用于免疫共沉淀的荧光标记杆状病毒表达载体及其构建方法技术

本发明专利技术公开了一种用于免疫共沉淀的荧光标记杆状病毒表达载体及其构建方法。所述荧光标记杆状病毒表达载体通过在pFastBac

【技术实现步骤摘要】
用于免疫共沉淀的荧光标记杆状病毒表达载体及其构建方法


[0001]本专利技术属于病毒表达载体的构建
，涉及一种用于免疫共沉淀的荧光标记杆状病毒表达载体及其构建方法。

技术介绍

[0002]免疫共沉淀(Co
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IP)是一种基于抗原抗体间的专一性结合进行体内分析蛋白质互作的常用方法，其原理是将待验证互作的两种蛋白在同一细胞内表达，然后利用标签抗体或蛋白自身抗体进行沉淀和免疫印迹检测，最后通过序列分析可推断出其核苷酸序列。由于免疫沉淀是自然生理结合，不受人工影响，因此其结果可信度高，其优势是相互作用的蛋白均在自然界中存在且在天然状态下进行，避免了人为影响，可分离得到自然状态下相互作用的蛋白复合物(冯晓琴,徐峰,王嵬等.通过对免疫共沉淀技术的优化验证蛋白质弱相互作用[J].中国科学院研究生院学报,2013,30(01):18
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23.)。但该方法需要针对目标蛋白制备出一定量的抗体，且要求蛋白达到一定浓度，两种蛋白质的结合可能不是直接结合，可能存在第三者在中间起桥梁作用(李昊,李义,高建梅.免疫共沉淀技术的研究进本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1. 用于免疫共沉淀的荧光标记杆状病毒表达载体，其特征在于，为插入SEQ ID No.1所示的启动子SV40
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IE2、SEQ ID No.2所示的eGFP序列、融合HA标签的相互作用蛋白A序列和融合Flag标签的相互作用蛋白B序列的重组pFastBac
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Dual载体，其中eGFP连接在插入的启动子SV40
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IE2后，融合HA标签的相互作用蛋白A序列连接在pFastBac
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Dual载体自带的启动子 p10后，融合Flag标签的相互作用蛋白B序列连接在pFastBac
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Dual载体自带的启动子polh 后，所述的pFastBac
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Dual载体的序列如SEQ ID No.3所示。2. 根据权利要求1所述的荧光标记杆状病毒表达载体，其特征在于，相互作用蛋白A为RSV Pc4蛋白，其核苷酸序列如SEQ ID No.4所示，相互作用蛋白B为灰飞虱Actin蛋白，其核苷酸序列如SEQ ID No.5所示。3.根据权利要求1所述的荧光标记杆状病毒表达载体的构建方法，其特征在于，具体如下：将SEQ ID No.1所示的启动子SV40
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IE2、SEQ ID No.2所示的eGFP序列插入SEQ ID No.3所示的pFastBac
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Dual载体中，构建IE2启动子启动下的绿色荧光蛋白表达载体pBacDual
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IE2
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eGFP，将pBacDual
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IE2
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eGFP质粒转化DH10Bac细胞，通过蓝白斑筛选、PCR鉴定获得含有重组杆粒Bacmid
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pBacDual
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I...

【专利技术属性】
技术研发人员：梁昌镛，马媛媛，赵淑玲，
申请(专利权)人：扬州大学，
类型：发明
国别省市：