一种细胞培养用的干细胞冻干粉制备方法技术

本发明专利技术公开了一种细胞培养用的干细胞冻干粉制备方法，涉及冻干粉技术领域，具体包括以下步骤：S01：获取：提取血液中的成体充质干细胞；S02：培养基制备：按重量份配比要求准备所需原料DMEM培养液和添加剂，将各原料混合均匀，得到培养基；其中，添加剂包括L

【技术实现步骤摘要】
一种细胞培养用的干细胞冻干粉制备方法


[0001]本专利技术涉及冻干粉
，具体是一种细胞培养用的干细胞冻干粉制备方法。

技术介绍

[0002]干细胞，是一类具有自我复制能力和多向分化潜能的细胞，在一定条件下，可以分化成多种功能细胞及组织，同时还具有免疫调节、修复、再生受损组织及衰老器官的生物学功能。研究发现，干细胞具有较高的端粒酵活性，是人体的青春活力因子，随着年齢的増长，人体内的干细胞数会不断降低，増殖分化潜能也不断的衰弱，直接导致衰老和疾病的发生发展。干细胞提取物具有美容、抗衰老、活化机体机能、细胞新生、紫外损伤修复及提高肌肤免疫力等功效。
[0003]但是，现有技术中的细胞培养用的干细胞冻干粉制备方法，其制作过程中细胞增殖速率较慢，且细胞收率及活率较低。因此，本领域技术人员提供了一种细胞培养用的干细胞冻干粉制备方法，以解决上述
技术介绍
中提出的问题。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的在于提供一种细胞培养用的干细胞冻干粉制备方法，以解决上述
技术介绍
中提出的问题。
[0005]为实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：一种细胞培养用的干细胞冻干粉制备方法，所述制备方法具体包括以下步骤：
[0006]S01：获取：提取血液中的成体充质干细胞；
[0007]S02：培养基制备：按重量份配比要求准备所需原料DMEM培养液和添加剂，将各原料混合均匀，得到培养基；
[0008]其中，添加剂包括L
‑
谷氨酸酰胺、碱性成纤维生长因子、核糖核昔、碳酸氢钠和转化生长因子；
[0009]S03：培养扩增：用上述培养基对充质干细胞进行增殖培养，培养时间为3～7d；
[0010]S04：收集：当充质干细胞生长到70～90％汇合度时，收集充质干细胞上清液；
[0011]S05：浓缩、纯化：收集后的上清液至于超滤离心管中，过滤、分离后，进行真空浓缩处理，得到浓缩液，再将浓缩液放入纯化柱中，纯化洗涤后，得到纯化后的充质干细胞浓缩液；
[0012]S06：冻干：将上述充质干细胞浓缩液低温冻存凝固后，再进行真空冷冻，升华干燥后，得到干细胞冻干粉。
[0013]作为本专利技术进一步的方案：所述S02中培养基中各原料重量份为：DMEM培养液20～30份、L
‑
谷氨酸酰胺1～3份、碱性成纤维生长因子1～2份、核糖核昔0.1～0.5份、碳酸氢钠0.1～0.3份和转化生长因子0.01～0.1份。
[0014]作为本专利技术再进一步的方案：所述转化生长因子为转化生长因子β1。
[0015]作为本专利技术再进一步的方案：所述S03中的培养扩增，在20～30℃下，饱和湿度5％
CO2条件下进行。
[0016]作为本专利技术再进一步的方案：所述S05中超滤离心时间为0.5～1h，后加盐水重复超滤离心洗涤一次，收集后浓缩原液。
[0017]作为本专利技术再进一步的方案：所述S05中的超滤截留分子量为5～8KD。
[0018]作为本专利技术再进一步的方案：所述S05中的真空浓缩时间为20～50min。
[0019]作为本专利技术再进一步的方案：所述S05中纯化后，使用磷酸二氢钠溶液洗涤2～3次，洗涤时间为5～10min。
[0020]作为本专利技术再进一步的方案：所述S06中冻干时，低温冻存温度为
‑
10～
‑
30℃。
[0021]作为本专利技术再进一步的方案：所述S06中冻干时真空冷冻温度为
‑
60～
‑
70℃。
[0022]与现有技术相比，本专利技术的有益效果是：本专利技术公开了一种细胞培养用的干细胞冻干粉制备方法，本专利技术通过在培养基中增加添加剂，利用L
‑
谷氨酸酰胺、碱性成纤维生长因子、核糖核昔、碳酸氢钠和转化生长因子的配合，使得本专利技术干细胞增殖速率较快，且能够有效提高细胞收率及活率。
具体实施方式
[0023]下面将结合本专利技术实施例，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。
[0024]本专利技术实施例中，
[0025]实施例1
[0026]一种细胞培养用的干细胞冻干粉制备方法，制备方法具体包括以下步骤：
[0027]S01：获取：提取血液中的成体充质干细胞；
[0028]S02：培养基制备：按重量份配比要求准备所需原料DMEM培养液和添加剂，将各原料混合均匀，得到培养基；
[0029]其中，添加剂包括L
‑
谷氨酸酰胺、碱性成纤维生长因子、核糖核昔、碳酸氢钠和转化生长因子；
[0030]S03：培养扩增：用上述培养基对充质干细胞进行增殖培养，培养时间为3d；
[0031]S04：收集：当充质干细胞生长到70％汇合度时，收集充质干细胞上清液；
[0032]S05：浓缩、纯化：收集后的上清液至于超滤离心管中，过滤、分离后，进行真空浓缩处理，得到浓缩液，再将浓缩液放入纯化柱中，纯化洗涤后，得到纯化后的充质干细胞浓缩液；
[0033]S06：冻干：将上述充质干细胞浓缩液低温冻存凝固后，再进行真空冷冻，升华干燥后，得到干细胞冻干粉。
[0034]进一步的，S02中培养基中各原料重量份为：DMEM培养液20份、L
‑
谷氨酸酰胺1份、碱性成纤维生长因子1份、核糖核昔0.1份、碳酸氢钠0.1份和转化生长因子0.01份。
[0035]再进一步的，转化生长因子为转化生长因子β1。
[0036]再进一步的，S03中的培养扩增，在20℃下，饱和湿度5％CO2条件下进行。
[0037]再进一步的，S05中超滤离心时间为0.5h，后加盐水重复超滤离心洗涤一次，收集
后浓缩原液。
[0038]再进一步的，S05中的超滤截留分子量为5KD。
[0039]再进一步的，S05中的真空浓缩时间为20min。
[0040]再进一步的，S05中纯化后，使用磷酸二氢钠溶液洗涤2次，洗涤时间为5min。
[0041]再进一步的，S06中冻干时，低温冻存温度为
‑
10℃。
[0042]再进一步的，S06中冻干时真空冷冻温度为
‑
60℃。
[0043]实施例2
[0044]一种细胞培养用的干细胞冻干粉制备方法，制备方法具体包括以下步骤：
[0045]S01：获取：提取血液中的成体充质干细胞；
[0046]S02：培养基制备：按重量份配比要求准备所需原料DMEM培养液和添加剂，将各原料混合均匀，得到培养基；
[0047]其中，添加剂包括L
‑
谷氨酸酰胺、碱性成纤维生长因子、核糖核昔、碳酸氢钠和转化生长因子；本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种细胞培养用的干细胞冻干粉制备方法，其特征在于：所述制备方法具体包括以下步骤：S01：获取：提取血液中的成体充质干细胞；S02：培养基制备：按重量份配比要求准备所需原料DMEM培养液和添加剂，将各原料混合均匀，得到培养基；其中，添加剂包括L
‑
谷氨酸酰胺、碱性成纤维生长因子、核糖核昔、碳酸氢钠和转化生长因子；S03：培养扩增：用上述培养基对充质干细胞进行增殖培养，培养时间为3～7d；S04：收集：当充质干细胞生长到70～90％汇合度时，收集充质干细胞上清液；S05：浓缩、纯化：收集后的上清液至于超滤离心管中，过滤、分离后，进行真空浓缩处理，得到浓缩液，再将浓缩液放入纯化柱中，纯化洗涤后，得到纯化后的充质干细胞浓缩液；S06：冻干：将上述充质干细胞浓缩液低温冻存凝固后，再进行真空冷冻，升华干燥后，得到干细胞冻干粉。2.根据权利要求1所述的一种细胞培养用的干细胞冻干粉制备方法，其特征在于：所述S02中培养基中各原料重量份为：DMEM培养液20～30份、L
‑
谷氨酸酰胺1～3份、碱性成纤维生长因子1～2份、核糖核昔0.1～0.5份、碳酸氢钠0.1～0.3份和转化生长因子0.01～0.1份。3.根据权利要求2所述的一种细胞培养用的干细胞冻干粉制备方法，...

【专利技术属性】
技术研发人员：李秀梅，张雍承，李静韬，
申请(专利权)人：隆泰银信生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：