一株牛支原体M.bovis-TY4及其应用制造技术

本发明专利技术涉及微生物技术领域，具体涉及一株牛支原体M.bovis

【技术实现步骤摘要】
一株牛支原体M.bovis
‑
TY4及其应用


[0001]本专利技术涉及微生物
，具体涉及一株牛支原体M.bovis
‑
TY4及其应用。

技术介绍

[0002]支原体(Mycoplasma)是一类没有细胞壁、高度多形性、能通过过滤菌器、可用人工培养基培养增殖的最小原核细胞型微生物。由于能够形成丝状与分枝形状，故称为支原体。
[0003]牛支原体(Mycoplasma bovis，M.bovis)是由Hale在1961年从患乳腺炎的病牛中首次分离出来。该病传播广，引起了广泛的关注。牛支原体能够引起牛呼吸系统疾病，尤其引起犊牛肺炎、关节炎、奶牛乳腺炎，给养殖业造成了巨大的经济损失。牛支原体发病一般与应激因素有关，常见的因素为长途运输应激导致发病。牛支原体主要是寄生在健康牛的眼部、呼吸道、消化道和生殖道等部位的粘膜，可以通过呼吸道途径、近距离接触、生殖道接触都可传播，但由于牛支原体体外分离培养的难度大，且大多数分离株纯培养物攻毒后难以诱使牛只发病，无法评价疫苗效力，因此，当前世界上没有能够有效预防牛支原体病的疫苗。此外，外界生存环境(如，高海拔)也会影响牛支原体的体外养以及攻毒应用效果，因此，有必要找到更多可有效诱导牛支原体感染典型临床病症的毒株，以促进其病原学、免疫学、致病机制和疫苗开发等相关研究的开展。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的是提供一种在高原环境下具有典型高致病性的牛支原体菌株。
[0005]为了实现本专利技术的目的，本专利技术的技术方案如下：
[0006]本专利技术提供牛支原体(Mycoplasma bovis)M.bovis
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TY4，其保藏编号为CGMCC No.45565。
[0007]进一步地，本专利技术还提供牛支原体(Mycoplasma bovis)M.bovis
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TY4在建立牛支原体攻毒发病模型中、在制备攻毒制剂中、在评估牛支原体疫苗效力中以及在制备预防和/或治疗牛支原体感染引起的疾病的药物中的应用。
[0008]本专利技术还提供一种攻毒制剂，其包含上述牛支原体(Mycoplasma bovis)M.bovis
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TY4。
[0009]本专利技术的攻毒制剂可用于评估牛支原体疫苗的效力。
[0010]本专利技术另提供一种评估牛支原体疫苗效力的方法，其包括：以上述牛支原体(Mycoplasma bovis)M.bovis
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TY4感染已进行过疫苗免疫的动物的步骤，从而评估疫苗的免疫效力。
[0011]优选，所述感染通过滴鼻方式进行。
[0012]本专利技术的有益效果在于：
[0013]本专利技术提供的牛支原体毒株M.bovis
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TY4在高原环境下具有典型高致病性，毒力强，致病性强，排菌时间长，可在高原环境下建立出更加典型的支原体动物临床病变模型，也为后续研发疫苗提供了有力的支撑。
附图说明
[0014]图1为本专利技术实施例1中攻毒后的体温检测结果。
[0015]图2为本专利技术实施例1中各组肺脏剖检观察典型照片。
[0016]图3为本专利技术实施例1中各组肺脏组织切片典型照片。
[0017]图4为本专利技术实施例1中各组气管培养物的PCR检测结果。图中，P为阳性对照，NC为对照组，其余实验组泳道分别为5个感染组犊牛的气管培养物，M为DNA Marker DL2000。
[0018]图5为本专利技术实施例1中各组肺脏培养物的PCR检测结果。图中，P为阳性对照，NC为对照组，其余实验组泳道分别为5个感染组犊牛的肺脏培养物，M为DNA Marker DL2000。
[0019]图6为本专利技术实施例1中菌落形态代表照片。
[0020]图7为本专利技术实施例1中NC组的气管纤毛脱落情况典型照片。
[0021]图8为本专利技术实施例1中T3组的气管纤毛脱落情况典型照片。
[0022]图9为本专利技术实施例1中TY4组的气管纤毛脱落情况典型照片。
[0023]图10为本专利技术实施例1中T5组的气管纤毛脱落情况典型照片。
[0024]图11为本专利技术实施例1中T9组的气管纤毛脱落情况典型照片。
[0025]图12为本专利技术实施例1中T10组的气管纤毛脱落情况典型照片。
具体实施方式
[0026]下面将结合实施例对本专利技术的优选实施方式进行详细说明。需要理解的是以下实施例的给出仅是为了起到说明的目的，并不是用于对本专利技术的范围进行限制。本领域的技术人员在不背离本专利技术的宗旨和精神的情况下，可以对本专利技术进行各种修改和替换。
[0027]下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
[0028]本专利技术试验菌株均分离自西藏高原环境，攻毒等试验均在西藏高原地区进行。
[0029]实施例1攻毒试验与评价
[0030]1、试剂
[0031]PPLO Broth、PPLO Agar、Agar、Yeast Extract(购自BD公司)，Sodium pyruvate(购自SIGMA公司)，苯酚红(购自国药集团化学试剂有限公司)，MEM(购自GIBCO公司)，马血清(购自HYCLONE公司)，青霉素钠(购自山东聖旺药业股份有限公司)，2xTaq PCR Master Mix、Marker DL2000、引物、核酸染料(购自天根生化科技北京有限公司)，NaCl、NAOH、无水乙醇、冰醋酸(购自天津市致远化学试剂有限公司)，Agarose M、tris(购自BBI LIFE SCIENCES公司)，EDTA(购自SANGON BIOTECH公司)，0.45μm过滤器(购自MILLEX公司)。
[0032]2、菌株
[0033]5株M.bovis西藏牦牛株(M.bovis
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TY4、T3、T5、T9、T10)均由西藏农牧学院西藏高原动物疫病研究自治区高校重点实验室分离鉴定和保存。
[0034]M.bovis
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TY4(以下简称TY4)，该菌株于2023年5月4日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮编100101)，分类命名为支原体Mycoplasma sp.，保藏编号为CGMCC No.45565。
[0035]T3、T5、T9、T10菌株公开于“西藏牦牛源牛支原体生物学特性及感染兔肺脏转录组
学研究”论文中(2021年6月，作者牛家强，华中农业大学)。T10的NCBI登录号：CP062195.1。
[0036]菌液制备：将复苏的菌液在牛支原体固体和液体培养基交替培养，待其生长稳定后传代3代作为备用菌液，通过CCU法测定菌液浓度为109CCU/mL。
[0037]牛支原体液体培养基制备：PPLO Br本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.牛支原体(Mycoplasma bovis)M.bovis
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TY4，其特征在于，保藏编号为CGMCC No.45565。2.权利要求1所述的牛支原体(Mycoplasma bovis)M.bovis
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TY4在建立牛支原体攻毒发病模型中的应用。3.权利要求1所述的牛支原体(Mycoplasma bovis)M.bovis
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TY4在制备攻毒制剂中的应用。4.一种攻毒制剂，其特征在于，包含权利要求1所述的牛支原体(Mycoplasma bovis)M.bovis
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TY4。5.权...

【专利技术属性】
技术研发人员：牛家强，罗婷，任才，徐晋花，徐业芬，严明帅，王冬经，索朗斯珠，韩著，张洪菊，
申请(专利权)人：西藏农牧学院，
类型：发明
国别省市：