一种可用于临床静脉回输或局部注射的间充质干细胞保存液及其组成成分制造技术

本发明专利技术属于生物医药领域。公开了一种可用于临床静脉回输或局部注射的间充质干细胞保存液及其组成成分，主要由5％的葡萄糖和0.9％氯化钠注射液组成，包含2

【技术实现步骤摘要】
一种可用于临床静脉回输或局部注射的间充质干细胞保存液及其组成成分


[0001]本专利技术涉及一种可用于临床静脉回输或局部注射的间充质干细胞保存液及其组成成分，属于生物医药领域。

技术介绍

[0002]近几年干细胞的基础和应用研究取得重大进展，干细胞治疗疾病的研究逐渐由实验室进入临床研究阶段，而且国外已有细胞产品上市。但细胞产品不同于其它化学药品和生物制品，细胞的保存、运输和应用过程都需要在溶液中，因此对细胞的保存液有较高的技术要求，保存液既不能对细胞和人体产生有毒有害的作用，还要方便细胞的保存、运输和临床应用，而且需要尽量不降低细胞的活率和生物学功能。
[0003]目前细胞保存液有许多种，如专利技术专利CN201910660309.6所述，保存液为生理盐水中加入玻璃酸钠0.1％～0.5％和白蛋白0.2％～ 0.4％，可使间充质干细胞保存24h内细胞存活率达到80％以上。但该专利技术保存时间较短，不适于细胞的长距离运输和使用；而且细胞存活率较低，仅有80％，较低的细胞存活率一方面会影响细胞治疗效果，另外较多的死细胞也会给人体带来一些不良反应。专利技术专利 CN202110298828.X所述，细胞保存液由人血清白蛋白制剂5
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15ml、复方电解质注射液80
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90ml、复方氨基酸注射液1
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5ml、L
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谷氨酰胺 0.01
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1g、无水葡萄糖0.1
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1g组成，该专利技术的保存液可维持细胞活率不低于80％长达144h,结团率低于12％。该保存液虽然将细胞的保存时间延长到了144h,有利于细胞的长期保存和远距离运输和使用，方便了临床应用，但较低的细胞活率依然是该保存液的短板。专利技术专利CN201110325314.5提供了一种含与间充质干细胞来源相同的供者的AB脐血浆及低分子肝素钙的间充质干细胞保存液，该保存液保存的细胞在4
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15℃下保持90％以上的活性72小时。该专利技术所用的AB 血浆需要与保存的间充质干细胞供者相同，严重限制了其应用，因为一根脐带可制备1000多份可供临床研究和应用的间充质干细胞，需要10万多毫升的保存液，而同一根脐带的脐带血浆一般不超过60ml，即使按该专利技术专利所述含5％的血浆的浓度配制，也仅能配制1200ml 的保存液，无法满足临床研究和应用的需要。另外脐带的选择也需要是AB血型的供者，更进一步限制的细胞药的制备，此外该保存液的保存时间也较短，仅有72小时，不适合细胞的长距离运输。因此，为方便间充质干细胞在临床的研究和应用，专利技术细胞保存时间更长、细胞活性更高，且方便规模化生产和制备的间充质干细胞保存液具有非常现实和迫切的需求。

技术实现思路

[0004]为满足间充质干细胞临床研究和应用对细胞保存液更高的要求和需要，本发专利技术经过多次实验和筛选专利技术了新的处方：5％的葡萄糖和0.9％的氯化钠注射液可以给细胞提供一个接近人体液的环境，而且可以给细胞提供能量；2％
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10％的人AB血浆富含维持细胞较高活性的因子和蛋白；100
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200单位的肝素纳注射液可以有效避免细胞的粘附和聚集；1
～5％维生素C注射液可以中和细胞因环境变化应激产生的一些自由基。通过上述物质的共同作用，可以较好地保护细胞，维持较高的细胞活率。间充质干细胞在该保存液中常温(16
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26℃)保存24小时内，经胎盘兰拒染实验测定细胞活率不低于90％，48小时内细胞活率不低于80％；低温(2
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10℃)保存7天内，细胞经胎盘兰拒染实验测定细胞活率不低于90％，10天内细胞活率不低于80％。细胞保存密度为每毫升保存液可保存10万
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200万个细胞。该细胞保存液的所用AB血浆既可是来源于健康胎儿的脐血，也可来源于健康成人，还可以将多人份的血浆混合后做成大批次生产。该细胞保存液所有成份均来源于可直接用于临床的注射液，因此，可直接用于细胞的常温和低温保存、运输、临床直接静脉滴注或组织局部注射，具有较高的安全性。该保存液和保存条件可满足本地医疗机构和国内各地医疗机构开展间充质干细胞临床试验和应用的需要。
[0005]实施例：间充质干细胞保存液的配制及应用
[0006]GMP无菌条件下，取临床级5％的葡萄糖和0.9％的氯化钠注射液 80ml,加入2或5ml人AB血清、1000单位的肝素纳注射液、终浓度为2.5％的维生素C注射液，最后补加5％的葡萄糖和0.9％的氯化钠注射液至总体积为100ml,即可得到分别含2％和5％人AB血浆的间充质干细胞保存液。该保存液可直接用于间充质干细胞保存，也可分装后冻存于
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20℃冰箱，用时取出解冻复温到室温后再用于细胞保存。避免反复冻融，保存液
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20℃冰箱保存有效期2年。
[0007]取对数生长期的人脐带间充质干细胞用0.05％的胰酶进行消化， 消化后的细胞悬液用50ml离心管离心，去掉上清，用上述配制的细 胞保存液重悬细胞沉淀，调整细胞浓度为0.5
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1.0
×
106细胞/ml进 行分装，部分细胞放置在室温(25℃)保存，于保存12小时、24小 时、36小时、48小时，取部分细胞用5％有胎盘兰染色，显微镜下计 数细胞的活率。另一部分细胞放置在4℃冰箱保存，于保存3天、5 天、7天、10天，取部分细胞用5％有胎盘兰染色，显微镜下计数细 胞的活率。
[0008]实验结果：
[0009]人脐带间充质干细胞用分别含2％和5％人AB血浆的保存液在室温保存时，结果如图1所示，细胞存活率在12小时内均接近95％，在 24小时时大于90％，分别为91％和92.5％，在36小时分别为85％和86.5％，到48小时细胞的存活率还大于80％。
[0010]人脐带间充质干细胞用分别含2％和5％人AB血浆的保存液在4度冰箱保存时，结果如图2所示，细胞存活率在3天内均接近95％，在 7天时大于90％，分别为90.5％和92.5％，在第10天时细胞的存活率还大于80％。
[0011]附图注：
[0012]图1 MSC保存液在室温保存细胞的存活率结果(％)
[0013]图2 MSC保存液在4度冰箱保存细胞的存活率结果(％)。
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种可用于临床静脉回输或局部注射的间充质干细胞保存液及其组成成分。该保存液主要由5％的葡萄糖和0.9％的氯化钠注射液组成，包含2％
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10％的人AB血浆、10
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20单位/ml的肝素纳注射液和1
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5％的维生素C注射液。2.根据专利要求1所述的间充质干细胞保存液组成成分，其特征在于所有组成成分均采用可用于临床静脉输液的原料，在GMP条件下无菌配制。3.根据专利要求1所述的人AB血浆，既可以是健康胎儿的脐血血浆，也可以是健康成人的外周血血浆，也可以是上述的血浆的混合血浆。4.根据专利要求1所述的间充质干细胞保存液，其特征在于该保存液可用于各种来源间充质干细胞的常温(16
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26℃)和低温(2
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10℃)保存。常温(16
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【专利技术属性】
技术研发人员：张雍承，邓佳奇，孙莹，赵阳，王崇旭，
申请(专利权)人：隆泰银信生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：