疫苗组合物制造技术

无菌药物组合物，该无菌药物组合物包含一种或多种核酸分子，该一种或多种核酸分子包含共同编码多种疱疹病毒多肽的多个免疫原编码区，其中一种或多种核酸分子在引入脊椎动物细胞中时能够在表达载体中表达多种疱疹病毒多肽，其中多个免疫原编码区中的每一个与来自相同疱疹病毒物种的相应天然全长疱疹病毒多肽的天然编码区具有至少90％的序列同一性，其中多种疱疹病毒多肽为：(1)单纯疱疹病毒2或单纯疱疹病毒1的gD；水痘带状疱状病毒的gE或gI；埃巴病毒的gp350或gp42；埃巴病毒的gp42，选自人巨细胞病毒的基因型1

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】疫苗组合物
专利

[0001]本专利技术涉及疫苗或免疫先进疗法组合物，特别是多核苷酸疫苗，其适合用于针对感染原(特别是疱疹病毒)。
[0002]专利技术背景
[0003]人疱疹病毒是一组膜包膜双链DNA病毒，是造成显著的全球人类发病率和死亡率的原因(Knipe和Howley,2013)。所有这些病毒均使用膜融合来引发细胞感染(Eisenberg等人,2012；Vollmer和Grunewald,2020)。存在九种已知的人疱疹病毒物种，分类为(Davison等人,2009)(ICTVonline.org)HHV1、HHV2、HHV3、HHV4、HHV5、HHV6A、HHV6B、HHV7和HHV8。这些还包括ICTV分类和通用名(i)HHV1，人α疱疹病毒1型，具有通用名单纯疱疹病毒1型(HSV1)；(ii)HHV2，人α疱疹病毒2型，单纯疱疹病毒2型(HSV2)；(iii)HHV3，人α疱疹病毒3型，水痘带状疱疹病毒(VZV)；(iv)HHV4，人γ疱疹病毒4型，埃巴病毒(EBV)；(v)HHV5，人β疱疹病毒5型，人巨细胞病毒(HCMV)；(vi)HHV6A，人β疱疹病毒6A型；(vii)HHV
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6B，人β疱疹病毒6B型，以及(viii)HHV7，人β疱疹病毒7型；以及(viii)HHV8是卡波济氏肉瘤相关疱疹病毒(KSHV)。在人中，这些病毒引起各种各样的疾病，其中最严重的那些如下。HSV1引起口腔疱疹和脑炎，HSV2引起生殖器疱疹以及新生儿疱疹，致死率高且终生残疾，并且VZV引起水痘和带状疱疹。EBV引起传染性单核细胞增多症，并与几种B细胞淋巴瘤、鼻咽癌和胃腺癌密切相关。HCMV在免疫抑制患者中引起严重感染，并且是最普遍的先天性感染之一，导致了听觉损失和终身残疾的主要非遗传性病因。HHV6A、HHV6B和7引起婴儿玫瑰疹(第六病)、移植后边缘叶脑炎并且与神经系统疾病相关联，并且HHV
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8可在几种临床环境中(包括在感染人免疫缺陷病毒(HIV)的患者中)引起卡波济氏肉瘤。
[0004]人疱疹病毒的常用代表性模型和“α”疱疹病毒(α疱疹病毒亚科)亚家族的模式种是HSV。尽管进行了深入研究，但还不存在针对HSV1或HSV2的有效疫苗，且除了针对VZV的疫苗外，没有一种针对任何其他人疱疹病毒的可用。然而，关于HSV免疫应答已有很多了解。20多年的研究已经完全确定，单纯疱疹病毒的包膜糖蛋白D是一种主要的免疫原。它通过附着于细胞受体(包括TNF
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R和Ig家族内)、疱疹病毒入侵介质(herpes virus entry mediator，HVEM)、连接素或3
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O
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硫酸化
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硫酸乙酰肝素(3
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OS
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HS)而造成病毒与细胞的结合(Hilterbrand和Heldwein,2019)。使用采用重组抗原制备的亚单位蛋白以及使用编码糖蛋白的DNA，明确地展示了gD作为主要免疫原的作用。在使用鼠和豚鼠感染模型的临床前试验中，用gD亚单位蛋白或编码DNA进行免疫提供了免于急性攻击性感染的一些保护。两者均生成了中和抗体。此外，在具有化学佐剂明矾和MPL的疫苗配制剂中使用HSV2 gD亚单位的临床试验显示中和抗体的有效生成，同时保护女性免于HSV1，但不免于HSV2(Belshe等人,2012)。该试验的保护的免疫相关性显示为中和抗体的水平(Belshe等人,2014)。似乎需要进一步加强来制备出足够保护性的HSV2疫苗，并且假定其他免疫逃避糖蛋白可能影响应答。豚鼠感染模型的分析显示，这种疫苗需要加强用于保护(Bernstein,2020；Stanberry等人,2002)。然而，它仍然是评价针对HSV1和HSV2感染的疫苗接种或免疫疗法的新模式的有用比较物。
[0005]已使糖蛋白gD与其他疱疹病毒蛋白在各种提出的亚单位蛋白疫苗配制剂中组合；并且使用具有缺乏gD的基因缺失的基因工程病毒的其他配制剂也被提出。US 9,555,099 B2公开了疫苗组合物，该疫苗组合物包含重组HSV2蛋白和佐剂；蛋白质组分，包括包膜糖蛋白(诸如gD)和包膜糖蛋白以外的结构蛋白(例如衣壳或被膜蛋白)。US 7,094,767 B2公开了表达全长HSV2 gD和/或截短gB(另一种疱疹病毒包膜蛋白)的HSV2的DNA疫苗。US2019/0367561A1主要涉及针对EBV或HCMV的疫苗组合物，并且公开了抗原组合物，该抗原组合物包含参与介导HHV结合、融合和进入宿主细胞的至少两种人疱疹病毒(HHV)多肽诸如gp350细胞外域、gH细胞外域、gL和gB细胞外域，或编码核酸。这些可与其他多肽诸如gD组合，这意味着将核酸分子和多肽组合在同一组合物中的可能性。在初免加强疫苗接种方法中组合核酸分子和多肽的方法是本领域中已知的(Muthumani等人,2013)。典型的研究致力于多肽的截短形式，以便避免ER滞留，例如在gB的情况下，或者具有gD的分泌形式以增加外源性抗原暴露。尽管有可以包括在疫苗中的疱疹病毒多肽的多种可能组合，许多主要使用暴露在病毒体外部的分子或者在无需进一步理由的情况下扩展可用表位，但缺乏证据表明多肽的组合在体内比单独用gD免疫更有效地抵御病毒攻击。在豚鼠模型中，包含截短gD；截短gD加上gB和gH/gL；或者gB和gH/gL的组合的多肽疫苗提高有效免疫力，但没有疫苗比包含作为唯一多肽的截短gD的疫苗显著更有效，并且仍然需要T细胞加强(Bernstein等人,2011)。
[0006]与多肽疫苗相比，多核苷酸疫苗的生产和储存可能更简单、更安全且更经济，可以刺激细胞免疫力，因为抗原在细胞内产生，并且出于这些原因可为优选的。然而，它们通常需要佐剂加强(Liu,2019)。疫苗效果可通过不同的佐剂或用于递送多核苷酸的载体来调节。迄今为止，多核苷酸疫苗研究更加致力于经由增加核酸递送或者通过使用化学或遗传佐剂来增加抗原剂量(Gary和Weiner,2020；Grunwald和Ulbert,2015；Liu,2019)。
[0007]仍然需要有效的疱疹病毒疫苗，特别是合理设计的疫苗，这些疫苗是基于明确的科学原理设计的。
[0008]本说明书中对先前所公布的文件的列出或讨论不应视为承认该文件是现有技术的一部分或是公知常识。
[0009]专利技术概述
[0010]本专利技术的第一方面提供了药物组合物，该药物组合物包含一种或多种核酸分子，该一种或多种核酸分子包含共同编码多种疱疹病毒多肽的多个免疫原编码区，其中一种或多种核酸分子在引入脊椎动物细胞中时能够表达多种疱疹病毒多肽，其中多个免疫原编码区中的每一个与来自相同疱疹病毒物种的相应的天然全长疱疹病毒多肽的天然编码区具有至少90％的序列同一性，其中多种疱疹病毒多肽为：
[0011](i)单纯疱疹病毒2或单纯疱疹病毒1的gD；水痘带状疱状病毒的gE或gI；埃巴病毒的gp350或gp42；选自人巨细胞病毒的基因型1
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8的gO；人疱疹病毒6A的g本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.药物组合物，其包含一种或多种核酸分子，所述一种或多种核酸分子包含共同编码多种疱疹病毒多肽的多个免疫原编码区，其中所述一种或多种核酸分子在引入脊椎动物细胞中时能够表达所述多种疱疹病毒多肽，其中所述多个免疫原编码区中的每一个与来自相同疱疹病毒物种的相应天然全长疱疹病毒多肽的天然编码区具有至少90％的序列同一性，其中所述多种疱疹病毒多肽为：(i)单纯疱疹病毒2或单纯疱疹病毒1的gD；水痘带状疱状病毒的gE或gI；埃巴病毒的gp350或gp42；选自人巨细胞病毒的基因型1
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8的gO；人疱疹病毒6A的gO；人疱疹病毒6B的gO；人疱疹病毒7的gO；或卡波济氏肉瘤相关疱疹病毒的K8.1(A/B)；以及(ii)各自的关联人疱疹病毒的gB、gH和gL；并且其中所述药物组合物是无菌的，并且提供在密封无菌容器中。2.根据权利要求1所述的药物组合物，其中所述多个免疫原编码区中的每一个具有与所述相应天然全长疱疹病毒多肽的所述天然编码区的密码子选择、CpG偏倚和/或G+C含量基本上相同的密码子选择、CpG偏倚和/或G+C含量。3.根据权利要求1或2所述的药物组合物，其中所述多个免疫原编码区中的每一个包含Kozak序列，所述Kozak序列能够允许所述疱疹病毒多肽在所述脊椎动物细胞中以如下的效率起始翻译，所述效率与所述相应天然全长疱疹病毒多肽的所述天然编码区的Kozak序列允许在所述脊椎动物细胞中起始翻译的效率基本上相同，诸如其中所述多个免疫原编码区中的每一个的所述Kozak序列与所述相应天然全长疱疹病毒多肽的天然编码区的Kozak序列相同。4.根据前述权利要求中任一项所述的药物组合物，其中所述免疫原编码区中的每一个可操作地连接至3
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非翻译区，所述3
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非翻译区允许所述免疫原编码区或其转录物的mRNA稳定性的程度基本上相同，诸如凭借包含相同的3
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聚腺苷酸化序列。5.根据前述权利要求中任一项所述的药物组合物，其中所述一种或多种核酸分子为脱氧核糖核酸(DNA)多核苷酸，诸如质粒表达载体或病毒载体；或核糖核酸(RNA)多核苷酸，诸如病毒载体。6.根据权利要求5所述的药物组合物，其中所述一种或多种核酸分子为脱氧核糖核酸(DNA)多核苷酸，并且所述免疫原编码区中的每一个可操作地连接至5
’
启动子，其中可操作地连接至5
’
启动子的每个编码区能够在所述脊椎动物细胞中同时基因表达，诸如凭借每个编码区连接至相同的5
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启动子。7.根据前述权利要求中任一项所述的药物组合物，其中由gB的所述免疫原编码区编码的gB多肽包含使gB多肽在融合构造中稳定化为三聚体的突变，诸如融合相关域I中的突变，诸如对应于SEQ ID NO 9的第262位的位置处的取代，诸如其中所述取代为非保守取代；或对应于SEQ ID 91的第267位、SEQ ID 92的第273位、SEQ ID 93的第202位、SEQ ID 94的第202位、SEQ ID 95的第246位、SEQ ID 97的第193位、SEQ ID 98的第190位、SEQ ID 99的第218位的位置处的取代，诸如其中所述取代为非保守取代。8.根据前述权利要求中任一项所述的药物组合物，其中由gB的所述免疫原编码区编码的gB多肽包含在融合前构造中在三聚体中使gB稳定化的突变，诸如gB结构域III和/或IV中的突变，诸如对应于SEQ ID 67至90或132至134的编码多肽中的取代的一者或多者的位置处的取代；或者其中由gD的所述免疫原编码区编码的gD多肽包含降低与HVEM受体的相互作
用的突变，诸如对应于SEQ ID 64或SEQ ID 65的第52位的位置处的取代。9.根据前述权利要求中任一项所述的药物组合物，其中所述多个免疫原编码区中的每一个与所述相应天然全长疱疹病毒多肽的所述天然编码区；或者与变体gB多肽的编码区具有至少95％的序列同一性，如至少97％的序列同一性、至少99％的序列同一性、至少99.5％的序列同一性或100％的序列同一性，所述变体gB多肽的编码区与所述相应天然全长gB多肽的所述天然编码区的区别仅在于对应于编码的变体gB多肽中的SEQ ID NO 9的第262位的密码子。10.根据权利要求1至7中任一项所述的药物组合物，其中由所述免疫原编码区编码的所述gD、gH和gL分别具有SEQ ID NO 10、6和7的氨基酸序列，并且由所述免疫原编码区编码的所述gB具有SEQ ID NO 8或9的氨基酸序列；诸如其中所述gD、gH和gL免疫原编码区具有分别为SEQ ID NO 5、1和2，或者分别为SEQ ID NO 18、15和16的核苷酸序列；并且所述gB免疫原编码区具有SEQ ID NO 3、4或17的核苷酸序列。11.根据前述权利要求中任一项所述的药物组合物，其中所述一种或多种核酸分子在引入所述脊椎动物细胞中时能够以疱疹病毒融合复合物的形式表达所述多种疱疹病毒多肽，或者其中由所述一种或多种核酸分子编码的所述疱疹病毒多肽限于形成所述融合复合物的那些，以及任选地也为疱疹病毒免疫调节剂。12.根据前述权利要求中任一项所述的药物组合物，其中所述一种或多种核酸分子编码免疫调节剂，任选地CCL5或VIT，其中所述一种或多种核酸分子在引入所述脊椎动物细胞中时能够表达所述免疫调节剂；并且/或者其...

【专利技术属性】
技术研发人员：U，
申请(专利权)人：维罗治疗有限公司，
类型：发明
国别省市：