一种构建混合感染的水生动物模型的方法技术

本发明专利技术公开了一种构建混合感染的水生动物模型的方法，用包含2

【技术实现步骤摘要】
一种构建混合感染的水生动物模型的方法


[0001]本专利技术涉及海洋生物领域，具体地，涉及一种构建混合感染的水生动物模型的方法。

技术介绍

[0002]卵形鲳鲹(Trachinotus ovatus)，属于硬骨鱼纲(Osteichthyes)、鲈形目(Perciformes)、鯵科(Carangidae)、鲳鯵属(Trachinotus)；石斑鱼(Epinephelus sp.)，属于硬骨鱼纲(Osteichthyes)、鲈形目(Perciformes)、鮨科(Serranidae)、石斑鱼亚科(Epinephelinate)，二者由于肉质鲜美、营养丰富、抗逆性强、生长速度快、经济效益高，越来越受到消费者和养殖者的青睐，已成为我国南方重要的海水鱼养殖品种。当前本领域技术人员绝大多数采用高密度近海网箱养殖海水鱼，随着该养殖产业的快速发展和无序扩张，使得海区负荷过大，养殖环境不断恶化，海水鱼病害频繁发生且日趋严重。病害已给海水鱼的养殖生产造成了极大的经济损失，严重阻碍了水产养殖业的发展。
[0003]中国大多数海洋鱼类病毒性神经坏死病是由赤点石斑鱼神经坏死病毒(Red
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spotted grouper nervous necrosis virus,RGNNV)引起的，严重时死亡率可达100％，严重威胁到海水鱼养殖产业的健康发展。轮虫弧菌(Vibrio rotiferianus)和哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)都是弧菌属(Vibrio)革兰氏阴性菌，可以引起多种水产养殖动物患病，甚至引发流行性疾病的暴发，已经成为我国水产养殖疾病中重要的新发病原，造成了巨大的经济损失。
[0004]水产养殖环境复杂，水体中常常包含大量病毒、细菌、真菌和寄生虫等，多种病原的继发、合并感染是水生动物疾病暴发的常见形式。尽管混合感染在自然条件下非常常见，然而现有技术中围绕水生动物疾病的防治大多停留在单病原感染层次，尚不明确如何应对解决水生动物中的混合感染的病情。

技术实现思路

[0005]为了解决现有技术中缺少混合感染的水生动物模型，本专利技术针对海水水产养殖中发病率高且致病性强的病毒性病原和细菌性病原，提供了一种构建混合感染的水生动物模型的方法。
[0006]本专利技术的第一个目的是提供一种用于构建混合感染的水生动物模型的组合物。
[0007]本专利技术的第二个目的是提供上述组合物在构建混合感染的水生动物模型中的应用。
[0008]本专利技术的第三个目的是提供一种构建混合感染的水生动物模型的方法。
[0009]本专利技术的第四个目的是提供上述方法构建所得混合感染的水生动物模型在评价防治水产养殖病害的方法中的应用。
[0010]为了实现上述目的，本专利技术是通过以下方案予以实现的：
[0011]以卵形鲳鲹和石斑鱼这两种海水经济物种为对象，以海水鱼常见病毒性病原(神
经坏死病毒)和细菌性病原(轮虫弧菌和哈维氏弧菌)为感染病原进行混合感染模型构建，通过设计不同规格鱼苗以及病原不同感染浓度的各种组合，基于各组合间鱼苗样品发病情况和死亡率分析，最终探索出适合进行混合感染机制研究的最佳组合；此外，基于病原基因克隆、质粒构建和实时荧光定量PCR技术，构建了病原检测标准曲线，以便于感染模型中对宿主各组织中的病原复制情况进行检测。
[0012]一种用于构建混合感染的水生动物模型的组合物，包含1.8
×
106TCID
50
～3.5
×
106TCID
50
神经坏死病毒和0.8
×
106cfu/mL～1.2
×
107cfu/mL弧菌。
[0013]优选地，所述神经坏死病毒为赤点石斑鱼神经坏死病毒。
[0014]优选地，所述弧菌为轮虫弧菌或哈维氏弧菌。
[0015]任一上述组合物在构建混合感染的水生动物模型中的应用也应在本专利技术的保护范围之内。
[0016]一种构建混合感染的水生动物模型的方法，用包含1.8
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106TCID
50
～3.5
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106TCID
50
神经坏死病毒和0.8
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106cfu/mL～1.2
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107cfu/mL弧菌的组合物感染体长4cm～9cm的鲈形目鱼类，直至出现感染症状，即得到混合感染的水生动物模型；所述感染症状为所述感染症状为游动能力减弱、失去平衡、鳍充血、侧身游、翻肚、体色变黑和烂尾中的一种或多种。
[0017]优选地，使用所述组合物中的1.8
×
106TCID
50
～3.5
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106TCID
50
神经坏死病毒和0.8
×
106cfu/mL～1.2
×
107cfu/mL弧菌感染体长4cm～9cm的鲈形目鱼类。
[0018]更优选地，所述神经坏死病毒为赤点石斑鱼神经坏死病毒；所述弧菌为轮虫弧菌或哈维氏弧菌中的一种。
[0019]进一步优选地，所述鲈形目鱼类为体长4cm～6cm的卵形鲳鲹，则使用3.0
×
106TCID
50
～3.5
×
106TCID
50
赤点石斑鱼神经坏死病毒和0.8
×
107cfu/mL～1.2
×
107cfu/mL轮虫弧菌感染所述卵形鲳鲹，直至出现感染症状。
[0020]更进一步优选地，所述鲈形目鱼类为体长4cm～6cm的卵形鲳鲹，则依次使用3.0
×
106TCID
50
～3.5
×
106TCID
50
赤点石斑鱼神经坏死病毒和0.8
×
107cfu/mL～1.2
×
107cfu/mL轮虫弧菌感染所述卵形鲳鲹，直至出现感染症状。
[0021]再进一步优选地，所述鲈形目鱼类为体长4cm～6cm的卵形鲳鲹，则依次使用3.33
×
106TCID
50
赤点石斑鱼神经坏死病毒和1
×
107cfu/mL轮虫弧菌感染所述卵形鲳鲹，直至出现感染症状。
[0022]最优选地，先对所述卵形鲳鲹注射3.33
×
106TCID
50
赤点石斑鱼神经坏死病毒，12h后再对所述卵形鲳鲹注射1
×
107cfu/mL轮虫弧菌，48h后出现感染症状。
[0023]进一步优选地，所述鲈形目鱼类为体长7cm～9cm的斜带石斑鱼，则使用0.8
×
107cfu/mL～1.2
×
107cfu/mL赤点石斑鱼神经坏死病毒和0.8
×
106cfu/mL～1.2
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106cfu/mL哈维氏弧菌感染所述斜带石斑鱼，直至出现本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于构建混合感染的水生动物模型的组合物，其特征在于，包含1.8
×
106TCID
50
～3.5
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106TCID
50
神经坏死病毒和0.8
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106cfu/mL～1.2
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107cfu/mL弧菌。2.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述神经坏死病毒为赤点石斑鱼神经坏死病毒。3.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述弧菌为轮虫弧菌或哈维氏弧菌。4.权利要求1～3任一所述组合物在构建混合感染的水生动物模型中的应用。5.一种构建混合感染的水生动物模型的方法，其特征在于，用权利要求1所述组合物感染体长4cm～9cm的鲈形目鱼类，直至出现感染症状，即得到混合感染的水生动物模型；所述感染症状为游动能力减弱、失去平衡、鳍充血、侧身游、翻肚、体色变黑和烂尾中的一种或多种。6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，使用权利要求1所述组合物中的3.0
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106TCID
50
～3.5
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106TCID
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神经坏死病毒和0.8
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107cfu/mL～1.2
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107cfu/mL弧...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨敏，王劭雯，秦启伟，李鑫帅，管凌峰，刘翠瑜，陈锦鹏，
申请(专利权)人：华南农业大学，
类型：发明
国别省市：