一种单柱半连续色谱分离纯化二十碳五烯酸乙酯的方法技术

本发明专利技术提供了一种单柱半连续色谱分离纯化二十碳五烯酸乙酯的方法，所述方法包括如下步骤：1)将二十碳五烯酸乙酯粗品溶解过滤，得到二十碳五烯酸乙酯溶液；2)将二十碳五烯酸乙酯溶液上样到装有层析介质的层析柱单柱中进行层析，采用流动相进行洗脱；3)分段收集经层析、洗脱后的目的峰值的溶液，对符合要求的组份液进行汇总，得到纯化的二十碳五烯酸乙酯；4)在二十碳五烯酸乙酯的主峰出完后，再次上样与步骤2)等量的二十碳五烯酸乙酯溶液到步骤2)的同一层析柱单柱中进行层析、洗脱；5)保持上样的间隔时间重复步骤3)、4)，连贯的纯化分离、汇总后得到纯化的二十碳五烯酸乙酯。汇总后得到纯化的二十碳五烯酸乙酯。汇总后得到纯化的二十碳五烯酸乙酯。

【技术实现步骤摘要】
一种单柱半连续色谱分离纯化二十碳五烯酸乙酯的方法


[0001]本专利技术属于分离纯化
，涉及一种二十碳五烯酸乙酯的分离纯化方法，尤其涉及一种单柱半连续色谱分离纯化二十碳五烯酸乙酯的方法。

技术介绍

[0002]二十碳五烯酸(EPA)是人体必需的几种omega
‑
3型多不饱和脂肪酸之一，在治疗和防治心脑血管疾病、炎症、抑制肿瘤以及预防老年痴呆等方面均具有较好的疗效。EPA主要来源于鱼油，鱼油中除了EPA外，还含有二十二碳六烯酸、二十二碳五烯酸、十八碳四烯酸、亚油酸、油酸、硬脂酸和软脂酸等多种脂肪酸，由于分子结构类似、理化性质相近，这些非EPA脂肪酸会干扰EPA
‑
EE的治疗作用，EPA主要以二十碳五烯酸乙酯(EPA
‑
EE)的形式存在。因此，高纯度EPA
‑
EE的需求量与日俱增。
[0003]高纯度的二十碳五烯酸乙酯(EPA
‑
EE)可以作为一种原料药，应用于医药制药领域。如爱尔兰生物制药公司Amarin研制的药物Vascepa就是采用纯度大于96％的二十碳五烯酸乙酯(EPA
‑
EE)，用于治疗高甘油三酯血症和血脂异常症。
[0004]目前已公开的制备EPA
‑
EE的主要方法有尿素加合物结晶法、金属盐沉淀法和分子蒸馏法，但上述大部分方法还是停留在简单的去除原料鱼油中色素、胆固醇和一定量饱和脂肪酸的水平，制得的EPA
‑
EE纯度很难达到80％以上，无法满足高纯度要求。对于高纯度EPA
‑
EE(97％以上)的纯化制备技术不多，且都有各自的缺陷。如日清公司利用硝酸银硅藻土色谱柱纯化EPA
‑
EE的技术，产率不到30％，且原料需要达到90％以上纯度，此外产品存在重金属污染风险；CN102391112A公开了一种工业化生产二十碳五烯酸乙酯的方法，包括以下步骤：(a)采用分子蒸馏法，将EPA
‑
EE纯度为68％
‑
72％的原料鱼油中的EPA
‑
EE纯度提高到79％
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83％，收率达50％
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70％；(b)采用盐沉淀的化学方法，将步骤(a)中所得的EPA
‑
EE纯度为79％
‑
83％的鱼油经过盐沉淀法分离，使得其中EPA
‑
EE纯度提高到88％
‑
92％，收率达50％；(c)采用工业化制备色谱法，将步骤(b)中所得的EPA
‑
EE纯度为88％
‑
92％的鱼油经过制备色谱纯化，使得其中EPA
‑
EE纯度提高到96％以上。该方法采用了YMC
‑
PackODS
‑
AQ反相填料进行EPA
‑
EE精制，但其原料需要达到90％以上纯度，上样量也偏低。
[0005]CN108640840B公开了一种纯化二十碳五烯酸乙酯的色谱方法及装备，该色谱方法为：含EPA
‑
EE的样品在Ⅰ区脉冲进样；在Ⅱ区除去前杂(将EPA
‑
EE洗脱至刚穿透Ⅱ区)；在Ⅳ区将EPA
‑
EE洗脱至刚好完全进入Ⅳ区末柱；在
Ⅵ
区进行精细分离(将EPA
‑
EE洗脱至刚穿透
Ⅵ
区)；在
Ⅶ
区洗脱分段收集EPA
‑
EE和含有少量后杂的EPA
‑
EE；在Ⅲ和
Ⅴ
区除去后杂。上述方法通过阀门切换、泵的启停或/和流速调控等智能控制实现。该专利技术采用多柱连续色谱方法用于EPA纯化，但此法需要复杂的设备和精密的仪器控制，设备投入较大。
[0006]另外，现有技术中流行的多柱连续色谱，相较于传统纯化方法效率高，但是风险同样很高，控制要求非常严格，一旦步骤出问题将造成巨大损失。

技术实现思路

[0007]针对现有技术的不足，本专利技术的目的在于提供一种单柱半连续色谱分离纯化二十碳五烯酸乙酯的方法，采用色谱柱单柱，仅需一步层析纯化即可满足纯度>97％的要求，纯化收率高而稳定；单柱半连续色谱分离纯化经一次平衡，多步上样、层析，节省了流动相中溶剂的用量，提高了效率，可以连续制备产出，同时本专利技术分离方法简单方便，可用于规模化生产，大大降低了生产成本。
[0008]本专利技术的目的之一在于提供一种单柱半连续色谱分离纯化二十碳五烯酸乙酯的方法，为达此目的，本专利技术采用以下技术方案：
[0009]一种单柱半连续色谱分离纯化二十碳五烯酸乙酯的方法，包括如下步骤：
[0010]1)将二十碳五烯酸乙酯粗品溶解过滤，得到二十碳五烯酸乙酯溶液；
[0011]2)将步骤1)得到的二十碳五烯酸乙酯溶液上样到装有层析介质的层析柱单柱中进行层析，采用流动相进行洗脱；
[0012]3)分段收集经步骤2)层析、洗脱后的目的峰值的溶液，对符合要求的组份液进行汇总，得到纯化的二十碳五烯酸乙酯；
[0013]4)在二十碳五烯酸乙酯的主峰出完后，再次上样与步骤2)等量的二十碳五烯酸乙酯溶液到步骤2)的同一层析柱单柱中进行层析、洗脱；
[0014]5)保持上样的间隔时间重复步骤3)、4)，连贯的纯化分离、汇总后得到纯化的二十碳五烯酸乙酯。
[0015]本专利技术的单柱半连续色谱分离纯化二十碳五烯酸乙酯的方法，采用色谱柱单柱，仅需一步层析纯化即可满足纯度>97％的要求，纯化收率高而稳定；单柱半连续色谱分离纯化经一次平衡，多步上样、层析，节省了流动相中溶剂的用量，提高了效率，可以连续制备产出，同时本专利技术分离方法简单方便，可用于规模化生产，大大降低了生产成本。
[0016]步骤2)中，所述层析介质为C8、C12、C18、C20等效介质，优选为纳微UniSilC18。其中，UniSilC18微球是一种粒径为20μm、孔径为的高分子微球，该微球具有严格控制的粒径大小和孔径结构，为单分散的、具有孔道结构的微球，使其作为色谱填料时具有很好的针对性。
[0017]优选地，所述层析介质的粒径为8
‑
30μm，例如所述层析介质的粒径为8μm、10μm、15μm、20μm、30μm或其他非均粒介质；优选为20μm。
[0018]步骤2)中，所述流动相为纯水和有机溶剂的混合物。
[0019]优选地，所述纯水与所述有机溶剂的体积比为(1
‑
0.8):(9
‑
9.2)，例如为0.8:9.2、0.85:9.15、0.9:9.1、0.95:9.05或1:9等。
[0020]优选地，所述有机溶剂为甲醇、乙醇或乙腈中的一种，优选为甲醇。
[0021]优选地，步骤2)中，以层析柱中所装层析介质的体积为1个柱体积算，所述流动相的用量为5
‑
8个柱体积，例如本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种单柱半连续色谱分离纯化二十碳五烯酸乙酯的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：1)将二十碳五烯酸乙酯粗品溶解过滤，得到二十碳五烯酸乙酯溶液；2)将步骤1)得到的二十碳五烯酸乙酯溶液上样到装有层析介质的层析柱单柱中进行层析，采用流动相进行洗脱；3)分段收集经步骤2)层析、洗脱后的目的峰值的溶液，对符合要求的组份液进行汇总，得到纯化的二十碳五烯酸乙酯；4)在二十碳五烯酸乙酯的主峰出完后，再次上样与步骤2)等量的二十碳五烯酸乙酯溶液到步骤2)的同一层析柱单柱中进行层析、洗脱；5)保持上样的间隔时间重复步骤3)、4)，连贯的纯化分离、汇总后得到纯化的二十碳五烯酸乙酯。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤2)中，所述层析介质为C8、C12、C18、C20等效介质，优选为纳微UniSilC18；优选地，所述层析介质的粒径为8
‑
30μm，优选为20μm。3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，步骤2)中，所述流动相为纯水和有机溶剂的混合物；优选地，所述纯水与所述有机溶剂的体积比为(1
‑
0.8):(9
‑
9.2)；优选地，所述有机溶剂为甲醇、乙醇或乙腈中的一种，优选为甲醇；优选地，步骤2)中，以层析柱中所装层析介质的体积为1个柱体积算，所述流动相的用量为5
‑
8个柱体积。4.根据权利要求1
‑
3之一所述的方法，其特征在于，步骤2)中，所述洗脱的具体过程为：采用纯水与有机溶剂体积比为(1
‑
0.8):(9
‑
9.2)的流动相对二十碳五烯酸乙酯溶液进行洗脱，所述洗脱的时间为50
‑
70min，所述流动相的流速为70
‑
80mL/min。5.根据权利要求1
‑
4之一所述的方法，其特征在于，步骤1)中，所述二十碳五烯酸乙酯粗品的EPA
‑
EE纯度为70
‑
75％；优选地，所述二十碳五烯酸乙酯溶液中的EPA
‑
EE的浓度为8
‑
25mg/mL。6.根据权利要求1
‑
5之一所述的方法，其特征在于，步骤1)中，所述溶解采用有机溶剂进行溶解；优选地，所述有机溶剂为甲醇；优选地，所述过滤...

【专利技术属性】
技术研发人员：王希，陶冶，郁明钧，张帮伟，陈强强，
申请(专利权)人：苏州纳微科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：