一种靶向Her-2的CAR-NK细胞及其应用制造技术

一种靶向Her

【技术实现步骤摘要】
一种靶向Her
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2的CAR
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NK细胞及其应用


[0001]本专利技术涉及肿瘤免疫疗法领域，特别涉及一种靶向Her
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2的CAR
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NK细胞及其应用。

技术介绍

[0002]嵌合抗原受体(Chimeric antigen receptor，CAR)免疫细胞疗法是目前最有发展前景的肿瘤免疫疗法之一。其通过外源基因转染技术，把识别肿瘤相关抗原的单链抗体(Single chain fragment variable，scFv)和免疫细胞活化序列的融合蛋白即嵌合抗原受体(CAR)表达到免疫细胞表面，使可以特异识别肿瘤相关抗原的scFv通过跨膜区与免疫细胞胞内的活化增殖信号域偶联。表达CAR的免疫细胞(如T细胞、NK细胞)以抗原依赖、但非MHC限制的方式结合肿瘤抗原，启动并活化特异性杀伤肿瘤反应。
[0003]CAR与肿瘤细胞上肿瘤相关抗原结合后为免疫提供活化信号引起免疫细胞活化，表现为CARs依赖的杀伤、增殖及细胞因子释放，从而发挥杀伤肿瘤细胞的作用。这些效应功能可用来设本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种靶向Her
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2的CAR
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NK细胞，其特征在于，所述CAR的核苷酸序列包括如下结构：肿瘤相关抗原结合区、胞外铰链区、跨膜结构域以及细胞内信号传导结构域串联组成，其中所述肿瘤相关抗原结合区为靶向Her
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2的单链抗体FRP5 scFv，其核酸和多肽序列分别如SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示。2.如权利要求1所述的CAR
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NK细胞，其特征在于，所述CAR核苷酸序列还包含信号肽，所述信号肽可选自Human IgKVIII、Mouse Ig Kappa、Human IL
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2、Human insulin、CD8a的信号肽。3.如权利权利要求2所述的CAR
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NK细胞，其特征在于，所述CD8a信号肽的核酸及多肽序列分别如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示。4.如权利权利要求1所述的CAR
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NK细胞，其特征在于，所述胞外铰链区的可选自CD8、CD28、CTLA4、PD
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1、NKG2D、IgG1、含或不含CH2
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CH3区域的IgG4的铰链区序列。5.如权利权利要求4所述的CAR
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NK细胞，其特征在于，所述CD8胞外铰链区、CD28胞外铰链区以及IgG4 Hinge
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CH2
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CH3胞外铰链区的核酸及多肽序列分别如SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6所示，SEQ ID NO.7和SEQ ID NO.8所示，SEQ ID NO.9和SEQ ID NO.10所示。6.如权利权利要求1所述的CAR
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NK细胞，其特征在于，所述跨膜结构域可来源于下列蛋白质跨膜结构域的核酸、多肽序列：T细胞受体的α、β或ζ链，CD28，CD3ε，CD45，CD4，CD5，CD8，CD9，CD16，CD22，CD33，CD37，CD64，CD80，CD86，CD134，CD137，CD154，DAP10，DAP12，NKG2A，NKG2D，PD
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1，CTLA。7.如权利权利要求6所述的CAR
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NK细胞，其特征在于，所述CD8跨膜结构域、CD28跨膜结构域、以及NKG2D跨膜结构域的核酸及多肽序列分别如SEQ ID NO.11和SEQ ID NO.12所示，SEQ ID NO.13和SEQ ID NO.14所示，SEQ ID NO.15和SEQ ID NO.16所示。8.如权利权利要求1所述的CAR
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NK细胞，其特征在于，所述细胞内信号传导结构域包含或不包含共刺激结构域，所述共刺激结构域可来源于下列蛋白质胞内功能性信号传导结域的核酸、多肽序列中的一个或多个不同组合：OX40，CD27，CD28，CDS，ICAM
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1，LFA
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1(CD11a/CD18)，ICOS(CD278)，DAP10，DAP12，4
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1BB(CD137)和2B4或其功能性变体。9.如权利权利要求8所述的CAR
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NK细胞，其特征在于，CD137共刺激结构域、CD28共刺激结构域、DAP10共刺激结构域、以及2B4共刺激结构域的核酸及多肽序列分别如SEQ ID NO.17和SEQ ID NO.18所示，SEQ ID NO.19和SEQ ID NO.20所示，SEQ ID NO.21和SEQ ID NO.22所示，SEQ ID NO.23和SEQ ID NO.24所示。10.如权利权利要求1所述的CAR
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NK细胞，其特征在于，所述信号转导结构域通常为T细胞受体TCR/CD3ζ链或免疫球蛋白Fc受体FcεRIγ链，含有免疫受体酪氨酸活化基序。11.如权利权利要求10所述的CAR
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NK细胞，其特征在于，所述信号转导结构域为CD3ζSignaling Domain，其核酸及多肽序列分别如SEQ ID NO.25和SEQ ID NO.26所示。12.一种如权利要求1
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10任一项中所述的CAR
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NK细胞，其特征在于，所述CAR
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NK核苷酸序列依次由是由信号肽、肿瘤相关抗原结合区、胞外铰链区、跨膜结构域以及包含共刺激结构域的细胞内信号传导结构域串联组成，上述各部件的核酸及多肽序列如权利要求5
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14所述，所述CAR
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NK的结构可选自a)
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g)的任一组或其组合，各组合分别如下：a)CD8 SP
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Her
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2scFv(FRP...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈伟，刘昊，
申请(专利权)人：杭州乾合细胞生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：