乌司他丁用于治疗急性肝衰竭的用途制造技术

本发明专利技术涉及乌司他丁用于治疗急性肝衰竭的用途。本发明专利技术的乌司他丁对急性肝衰竭具有明显的降低转氨酶，抑制氧化应激损伤、抑制炎症因子释放、抑制凋亡等护肝治疗作用。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及药物化学领域，具体而言，本专利技术涉及乌司他丁新的药物用途，即乌司他丁用于急性肝衰竭方面的用途。研究背景急性肝功能衰竭(acute liver failure，ALF)是由多因素引起的肝细胞严重损 害，临床危重疾病之一，表现出严重肝衰竭症状，如黄疸、凝血障碍、肝性脑病急性肝衰竭 的结果是快速发展成多器官衰竭，死亡率非常高。如不及时实行肝移植术，死亡率可高达 80%-90%，是医学上最最棘手的综合症之一。急性肝衰竭的发病机制及其复杂，感染、药物 /毒素/化学品、心血管、代谢均可以引发急性肝衰竭。其中最为常见的病因是病毒性肝炎， 其次为药物及毒物中毒。据报道，内毒素血症、炎性细胞激活并分泌炎症介质、过度免疫、线 粒体损伤与能量代谢障碍均可能在发病过程中起到关键作用，其中内毒素血症在肝脏损害 机制中尤为重要。乌司他丁(ulinastatimUTI)在男性尿液中提取，由143个氨基酸组成，分子量约 为67kd的酸性糖蛋白，是一种胰蛋白酶抑制剂，可以抑制多种蛋白酶，对各种炎症介质的 释放有明显的抑制作用。目前，乌司他丁在临床上主要用于重症胰腺炎以及胰腺手术后患 者，用于抑制胰蛋白酶活性。近几年研究发现，它对各种炎症因子的产生和释放有明显的抑 制作用，能够阻断全身炎症反应综合征(SIRS)/MODS的过程，对肝肾心肺等重要器官均具 有保护作用。国内已有研究应用UTI对肝脏手术术后，肝脏缺血再灌注损伤中对肝脏保护 作用。但其对内毒素诱导急性肝衰竭的保护作用尚未有人探讨。因此，本专利技术的目的是提 供了乌司他丁用于急性肝损伤的用途，即用于制备治疗急性肝损伤的药物的用途。
技术实现思路
本专利技术提供乌司他丁在治疗急性肝衰竭中的用途。本专利技术的乌司他丁对急性肝衰 竭具有明显的降低转氨酶，抑制氧化应激损伤、抑制炎症因子释放、抑制凋亡等护肝治疗作 用本专利技术的乌司他丁对急性肝损伤是由脂多糖和D-氨基半乳糖引起的急性肝衰竭 的治疗作用。本专利技术还涉及乌司他丁治疗急性肝衰竭的方法。动物实验证实乌司他丁对急性肝衰竭有着一定乌司他丁的治疗剂量根据病情的严重程度，治疗时间而定，一般静脉注射给药每 次100-300万单位，每天给药1-3次。一般来说，医生将根据病情和被治疗患者的具体情况来确定适当的剂量。乌司他丁对急性肝损伤的治疗作用通过以下方法在动物实验上得到证实。一材料与方法1、试剂脂多糖(LPS)购自北京宝希迪科技有限公司。D-Gal购自江苏南通通吕生物制品 有限公司。UTI购自广东天普生化医药股份有限公司。SOD、MDA测定试剂盒购自南京建成 生物工程研究所，L-FABP免疫组化试剂盒购自上海晶天生物科技有限公司，TNF-α ELISA试剂盒购自上海西唐生物科技有限公司试剂盒Caspase-3和Caspase-8试剂盒购自碧云天 生物科技公司2、实验设备01ympusAu560全自动生化分析仪(德国SEMENS公司)；350mm-600mm分光光度计 (上海精密科学仪器有限公司)；台式离心机(上海医用分析仪器厂)；电热恒温水箱(上 海医疗器械厂)；YSlOO光学显微镜(NIKON公司)；手动玻璃勻浆管(金山医疗仪器公司)； 自动酶标仪(BI0-RAD公司)3、动物分组成年健康雄性Sprague-Dawley大鼠186只，(由温州医学院动物中心提供)，体重 200-250g/只，随机分为对照组(A组6只)，模型组(B组)和UTI处理组(C组)，B、C组 再按各个时间点分为6h、12h、24h、36h、48h 5个亚组，每个亚组15只；另外B、C组各留15只，观察其生存率。4、给药正常对照组(空白组)腹腔注射2ml生理盐水；模型组，按体重剂量腹腔注射 LPS40ug. kg—1，D-Gal800mg. kg—1 ；乌司他丁治疗组，按体重剂量腹腔注射LPS 40ug. kg—1， D-Gal800mg. kg—1，半小时后腹腔注射乌司他丁 10U. kg—1，5U. ml—1。分别于造模后各个时间点腹腔注射10%水合氯醛0. 35ml/kg麻醉，切皮开腹，下 腔静脉取血约4ml左右，迅速切取肝脏，滤纸吸干。取肝脏左叶同一部位肝组织行病理检 查，其余肝组织切块分装，放入冻存管中，放入液氮罐，备用。5、检测指标5. 1肝功能，于个时间点留取血液标本2ml，分离血清，全自动生化分析仪测ALT， AST水平。5. 2肝脏组织学检查，新鲜肝组织用甲醛固定保存、脱水、包埋、HE染色、封片保 存，光镜下组织学标本5. 3氧化应激因子SOD活力，MDA含量。制备10%肝组织勻浆，采用黄嘌呤氧化酶法测定超氧化物歧化酶SOD活力，硫代 巴比妥酸(TBA)测肝组织中MDA含量，分别按试剂说明书要求操作。5. 4血浆炎症因子TNF-α检测，采用双抗体夹心ELISA法，按试剂盒说明书要求操 作，显色后经全自动酶标仪检测5. 5免疫组化检测L-FABP表达，采用免疫组织化学染色SABC法检测大鼠肝脏组织 L-FABP蛋白的表达，应用Image-Pro Plus图像分析软件分析。5. 6Caspase-3和Caspase-8活性测定，采用比色法测定ρ硝基苯胺(ρΝΑ)含量， 用Bradford法测定肝脏组织总蛋白质含量。最后根据处理组与空白对照组的倍增关系来 反映组织Caspase-3和Caspase-8活性高低。具体按试剂盒说明书操作6、统计学分析实验数据经SPSS13. 0统计软件进行分析，P < 0. 05为差异有显著性，实验数据均 以mean 士 SD表示，两样本均数比较采用Student-t检验分析。二、结果1、乌司他丁对LPS/D-Gal引起ALF大鼠死亡率的影响大鼠注射LPS/D-Gal后，活动减少，精神疲软，模型组48h内死亡率可达50%和70%，乌司他丁预防给药可显著提高大鼠的活动力和精神状态，48h内死亡率降至40%。生 存率情况见图1。2、乌司他丁对LPS/D-Gal引起ALF大鼠肝脏组织形态学改变的影响模型组，肉眼观肝脏增大，颜色较深，表面粗燥，间有黄色小颗粒样突起，HE染色见 肝细胞出现大片弥漫性出血性坏死，细胞肿胀，肝窦扩张，淤血，肝小叶及支架结构被破坏 有大量炎性细胞浸润。与正常对照组相比有明显差异。乌司他丁给药后上述肝组织损伤和 坏死程度均明显减轻，多数动物仅发生轻、中度肝细胞坏死，伴有一定程度炎性细胞浸润。 (图2.图3.图4)3.乌司他丁对LPS/D-Gal引起ALF大鼠血清ALT、AST水平升高的影响大鼠腹腔注射LPS/D-Gal 6h后，模型组和治疗组血清ALT、AST水平显著升高，与 正常组比较有统计学意义(P < 0. 05)乌司他丁预防给药可明显逆转血清转氨酶异常升高， 和模型组比较有统计学意义(P < 0. 05)。(图5. 6)4.乌司他丁对LPS/D-Gal引起大鼠肝脏组织抗氧化酶SOD活力下降MDA含量升高 的影响LPS/D-Gal使大鼠肝脏组织SOD活性明显降低，模型组和正常组比较有统计学差异 (P < 0. 05)，乌司他丁组与模型组比较，明显升高肝组织中SOD活性，(P < 0. 05)，SD大鼠建模后，模型组MDA的水平显著高于对照组，和正常组比较有统计学差异 (P本文档来自技高网...

【技术保护点】
乌司他丁用于急性肝衰竭的药物用途。

【技术特征摘要】
乌司他丁用于急性肝衰竭的药物用途。2.根据...

【专利技术属性】
技术研发人员：卢洁，陈永平，张晓华，郑毅，
申请(专利权)人：卢洁，陈永平，
类型：发明
国别省市：33[中国|浙江]