一种蜂胶与杨树胶的鉴别方法技术

本发明专利技术提供一种蜂胶与杨树胶的鉴别方法，通过反相高效液相色谱仪分别测定了蜂胶、杨树胶和掺入不同比例的蜂胶的指纹图谱，通过指纹图谱对比，判断蜂胶的真假，以控制蜂胶质量。本发明专利技术方法运用ＨＰＬＣ法进行蜂胶质量控制，分离效果好、灵敏度高，可行性强，方法中所涉及的蜂胶与杨树胶各自特征峰明显，相互间没有干扰，易鉴别，因此不需使用质谱、标准品等进行确证，降低了成本，而且本发明专利技术方法灵敏度高，易掌握，本发明专利技术方法可在蜂胶与杨树胶鉴别中应用，可以鉴别蜂胶与杨树胶，同时可以判断蜂胶中是否掺入杨树胶。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属食品、药品质量控制方法，主要涉及一种蜂胶质量控制方法，该 方法是利用液相色谱进行蜂胶与杨树胶的鉴别。
技术介绍
蜂胶是蜜蜂采集植物树脂等分泌物与其上颚腺、蜡腺等分泌物混合形成的 胶粘性物质。蜂胶具有预防创伤感染、调节免疫、抗肿瘤、降血脂、降血糖以及抗病原微生物等多种生物学作用，现己广泛用于保健行业，并于2005年被列 入中华人民共和国药典。随着人们生活水平的提高，国内外市场对蜂胶的需求 量日益增大。由于蜂胶产量少，价格相对较高， 一些不法分子用杨树芽提取物来假冒蜂 胶提取物，这些杨树胶在颜色、气味、形状上都与真蜂胶十分相似。这种假蜂 胶的生产成本要大大低于真蜂胶，用其制成的蜂胶产品，自然成本就低了很多。 假蜂胶尽管在总黄酮等方面有与真蜂胶相似之处，但它没有蜜蜂在加工蜂胶过 程中所添加的某些生理活性物质，而且假蜂胶的原料及加工过程会带来很多不 安全因素，因此，用伪劣杨树胶作原料的产品流入市场，贻害无穷。而我国现 有的蜂胶国家标准和行业标准中主要的检测项目是状态、气味、颜色、乙醇 提取物含量、蜂蜡、氧化时间、总黄酮含量等。这些指标无法检测出掺有杨树 胶的蜂胶，更无法分辨提纯过的蜂胶和杨树胶。由于缺少相应的真假蜂胶鉴别 的方法，质量监管部门及加工、贸易企业无法在蜂胶生产和流通过程中进行有 效的监管和控制，假蜂胶以假乱真，使真蜂胶的价值无法体现，消费者的权益 无法得到保障。因此，如何高效准确地鉴定蜂胶的质量和真伪具有十分重要的 应用价值。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供，该方法通过准确高 效的液相色谱法对以杨树为主要胶源植物生产的蜂胶与杨树胶进行鉴别，以控 制蜂胶质量。本专利技术的目的是通过以下方案实现(1)将蜂胶用95%乙醇超声提取、离心、过滤，得到蜂胶提取溶液；3(2) 除去蜂胶乙醇提取液中的乙醇，加入氯仿萃取，用分液漏斗除去氯仿相，反复几次，留下水相，挥净水相中的氯仿，用流动相定容；(3) 用反相高效液相色谱仪进行分析，得到蜂胶的色谱(4) 重复上述(l)、 (2)、 (3)的方法，得到杨树胶和掺有杨树胶的蜂胶的色谱(5) 将纯蜂胶，杨树胶和掺有杨树胶的蜂胶的色谱图进行比较，从而判断 蜂胶的真假。本专利技术所述的液相色谱仪的条件为流速为0.5 1.0mL/min，检测波长为 213 220nm或260 270nm，进样量为2 10pL，色谱柱为Agilent Eclipse XDB-C18 (4.6x250mm, 5pm)或相当的色谱柱，柱温为25 3(TC。本专利技术所述的流动相为甲醇0.5%H3PO4=14 : 86 (容积比)。 本专利技术的另一个目的是提供该蜂胶与杨树胶的鉴别方法在蜂胶与杨树胶 鉴别中的应用。本专利技术所述的蜂胶指纹图谱中有两个明显的峰，而相同条件下杨树胶中不 含有这两个峰，根据这两个峰出现的先后分别编号为1号峰和2号峰；杨树胶指 纹图谱中有两个明显的峰，在相同条件下蜂胶中不含有这两个峰，分别编号为 3号峰和4号峰。根据上述方法，分别测定了蜂胶、杨树胶和掺入不同比例的蜂 胶的指纹图谱。由得到的色谱图可知，蜂胶指纹图谱中含有1号和2号特征峰， 不含有3号和4号峰；杨树胶指纹图谱中含有3号和4号峰，不含有1号和2号峰； 而掺有10 30%杨树胶的蜂胶中同时含有1、 2、 3和4号峰。本专利技术经采自不同地区的以杨树为主要胶源植物生产的蜂胶样本进行反 复验证，证明该方法分离效果好、灵敏度高，可行性强，因此，可以鉴别蜂胶 与杨树胶，同时可以判断蜂胶中是否掺入杨树胶。本专利技术方法运用HPLC法进行蜂胶质量控制，方法中所涉及的蜂胶与杨树 胶各自特征峰明显，相互间没有干扰，易鉴别，因此不需使用质谱、标准品等 进行确证，降低了成本，而且本专利技术方法灵敏度高，易掌握。 附图说明图l为实例l蜂胶的色谱图。图2为实例1杨树胶的色谱图。图3为实例1掺入10%杨树胶的色谱图。图4为实例1掺入20%杨树胶的色谱图。图5为实例1掺入3 0%杨树胶的色谱图。图6为实例2蜂胶的色谱图。 图7为实例2杨树胶的色谱图。 图8为实例3蜂胶的色谱图。 图9为实例3杨树胶的色谱图。 图10为实例4蜂胶的色谱图。 图11为实例4杨树胶的色谱图。 图12为实例5蜂胶的色谱图。 图13为实例5杨树胶的色谱图。 具体实施方案本专利技术结合附图和实施例作进一步的说明。实施例1:取蜂胶10g，用80mL95。/。乙醇超声溶解，离心，过滤，得到蜂胶溶液，用 真空干燥法除去乙醇，加入少量水，用氯仿萃取，除去水溶部分的残留氯仿， 用流动相定容到25mL，混匀，用0.22,滤膜过滤，用HPLC分析。采用Agilent XDB-C18 (4.6x250mm，5pm)的色谱柱，流速调整至0.6 mL/min，检测波长220 nm，柱温3(TC，进样量5pL。参见图l。图中1号峰和2号峰为蜂胶特征峰。取杨树胶2.5g，用80mL95。/。乙醇超声溶解，离心，过滤，得到杨树胶溶液， 用真空干燥法除去乙醇，加入少量水，用氯仿萃取，除去水溶部分的残留氯仿， 用流动相定容到25mL，混匀，用0.22pm滤膜过滤，用HPLC分析。采用Agilent XDB-C18 (4.6x250mm, 5,)的色谱柱，流速调整至0.6 mL/min，检测波长220 nm，柱温3(TC，进样量5^L。参见图2。图中3号峰和4号峰为杨树胶特征峰。取掺入10°/。、 20。/。和30。/。杨树胶的蜂胶各10g，分别用80mL 95%乙醇超声 溶解，离心，过滤，用真空干燥法除去乙醇，加入少量水，用氯仿萃取，除去 水溶部分的残留氯仿，用流动相定容到25mL，混匀，用0.22^im滤膜过滤，用 HPLC分析。采用Agilent XDB-C18 (4.6x250mm, 5[im)的色谱柱，流速调整至 0.6mL/min，检测波长220nm，柱温3(TC，进样量5jiL。分别见图3、图4和图5。 图中1号峰和2号峰为蜂胶的特征峰，而3号和4号峰为杨树胶的特征峰。根据上述方法，分别测定了蜂胶，杨树胶和掺入10°/。、 20%和30%杨树胶 的蜂胶指纹图谱，其中图谱中1号峰和2号峰为蜂胶特征峰，是杨树胶中不含有 的，而3号峰和4号峰为杨树胶特征峰，蜂胶中不具有这两个峰。掺入10%、 20% 和30%杨树胶的蜂胶中均可同时检出1、 2、 3和4号特征峰。因此，可以以此鉴 别蜂胶与杨树胶以及蜂胶中是否掺有杨树胶。5实施例2:取蜂胶10g，用80mL95。/。乙醇超声溶解，离心，过滤，得到蜂胶溶液，用 真空干燥法除去乙醇，加入少量水，用氯仿萃取，除去水溶部分的残留氯仿， 用流动相定容到25mL，混匀，用0.22nm滤膜过滤，用HPLC分析。采用Agilent XDB-C18 (4.6x250mm，5pm)的色谱柱，流速调整至0.5 mL/min，检测波长213 nm，柱温25""C，进样量2pL。取杨树胶2.5g，用80mL95。/。乙醇超声溶解，过滤，得到杨树胶溶液，用真 空干燥法除去乙醇，加入少量水，用氯仿萃取，除去水溶部分的残留氯仿，用 流动相定容到25mL，混匀，用0.22pm滤膜过滤，用HPLC分析。采用Agilent XDB-C18 (4.6x250mm， 5,)的色谱柱，流速调整至0.5本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种蜂胶与杨树胶的鉴别方法，通过以下方案实现：　（１）将蜂胶、杨树胶和掺有杨树胶的蜂胶分别用９５％乙醇常规超声提取、离心、过滤，分别得到蜂胶提取溶液、杨树胶提取溶液和掺有杨树胶的蜂胶提取溶液，　（２）分别除去各提取液中的乙醇，加 入氯仿萃取，用分液漏斗除去氯仿相，反复几次，留下水相，挥净水相中的氯仿，用流动相定容，　（３）用反相高效液相色谱仪进行分析，分别得到蜂胶、杨树胶和掺有杨树胶的蜂胶的色谱图，　（４）将蜂胶，杨树胶和掺有杨树胶的蜂胶的色谱图进行鉴别 比较，从而判断蜂胶的真假；　步骤（３）所述的液相色谱仪的条件为：流速为０．５～１．５ｍＬ／ｍｉｎ，检测波长为２１３～２２０ｎｍ，进样量为２～１０μＬ，选用４．６×２５０ｍｍ，５μｍ的Ａｇｉｌｅｎｔ　ＥｃｌｉｐｓｅＸＤＢ－Ｃ１８色谱柱， 柱温为２５～３０℃。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：胡福良，张翠平，
申请(专利权)人：浙江大学，
类型：发明
国别省市：86[中国|杭州]