6的不饱和硫酸软骨素寡糖。此外，其还可以将透明质酸降解为聚合度主要为4和8的不饱和透明质酸寡糖。硫酸软骨素寡糖和透明质酸寡糖具有良好的抗炎作用，所述萨利尔斯氏拟杆菌CSP6在制备硫酸软骨素寡糖和透明质酸寡糖方面具有广阔的应用前景。

技术实现思路

[0005]基于现有技术中的不足，本专利技术公开一种萨利尔斯氏拟杆菌菌株及其在降解制备
硫酸软骨素寡糖及透明质酸寡糖中的应用。
[0006]本专利技术的技术方案是：
[0007]一种萨利尔斯氏拟杆菌菌株，所述萨利尔斯氏拟杆菌菌株具体为萨利尔斯氏拟杆菌菌株CSP6(Bacteroides salyersiae CSP6)，该菌株源分离自健康人体粪便，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：M 20221993。
[0008]一种萨利尔斯氏拟杆菌菌株在降解制备硫酸软骨素寡糖及透明质酸寡糖中的应用。
[0009]进一步的，上述的一种萨利尔斯氏拟杆菌菌株在降解制备硫酸软骨素寡糖及透明质酸寡糖中的应用，所述应用的方法为：将萨利尔斯氏拟杆菌菌株CSP6经活化培养后获得的种子液接种至硫酸软骨素培养基或透明质酸培养基中进行厌氧发酵培养，薄层层析法检测菌株对硫酸软骨素或透明质酸的降解，实现硫酸软骨素或透明质酸的降解。
[0010]进一步的，上述的一种萨利尔斯氏拟杆菌菌株在降解制备硫酸软骨素寡糖及透明质酸寡糖中的应用，所述硫酸软骨素培养基终浓度组成为：硫酸软骨素6～10g/L、胰蛋白胨2～4g/L、蛋白胨2～4g/L、酵母提取物2～4g/L、粘液素0.4～0.6g/L、3号胆盐0.3～0.5g/L、半胱氨酸盐酸盐0.7～0.9g/L、血红素0.04～0.06g/L、吐温80 0.8～1.2mL/L、氯化钠4～5g/L、氯化钾2～3g/L、氯化镁4～5g/L、氯化钙0.1～0.3g/L、磷酸二氢钾0.3～0.5g/L、微量元素1～3mL/L，溶剂为蒸馏水，pH值为6.4～6.5；
[0011]所述透明质酸培养基终浓度组成为：将硫酸软骨素培养基中的硫酸软骨素用6～10g/L透明质酸替换，其他组成同硫酸软骨素培养基其他组成。
[0012]进一步的，上述的一种萨利尔斯氏拟杆菌菌株在降解制备硫酸软骨素寡糖及透明质酸寡糖中的应用，所述硫酸软骨素分子量为5～50KDa，优选为15～40KDa。进一步的，上述的一种萨利尔斯氏拟杆菌菌株在降解制备硫酸软骨素寡糖及透明质酸寡糖中的应用，所述透明质酸分子量为20～2000KDa，优选为1000～1800KDa。
[0013]进一步的，上述的一种萨利尔斯氏拟杆菌菌株在降解制备硫酸软骨素寡糖及透明质酸寡糖中的应用，所述应用步骤具体为：
[0014]步骤1)种子培养：将萨利尔斯氏拟杆菌菌株CSP6接种至种子培养基，25～42℃培养1～4天，获得种子液；所述种子培养基同硫酸软骨素培养基或透明质酸培养基；
[0015]步骤2)发酵培养：将步骤1)获得的种子液以体积比1％～10％的接种量接种至硫酸软骨素培养基或透明质酸培养基中，25～42℃培养，薄层色谱层析跟踪检测原料利用情况，实现硫酸软骨素或透明质酸的降解。
[0016]本专利技术的优点及有益效果：
[0017]本专利技术提供的一株萨利尔斯氏拟杆菌菌株CSP6，该菌株能够将分子量为5～50KDa的硫酸软骨素降解为聚合度主要为4和6的不饱和硫酸软骨素寡糖，或者将分子量为20～2000KDa的透明质酸降解为聚合度主要为4和8的不饱和透明质酸寡糖。
附图说明
[0018]图1为TLC检测萨利尔斯氏拟杆菌菌株CSP6对CS的降解作用的薄层层析图，
[0019]其中，样品1，样品2和样品3为3个平行样本；
[0020]图2为HILIC
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FTMS检测萨利尔斯氏拟杆菌菌株CSP6降解CS终产物的总离子色谱
图，
[0021]其中，曲线0h为硫酸软骨素空白培养基的总离子色谱图，曲线24h为接种萨利尔斯氏拟杆菌菌株CSP6发酵24h样本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种萨利尔斯氏拟杆菌菌株，其特征在于，所述萨利尔斯氏拟杆菌菌株具体为萨利尔斯氏拟杆菌菌株CSP6(Bacteroides salyersiae CSP6)，该菌株分离自健康人体粪便，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：M 20221993。2.一种权利要求1所述的萨利尔斯氏拟杆菌菌株在降解制备硫酸软骨素寡糖及透明质酸寡糖中的应用。3.根据权利要求2所述的一种萨利尔斯氏拟杆菌菌株在降解制备硫酸软骨素寡糖及透明质酸寡糖中的应用，其特征在于，所述应用的方法为：将萨利尔斯氏拟杆菌菌株CSP6经活化培养后获得的种子液接种至硫酸软骨素培养基或透明质酸培养基中进行厌氧发酵培养，薄层层析法检测菌株对硫酸软骨素或透明质酸的降解，实现硫酸软骨素或透明质酸的降解。4.根据权利要求3所述的一种萨利尔斯氏拟杆菌菌株在降解制备硫酸软骨素寡糖及透明质酸寡糖中的应用，其特征在于，所述硫酸软骨素培养基终浓度组成为：硫酸软骨素6～10g/L、胰蛋白胨2～4g/L、蛋白胨2～4g/L、酵母提取物2～4g/L、粘液素0.4～0.6g/L、3号胆盐0.3～0.5g/L、半胱氨酸盐酸盐0.7～0.9g/L、血红素0.04～0.06g/L、吐温80 0.8～1.2mL/L、氯化钠4～5g...

【专利技术属性】
技术研发人员：尚庆森，王亚敏，于广利，马明凤，
申请(专利权)人：中国海洋大学，
类型：发明
国别省市：