用于抑制多个基因的表达的组合物和方法技术

本披露涉及用于调节，例如降低细胞中靶多个基因的表达的位点特异性破坏剂。在一些实施例中，该靶多个基因包含促炎基因，例如，CXCL1、CXCL2、CXCL3、CXCL4、CXCL5、CXCL6、CXCL7和IL

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于抑制多个基因的表达的组合物和方法
[0001]相关申请的交叉引用
[0002]本申请要求2020年9月29日提交的美国临时申请63/085,013和2021年6月29日提交的63/216,487的权益。上述申请的内容特此通过引用以其全文并入。
[0003]序列表
[0004]本申请包含序列表，该序列表已以ASCII格式电子提交，并通过援引以其全文并入本文。于2021年9月29日创建的所述ASCII副本命名为O2057
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7021WO_SL.txt且大小为666,818字节。

技术介绍

[0005]基因表达的错误调节是许多疾病的根本原因(例如，在哺乳动物中，例如人类)。许多疾病和病症与多个相关基因有关。需要新的工具、系统和方法来改变(例如，降低)多个相关基因的表达。

技术实现思路

[0006]本披露尤其提供了位点特异性破坏剂或包含位点特异性破坏剂的系统，其可用于调节，例如降低包含第一锚序列和第二锚序列的锚序列介导的连接(ASMC)内的多个靶基因，例如第一基因和第二基因的表达。在一个方面，位点特异性破坏剂包含靶向部分，其特异性结合第一锚序列或结合在ASMC中的第一锚序列的近侧。在一些实施例中，位点特异性破坏剂的结合以足以调节(例如，降低)多个靶基因(例如，第一基因和第二基因)的表达的量发生。在一些实施例中，位点特异性破坏剂进一步包含效应子部分。通常，位点特异性破坏剂对靶多个基因表达的调节涉及位点特异性破坏剂结合第一锚序列或结合在第一锚序列的近侧。在一些实施例中，位点特异性破坏剂与第一锚序列的结合可以破坏成核多肽例如CTCF与第一锚序列的结合，例如，从而破坏ASMC的形成和/或维持，例如，从而调节，例如，降低多个基因的表达。在一些实施例中，位点特异性破坏剂结合第一锚序列或结合在第一锚序列的近侧可将效应子部分的功能定位于第一锚序列和/或ASMC，例如，从而破坏ASMC的形成和/或维持，例如，从而调节，例如，降低多个基因的表达。在一些实施例中，位点特异性破坏剂结合第一锚序列或结合在第一锚序列的近侧可以将效应子部分的功能定位于第一锚序列和/或ASMC，例如，从而调节(例如，降低)多个基因的表达。不希望受理论的束缚，在一些实施例中，认为靶向同一ASMC内的多个基因可以更有效地调节，例如降低多个基因的表达和/或更有效地实现与多个基因的功能有关的治疗效果。例如，在一些实施例中，靶向的多个基因可能都是促炎基因；如本文教导的靶向多个促炎基因以调节例如降低表达可以比靶向单个基因更有效地减少炎症。与靶向多个基因中的个别基因的效应相比，靶向包含在同一基因组复合物(例如，ASMC)内的多个基因(例如，通过靶向ASMC或ASMC的锚序列)可能具有更大的叠加或协同效应(例如，关于表达调节或调节的稳定性/持续时间)。
[0007]在一些方面，本披露提供了一种降低细胞中第一基因和第二基因的表达的方法，该方法包括：使细胞与包含特异性结合至第一锚序列或位于第一锚序列近侧的位点的靶向
部分的位点特异性破坏剂以足以降低该第一和第二基因的表达的量接触，该第一和第二基因在包含该第一锚序列和第二锚序列的锚序列介导的连接内。在一些实施例中，第一基因和第二基因是促炎基因。
[0008]在一些方面，本披露涉及位点特异性破坏剂，其包含：DNA结合部分，例如靶向部分，其特异性结合细胞内第一锚序列或结合在细胞内第一锚序列的近侧。在一些实施例中，该第一锚序列是锚序列介导的连接的一部分，该锚序列介导的连接进一步包含第二锚序列、第一基因和第二基因。在一些实施例中，第一基因和第二基因是促炎基因。
[0009]在一些方面，本披露涉及位点特异性破坏剂，其包含：靶向部分，该靶向部分特异性结合细胞内第一锚序列或结合在细胞内第一锚序列的近侧，其中该第一锚序列是锚序列介导的连接的一部分，该锚序列介导的连接进一步包含第二锚序列、第一基因和第二基因，其中该第一基因和该第二基因是促炎基因。
[0010]在另一方面，本披露提供了一种系统，该系统包含：第一位点特异性破坏剂以及第二位点特异性破坏剂，该第一位点特异性破坏剂包含第一靶向部分和任选的第一效应子部分，其中该第一位点特异性破坏剂特异性结合至包含第一基因和第二基因的锚序列介导的连接(ASMC)的第一锚序列(或该第一锚序列的近侧)；该第二位点特异性破坏剂包含第二靶向部分和任选的第二效应子部分，其中该第二位点特异性破坏剂结合至该ASMC的第二锚序列(或该第二锚序列的近侧)。
[0011]在另一方面，本披露涉及一种降低细胞中第一基因和第二基因的表达的方法，该方法包括：使该细胞与包含特异性结合至第一锚序列或位于第一锚序列近侧的位点的靶向部分的位点特异性破坏剂以足以降低该第一和第二基因的表达的量接触，该第一和第二基因在包含该第一锚序列和第二锚序列的锚序列介导的连接内，其中该第一基因和第二基因是促炎基因；从而降低该第一和第二基因的表达。
[0012]在另一方面，本披露涉及一种降低细胞中第一基因和第二基因的表达的方法，该方法包括：
[0013]使该细胞与系统以足以降低该第一和第二基因的表达的量接触，该系统包含：包含第一靶向部分和任选的第一效应子部分的第一位点特异性破坏剂，该第一位点特异性破坏剂特异性结合至第一锚序列或第一锚序列的近侧的位点；以及包含第二靶向部分和任选的第二效应子部分的第二位点特异性破坏剂，其中该第二位点特异性破坏剂结合至该ASMC的第二锚序列(或该第二锚序列的近侧)，该第一和第二基因在ASMC内，其中该第一基因和第二基因是促炎基因。
[0014]另一方面，本披露涉及包含细胞(例如，人细胞，例如，原代人细胞)和如本文所述的位点特异性破坏剂或系统的反应混合物。
[0015]另一方面，本披露涉及治疗患有炎性障碍的受试者的方法，该方法包括以足以治疗该炎性障碍的量向该受试者施用如本文所述的位点特异性破坏剂或系统。
[0016]在另一方面，本披露涉及治疗患有感染(例如病毒感染，例如COVID
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19)的受试者的炎症(例如局部炎症)的方法，该方法包括以足以治疗该炎症的量向该受试者施用如本文所述的位点特异性破坏剂或系统。
[0017]另一方面，本披露涉及第一基因和第二基因的表达降低的人细胞，其中该第一基因和该第二基因是促炎基因，其中该细胞包含破坏的(例如，完全破坏的)锚序列介导的连
接，该锚序列介导的连接包含该第一基因和该第二基因。在一些实施例中，人细胞先前已与本文所述的位点特异性破坏剂或系统接触。在一些实施例中，人细胞不再包含本文所述的位点特异性破坏剂或系统。
[0018]在另一方面，本披露涉及人细胞，其包含基因座坐标chr4:74595464
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74595486、chr4:74595457
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74595479、chr4:74595460
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74595482、chr4:74595472
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74595494、chr4:75000088
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种降低细胞中第一基因和第二基因表达的方法，该方法包括：使该细胞与位点特异性破坏剂以足以降低该第一和第二基因的表达的量接触，该位点特异性破坏剂包含特异性结合第一锚序列或第一锚序列近侧的位点的靶向部分，该第一和第二基因在包含该第一锚序列和第二锚序列的锚序列介导的连接内，其中任选地，该第一基因和该第二基因是促炎基因；从而降低该第一和第二基因的表达。2.一种位点特异性破坏剂，其包含：DNA结合部分，例如靶向部分，其特异性结合细胞内第一锚序列或结合在细胞内第一锚序列的近侧，其中该第一锚序列是锚序列介导的连接的一部分，该锚序列介导的连接进一步包含第二锚序列、第一基因和第二基因，其中任选地，该第一基因和该第二基因是促炎基因。3.如权利要求2所述的位点特异性破坏剂，其中该第一或第二锚序列位于IL
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8和RASSF6之间；IL
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8增强子和RASSF6之间；CXCL1和CXCL4之间；CXCL2和EPGN之间；或者E2增强子和EPGN之间。4.如权利要求2或3所述的位点特异性破坏剂，其中该位点特异性破坏剂进一步包含效应子部分。5.如权利要求2
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4中任一项所述的位点特异性破坏剂，其中该靶向部分包含TAL效应子分子、CRISPR/Cas分子(例如，无催化活性的CRISPR/Cas蛋白)、锌指结构域、tetR结构域、大范围核酸酶或寡核苷酸。6.如权利要求2
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5中任一项所述的位点特异性破坏剂，其中该效应子部分包含本文所述的效应子，例如，MQ1、DNMT1、DNMT3A1、DNMT3A2、DNMT3B1、DNMT3B2、DNMT3B3、DNMT3B4、DNMT3B5、DNMT3B6、DNMT3L、EZH2、HDAC8、KRAB、MeCP2、HP1、RBBP4、REST、FOG1、SUZ12、SETDB1、SETDB2、EHMT2(即G9A)、EHMT1(即GLP)、SUV39H1、HDAC1、HDAC2、HDAC3、HDAC4、HDAC5、HDAC6、HDAC7、HDAC8、HDAC9、HDAC10、HDAC11、SIRT1、SIRT2、SIRT3、SIRT4、SIRT5、SIRT6、SIRT7、SIRT8、SIRT9、EZH1、SUV39H2、SETD8、SUV420H1、SUV420H2或DNMT3，或其任一项的功能变体或片段。7.如权利要求2
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6中任一项所述的位点特异性破坏剂，其中该效应子部分通过接头连接到该靶向部分。8.如权利要求2
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7中任一项所述的位点特异性破坏剂，其中该效应子部分在该靶向部分的C末端。9.如权利要求2
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7中任一项所述的位点特异性破坏剂，其中该效应子部分在该靶向部分的N末端。10.如权利要求2
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9中任一项所述的位点特异性破坏剂，其中该效应子部分由核苷酸序列编码，该核苷酸序列选自SEQ ID NO:10、14、16、18、66、68中任一个，或与其具有至少80％、85％、90％、95％、99％或100％同一性或与其差异不超过20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2或1个位置的序列。11.如权利要求2
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10中任一项所述的位点特异性破坏剂，其中该效应子部分包含根据SEQ ID NO:11、12、13、15、17、19、67中任一个的氨基酸序列，或与其具有至少80％、85％、
90％、95％、99％或100％同一性或与其差异不超过20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2或1个位置的序列。12.如权利要求2
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11中任一项所述的位点特异性破坏剂，其中该效应子部分是MQ1或其功能变体或片段，例如其中该效应子部分包含SEQ ID NO:11或12的氨基酸序列，或与其具有至少80％、85％、90％、95％、99％或100％同一性或与其差异不超过20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2或1个位置的序列，其中任选地该效应子部分在该靶向部分的C末端。13.如权利要求2
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11中任一项所述的位点特异性破坏剂，其中该效应子部分是KRAB或其功能变体或片段，例如其中该效应子部分包含SEQ ID NO:13的氨基酸序列，或与其具有至少80％、85％、90％、95％、99％或100％同一性或与其差异不超过20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2或1个位置的序列，其中任选地该效应子部分在该靶向部分的C末端。14.如权利要求2
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11中任一项所述的位点特异性破坏剂，其中该效应子部分是DNMT3a/3L或其功能变体或片段，例如其中该效应子部分包含SEQ ID NO:15的氨基酸序列，或与其具有至少80％、85％、90％、95％、99％或100％同一性或与其差异不超过20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2或1个位置的序列，其中任选地该效应子部分在该靶向部分的C末端。15.如权利要求2
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11中任一项所述的位点特异性破坏剂，其中该效应子部分是EZH2或其功能变体或片段，例如其中该效应子部分包含SEQ ID NO:17的氨基酸序列，或与其具有至少80％、85％、90％、95％、99％或100％同一性或与其差异不超过20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2或1个位置的序列。16.如权利要求2
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11中任一项所述的位点特异性破坏剂，其中该效应子部分是HDAC8或其功能变体或片段，例如其中该效应子部分包含SEQ ID NO:19的氨基酸序列，或与其具有至少80％、85％、90％、95％、99％或100％同一性或与其差异不超过20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2或1个位置的序列，其中任选地该效应子部分在该靶向部分的C末端。17.如权利要求2
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11中任一项所述的位点特异性破坏剂，其中该效应子部分是G9A或其功能变体或片段，例如其中该效应子部分包含SEQ ID NO:67的氨基酸序列，或与其具有至少80％、85％、90％、95％、99％或100％同一性或与其差异不超过20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2或1个位置的序列，其中任选地该效应子部分在该靶向部分的N末端。18.如权利要求2
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17中任一项所述的位点特异性破坏剂，其进一步包含第二效应子部分。19.如权利要求18所述的位点特异性破坏剂，其中该靶向部分位于该第一效应子部分和该第二效应子部分之间。20.如权利要求2
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19中任一项所述的位点特异性破坏剂，其中该效应子部分包含聚合物，例如寡核苷酸；例如，gRNA。21.如权利要求20所述的位点特异性破坏剂，其中该寡核苷酸具有包含该锚序列的互补序列或该锚序列近侧的序列的互补序列的序列。
22.如权利要求2
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21中任一项所述的位点特异性破坏剂，其中该靶向部分进一步包含gRNA，例如结合包含SEQ ID NO:20
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62中任一个的序列的至少14、15、16、17、18、19或20个核苷酸的基因组基因座的gRNA，例如，其中该gRNA包含含有SEQ ID NO:20
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62中任一个的序列的至少14、15、16、17、18、19或20个核苷酸的序列。23.如权利要求2
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22中任一项所述的位点特异性破坏剂，其中该靶向结构域包含CRISPR/Cas分子，例如无催化活性的CRISPR/Cas蛋白，和gRNA，例如结合包含SEQ ID NO:20
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62中任一个的序列的至少14、15、16、17、18、19或20个核苷酸的基因组基因座的gRNA，例如，其中该gRNA包含含有SEQ ID NO:20
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62中任一个的序列的至少14、15、16、17、18、19或20个核苷酸的序列并且该效应子部分包含选自DNMT3a/3l、MQ1、KRAB、G9A、HDAC8或EZH2的效应子。24.如权利要求23所述的位点特异性破坏剂，其中该靶向结构域包含CRISPR/Cas分子，例如无催化活性的CRISPR/Cas蛋白，和gRNA，例如结合包含SEQ ID NO:20
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62中任一个的序列的至少14、15、16、17、18、19或20个核苷酸的基因组基因座的gRNA，例如，其中该gRNA包含含有SEQ ID NO:20
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62中任一个的序列的至少14、15、16、17、18、19或20个核苷酸的序列，该第一效应子部分包含选自DNMT3a/3l、MQ1、KRAB、G9A、HDAC8或EZH2的效应子，并且该第二效应子部分包含选自DNMT3a/3l、MQ1、KRAB、G9A、HDAC8或EZH2的效应子。25.如权利要求2
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24中任一项所述的位点特异性破坏剂，其中该靶向结构域结合包含SEQ ID NO:20
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62中任一个的序列的至少14、15、16、17、18、19或20个核苷酸的基因组基因座。26.如权利要求2
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25中任一项所述的位点特异性破坏剂，其中该靶向结构域结合SEQ ID NO:20
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62中任一个的序列的50个核苷酸内(例如，上游或下游)的基因组基因座。27.如权利要求2
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26中任一项所述的位点特异性破坏剂，其中该靶向结构域结合SEQ ID NO:20
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62中任一个的序列的100个核苷酸内(例如，上游或下游)的基因组基因座。28.如权利要求2
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27中任一项所述的位点特异性破坏剂，其中该靶向结构域结合SEQ ID NO:20
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62中任一个的序列的200(例如，上游或下游)个核苷酸内的基因组基因座。29.如权利要求2
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28中任一项所述的位点特异性破坏剂，其中该靶向结构域结合SEQ ID NO:20
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62中任一个的序列的300个核苷酸内(例如，上游或下游)的基因组基因座。30.如权利要求2
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29中任一项所述的位点特异性破坏剂，其：(i)包含一个或多个核定位信号序列(NLS)，或(ii)不包含NLS，任选地其中该NLS包含SEQ ID NO:63和/或64的氨基酸序列。31.如权利要求18
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30中任一项所述的位点特异性破坏剂，其中该第一和/或第二效应子部分包含DNA甲基转移酶、组蛋白甲基转移酶、组蛋白脱乙酰酶、组蛋白去甲基化酶或组蛋白修饰复合物的募集子。32.如权利要求2
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31所述的位点特异性破坏剂，其中该ASMC包含两个环。33.如权利要求2
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32中任一项所述的位点特异性破坏剂或如权利要求1所述的方法，其中该第一基因位于该ASMC的第一环中，该第二基因位于该ASMC的第二环中。34.如权利要求33所述的位点特异性破坏剂或方法，其中该第一锚序列位于该第一环和该第二环之间。35.一种核酸，其编码如权利要求2
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34中任一项所述的位点特异性破坏剂。
36.如权利要求1所述的方法或如权利要求2
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36中任一项所述的位点特异性破坏剂，其中该锚序列介导的连接进一步包含第三基因，并且任选地其中该方法导致该第三基因的表达降低。37.如权利要求36所述的方法或位点特异性破坏剂，其中该锚序列介导的连接进一步包含第四基因，并且任选地其中该方法导致该第四基因的表达降低。38.如权利要求37所述的方法或位点特异性破坏剂，其中该锚序列介导的连接进一步包含第五基因，并且任选地其中该方法导致该第五基因的表达降低。39.如权利要求38所述的方法或位点特异性破坏剂，其中该锚序列介导的连接进一步包含第六基因，并且任选地其中该方法导致该第六基因的表达降低。40.如权利要求39所述的方法或位点特异性破坏剂，其中该锚序列介导的连接进一步包含第七基因，并且任选地其中该方法导致该第七基因的表达降低。41.如权利要求40所述的方法或位点特异性破坏剂，其中该锚序列介导的连接进一步包含第八基因，并且任选地其中该方法导致该第八基因的表达降低。42.一种人细胞，其第一基因和第二基因的表达降低，其中该第一基因和该第二基因是促炎基因，其中该细胞包含破坏的(例如，完全破坏的)锚序列介导的连接，该锚序列介导的连接包含该第一基因和该第二基因。43.如权利要求42所述的人细胞，其与该锚序列介导的连接包含的锚序列的CTCF结合减少，例如减少至少20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或100％。44.如权利要求42或43所述的人细胞，其中该人细胞的第三促炎基因的表达降低。45.如权利要求44所述的人细胞，其中该人细胞的第四促炎基因的表达降低。46.如权利要求45所述的人细胞，其中该人细胞的第五促炎基因的表达降低。47.如权利要求46所述的人细胞，其中该人细胞的第六促炎基因的表达降低。48.如权利要求47所述的人细胞，其中该人细胞的第七促炎基因的表达降低。49.如权利要求48所述的人细胞，其中该人细胞的第八促炎基因的表达降低。50.如权利要求42
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49中任一项所述的人细胞，其中该人细胞包含chr4:74595464
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74595486、chr4:74595457
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74595479、chr4:74595460
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74595482、chr4:74595472
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74595494、chr4:75000088
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75000110、chr4:75000091
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75000113、chr4:75000085
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75000107、chr4:75000157
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75000179、chr4:75000156
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75000178、chr4:74595215
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74595237、chr4:74595370
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74595392、chr4:74595560
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74595582、chr4:74595642
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74595664、chr4:74595787
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74595809、chr4:74528428
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74528450、chr4:74528567
‑
74528589、chr4:74528609
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74528631、chr4:74789132
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74789154、chr4:74789250
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74789272、chr4:74789312
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74789334、chr4:74964853
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74964875、chr4:74964906
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74964928、chr4:74965538
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74965560、chr4:74965737
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74976340、chr4:74570348
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74570370、chr4:74570503
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74570525或chr4:74570526
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74570548处的突变，或在所述区域的5、10、15、20、30、40或50个核苷酸内的突变。51.一种人细胞，其包含chr4:74595464
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74595486、chr4:74595457
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74595479、chr4:
74595460
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74595482、chr4:74595472
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75000178、chr4:74595215
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74965759、chr4:75000031
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75000053、chr4:75000115
‑
75000137、chr4:75000231
‑
75000253、chr4:74975146
‑
74975168、chr4:74975369
‑
74975391、chr4:74976318
‑
74976340、chr4:74570348
‑
74570370、chr4:74570503
‑
74570525或chr4:74570526
‑
74570548处的突变，或在所述区域的5、10、15、20、30、40或50个核苷酸内的突变。52.如权利要求27或28所述的人细胞，其中该突变包括缺失、取代或插入(例如，1
‑
10、1
‑
9、1
‑
8、1
‑
7、1
‑
6、1
‑
5、1
‑
4、1
‑
3或1
‑
2个核苷酸)。53.如权利要求50
‑
52中任一项所述的人细胞，其与该突变的CTCF结合减少，例如与具有未破坏的ASMC的人细胞相比减少至少20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或100％。54.如权利要求42
‑
53中任一项所述的人细胞，其中与具有未破坏的ASMC的人细胞相比，该第一和第二基因的表达降低至少10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％或90％。55.一种系统，其包含：包含第一靶向部分和任选的第一效应子部分的第一位点特异性破坏剂，其中该第一位点特异性破坏剂特异性结合锚序列介导的连接(ASMC)的第一锚序列，其中该ASMC包含第一基因和第二基因，以及包含第二靶向部分和任选的第二效应子部分的第二位点特异性破坏剂，其中该第二位点特异性破坏剂结合该ASMC的第二锚序列。56.如权利要求55所述的系统，其中该第一锚序列在IL
‑
8和RASSF6之间；IL
‑
8增强子和RASSF6之间；CXCL1和CXCL4之间；CXCL2和EPGN之间；或者E2增强子和EPGN之间。57.如权利要求55或56所述的系统，其中该第二锚序列在IL
‑
8和RASSF6之间；IL
‑
8增强子和RASSF6之间；CXCL1和CXCL4之间；CXCL2和EPGN之间；或者E2增强子和EPGN之间。58.如权利要求55
‑
57中任一项所述的系统，其中该第一锚序列在IL
‑
8增强子和RASSF6之间，并且该第二锚序列在CXCL1和CXCL4之间。59.如权利要求55
‑
58中任一项所述的系统，其中该第一锚序列在IL
‑
8增强子和RASSF6之间，并且该第二锚序列在E2增强子和EPGN之间。60.如权利要求55
‑
59中任一项所述的系统，其中该第一锚序列在CXCL1和CXCL4之间，并且该第二锚序列在E2增强子和EPGN之间。61.如权利要求55
‑
60中任一项所述的系统，其中该第一位点特异性破坏剂是本文所述的位点特异性破坏剂，例如，如权利要求2
‑
9中任一项所述的位点特异性破坏剂。62.如权利要求55
‑
61中任一项所述的系统，其中该第二位点特异性破坏剂是本文所述的位点特异性破坏剂，例如，如权利要求2
‑
9中任一项所述的位点特异性破坏剂。
63.如权利要求55
‑
62中任一项所述的系统，其中该第一靶向部分和该第二靶向部分各自独立地包含TAL效应子分子、CRISPR/Cas分子、锌指结构域、tetR结构域、大范围核酸酶或寡核苷酸。64.如权利要求55
‑
63中任一项所述的系统，其中该第一效应子和该第二效应子各自独立地包含本文所述的效应子，例如MQ1、EZH2、HDAC8、KRAB、G9A或DNMT3a/3l，或其任一项的功能变体或片段。65.如权利要求55
‑
62中任一项所述的系统，其中该第一效应子和该第二效应子各自独立地包含选自以下的蛋白质：SETDB1、SETDB2、EHMT2(即G9A)、EHMT1(即GLP)、SUV39H1、EZH2、EZH1、SUV39H2、SETD8、SUV420H1、SUV420H2，或其任一项的功能变体或片段。66.如权利要求55
‑
65中任一项所述的系统，其中该第一效应子和该第二效应子各自独立地包含选自以下的蛋白质：HDAC1、HDAC2、HDAC3、HDAC4、HDAC5、HDAC6、HDAC7、HDAC8、HDAC9、HDAC10、HDAC11、SIRT1、SIRT2、SIRT3、SIRT4、SIRT5、SIRT6、SIRT7、SIRT8、SIRT9，或其任一项的功能变体或片段。67.如权利要求55
‑
43中任一项所述的系统，其中该第一效应子和该第二效应子各自独立地包含选自以下的蛋白质：MQ1、DNMT1、DNMT3A1、DNMT3A2、DNMT3B1、DNMT3B2、DNMT3B3、DNMT3B4、DNMT3B5、DNMT3B6、DNMT3L、DNMT3a/3l，或其任一项的功能变体或片段。68.如权利要求55
‑
67中任一项所述的系统，其中该第一效应子和该第二效应子各自独立地包含选自以下的蛋白质：KRAB、MeCP2、HP1、RBBP4、REST、FOG1、SUZ12，或其任一项的功能变体或片段。69.如权利要求55
‑
68中任一项所述的系统，其中该第一效应子和该第二效应子各自独立地包含聚合物，例如寡核苷酸。70.如权利要求55
‑
69中任一项所述的系统，其中该第一寡核苷酸和该第二寡核苷酸相同。71.如权利要求55
‑
70中任一项所述的系统，其中该第一寡核苷酸和该第二寡核苷酸不同。72.如权利要求55
‑
71中任一项所述的系统，其中该第一寡核苷酸具有包含该第一锚序列的互补序列或该第一锚序列近侧的序列的互补序列的序列并且该第二寡核苷酸具有包含该第二锚序列的互补序列或该第二锚序列近侧的序列的互补序列的序列。73.如权利要求55
‑
72中任一项所述的系统，其中该锚序列介导的连接进一步包含第三基因。74.如权利要求55
‑
73中任一项所述的系统，其中该锚序列介导的连接进一步包含第四基因。75.如权利要求55
‑
74中任一项所述的系统，其中该锚序列介导的连接进一步包含第五基因。76.如权利要求55
‑
75中任一项所述的系统，其中该锚序列介导的连接进一步包含第六基因。77.如权利要求55
‑
76中任一项所述的系统，其中该锚序列介导的连接进一步包含第七基因。78.如权利要求55
‑
77中任一项所述的系统，其中该锚序列介导的连接进一步包含第八
基因。79.如权利要求55
‑
78中任一项所述的系统，其中该ASMC包含两个环。80.一种核酸组合物，其编码如权利要求55
‑
79中任一项所述的系统。81.如权利要求80所述的核酸，其中单个核酸编码该第一位点特异性破坏剂和该第二位点特异性破坏剂。82.如权利要求81所述的核酸，其中第一核酸编码该第一位点特异性破坏剂，并且第二核酸编码该第二位点特异性破坏剂。83.一种降低细胞中第一基因和第二基因表达的方法，该方法包括使该细胞与如权利要求80
‑
82中任一项所述的核酸组合物的如权利要求55
‑
79中任一项所述的系统接触。84.如权利要求83所述的方法，其中该细胞同时与该第一位点特异性破坏剂和该第二位点特异性破坏剂接触。85.如权利要求83所述的方法，其中该细胞依次与该第一位点特异性破坏剂和该第二位点特异性破坏剂接触。86.如权利要求1
‑
85中任一项所述的方法、人细胞、位点特异性破坏剂或系统，其中该第一基因是CXCL1，并且该第二基因是CXCL2。87.如权利要求1
‑
85中任一项所述的方法、人细胞、位点特异性破坏剂或系统，其中该第一基因是CXCL1，并且该第二基因是CXCL3。88.如权利要求1
‑
85中任一项所述的方法、人细胞、位点特异性破坏剂或系统，其中该第一基因是CXCL1，并且该第二基因是IL
‑
8。89.如权利要求1
‑
85中任一项所述的方法、人细胞、位点特异性破坏剂或系统，其中该第一基因是CXCL1，并且该第二基因是CXCL4。90.如权利要求1
‑
85中任一项所述的方法、人细胞、位点特异性破坏剂或系统，其中该第一基因是CXCL1，并且该第二基因是CXCL5。91.如权利要求1
‑
85中任一项所述的方法、人细胞、位点特异性破坏剂或系统，其中该第一基因是CXCL1，并且该第二基因是CXCL6。92.如权利要求1
‑
85中任一项所述的方法、人细胞、位点特异性破坏剂或系统，其中该第一基因是CXCL1，并且该第二基因是CXCL7。93.如权利要求1
‑
85中任一项所述的方法、人细胞、位点特异性破坏剂或系统，其中该第一基因是CXCL2，并且该第二基因是CXCL3。94.如权利要求1
‑
85中任一项所述的方法、人细胞、位点特异性破坏剂或系统，其中该第一基因是CXCL2，并...

【专利技术属性】
技术研发人员：L，
申请(专利权)人：旗舰先锋创新V股份有限公司，
类型：发明
国别省市：