一种定性分析和定量分析基因RILPL1的试剂盒制造技术

本发明专利技术涉及基因技术领域，具体涉及一种定性分析和定量分析基因RILPL1的试剂盒。本发明专利技术提供了一种定性分析基因RILPL1的试剂盒，可以建立RP

【技术实现步骤摘要】
一种定性分析和定量分析基因RILPL1的试剂盒


[0001]本专利技术涉及基因
，具体涉及一种定性分析和定量分析基因RILPL1的试剂盒。

技术介绍

[0002]眼咽远端型肌病(Oculopharyngodistal myopathy，OPDM[MIM:164310])是一种罕见的成年早期发病的遗传性神经肌肉病。该病典型的临床表现为青年发病、缓慢进展性对称性上睑下垂、眼外肌麻痹、面部肌肉力弱、饮水呛咳和吞咽困难等球部症状以及远端肢体为主的肌无力。长期以来该病的致病基因未明，缺乏基因诊断指标，导致OPDM常被误诊和诊断延迟。因此，寻找OPDM的致病基因对该病的诊断、基因治疗和发病机制的研究具有重要意义。
[0003]本专利技术通过临床和骨骼肌病理检查，已确诊并收集来自51个家系的OPDM患者，综合运用Nanopore三代测序、RP
‑
PCR(Repeat
‑
primed polymerase chain reaction)和AL
‑
PCR(Fluorescence amplicon length analysis polymerase chain reaction)，发现位于12号染色体的RILPL1基因5
’
UTR区域CGG重复扩增是OPDM的一个新致病基因，该突变占本组患者的21.6％。因此，RILPL1的5
’
UTR区域CGG重复扩增是OPDM的全新致病突变。
[0004]本专利技术首次鉴定出OPDM的全新致病基因RILPL1，为该疾病的基因诊断、基因治疗靶点和发病机制研究提供基础。同时，本专利技术针对该新基因开发了相对应的RP
‑
PCR和AL
‑
PCR辅助分析的方法，大大提高了对OPDM疾病的基因诊断能力。

技术实现思路

[0005]因此，本专利技术要解决的技术问题在于提供一种定性分析和定量分析基因RILPL1的试剂盒。
[0006]一种定性分析基因RILPL1的试剂盒，包括基于SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列设计的定性检测引物。
[0007]可选的，所述的定性检测引物为RP
‑
PCR引物；
[0008]可选的，所述的定性检测引物包括正向引物RILPL1
‑
F，其核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，反向引物RILPL1
‑
R，其核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示，反向引物RILPL1
‑
linker
‑
R，其核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示；
[0009]可选的，所述定性检测引物中的一个引物标记有荧光报告基团，所述荧光报告基团包括FAM，VIC，Cy3，Cy5，TAMRA，FITC，TRITC，或TET在内的所有荧光基团；
[0010]可选的，所述定性检测引物中的一个引物的5
’
端标记有荧光报告基团。
[0011]可选的，还包括DNA聚合酶、dNTPs、二甲基亚砜和/或甜菜碱。
[0012]可选的，DNA聚合酶为TaKaRa LA Taq DNA聚合酶；
[0013]可选的，dNTPs包括dATP，dTTP，dCTP和7
‑
Deaza
‑
dGTP；
[0014]可选的，还包括LongAmp Hot Start Taq Master Mix。
[0015]可选的，包括独立包装的DNA聚合酶、PCR反应试剂和引物液：
[0016]可选的，采用上述DNA聚合酶、PCR反应试剂和引物液配制的PCR反应体系中，以20μl为计：
[0017]TaKaRa LA Taq DNA聚合酶，0.25U；
[0018]LongAmp Hot Start Taq Master Mix，浓度为1
×
；
[0019]dATP，dTTP，dCTP和7
‑
Deaza
‑
dGTP的各200μM；
[0020]二甲基亚砜，体积百分比为3％；
[0021]甜菜碱，1.4M；
[0022]正向引物RILPL1
‑
F，0.225μM；
[0023]反向引物RILPL1
‑
linker
‑
R，0.225μM；
[0024]反向引物RILPL1
‑
R，0.125μM；用双蒸水补足至20μl。
[0025]一种非疾病诊断的定性分析基因RILPL1的方法，包括所述的定性分析基因RILPL1的试剂盒。
[0026]可选的，配制PCR反应体系，以20μl为计：
[0027]TaKaRa LA Taq DNA聚合酶，0.25U；
[0028]2×
LongAmp Hot Start Taq Master Mix，浓度为1
×
；
[0029]dNTPs，dATP，dTTP，dCTP和7
‑
Deaza
‑
dGTP各200μM；
[0030]二甲基亚砜，体积百分比为3％；
[0031]甜菜碱，1.4M；
[0032]正向引物RILPL1
‑
F，0.225μM；
[0033]反向引物RILPL1
‑
linker
‑
R，0.225μM；
[0034]反向引物RILPL1
‑
R，0.125μM；
[0035]基因组DNA，100ng；
[0036]用双蒸水补足至20μl。
[0037]可选的，PCR反应条件为：95℃下反应5分钟；然后进行10个循环：95℃反应30秒，64℃反应30秒，每个循环下降1℃，72℃下反应2分钟；接着是25个循环：95℃反应30秒，58℃反应30秒，72℃反应2分钟；最后延伸步骤72℃，5分钟。
[0038]一种定量分析基因RILPL1的试剂盒，包括基于SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列设计的定量检测引物。
[0039]可选的，所述的定量检测引物为AL
‑
PCR引物；
[0040]可选的，所述的定量检测引物包括正向引物RILPL1
‑2‑
F，其核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示，反向引物RILPL1
‑2‑
R，其核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示；
[0041]可选的，所述定量检测引物中的一个引物标记有荧光报告基团，所述荧光报告基团包括FAM，VIC，Cy3，Cy5，TAMRA，FITC，TRITC或TET在内的所有荧光基团；
[0042]可选的，所述定量检测引物中的一个引物的5
’
端标记有荧光报告基团。
[0043]可选的，还包括DNA聚合酶、本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种定性分析基因RILPL1的试剂盒，其特征在于，包括基于SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列设计的定性检测引物。2.根据权利要求1所述的定性分析基因RILPL1的试剂盒，其特征在于，所述的定性检测引物为RP
‑
PCR引物；可选的，所述的定性检测引物包括正向引物RILPL1
‑
F，其核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，反向引物RILPL1
‑
R，其核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示，反向引物RILPL1
‑
linker
‑
R，其核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示；可选的，所述定性检测引物中的一个引物标记有荧光报告基团，所述荧光报告基团包括FAM，VIC，Cy3，Cy5，TAMRA，FITC，TRITC，或TET；可选的，所述定性检测引物中的一个引物的5
’
端标记有荧光报告基团。3.根据权利要求1或2所述的定性分析基因RILPL1的试剂盒，其特征在于，还包括DNA聚合酶、dNTPs、二甲基亚砜和/或甜菜碱。4.根据权利要求3所述的定性分析基因RILPL1的试剂盒，其特征在于，DNA聚合酶为TaKaRa LA Taq DNA聚合酶；可选的，dNTPs包括dATP，dTTP，dCTP和7
‑
Deaza
‑
dGTP；可选的，还包括LongAmp Hot Start Taq Master Mix。5.根据权利要求4所述的定性分析基因RILPL1的试剂盒，其特征在于，包括独立包装的DNA聚合酶、PCR反应试剂和引物液；可选的，采用所述DNA聚合酶、PCR反应试剂和引物液配制的PCR反应体系中，以20μl为计：TaKaRa LA Taq DNA聚合酶，0.25U；LongAmp Hot Start Taq Master Mix，浓度为1
×
；dATP，dTTP，dCTP和7
‑
Deaza
‑
dGTP的浓度各200μM；二甲基亚砜，体积百分比为3％；甜菜碱，1.4M；正向引物RILPL1
‑
F，0.225μM；反向引物RILPL1
‑
linker
‑
R，0.225μM；反向引物RILPL1
‑
R，0.125μM；用双蒸水补足至20μl。6.一种非疾病诊断的定性分析基因RILPL1的方法，其特征在于，包括利用权利要求1
‑
5任一项所述的定性分析基因RILPL1的试剂盒。7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，配制PCR反应体系，以20μl为计：TaKaRa LA Taq DNA聚合酶，0.25U；LongAmp Hot Start Taq Master Mix，浓度为1
×
；dNTPs，dATP，dTTP，dCTP和7
‑
Deaza
‑
dGTP各200μM；二甲基亚砜，体积百分比为3％；甜菜碱，1.4M；正向引物RILPL1
‑
F，0.225μM；反向引物RILPL1
‑
linker
‑
R，0.225μM；
反向引物RILPL1
‑
R，0.125μM；基因组DNA，100ng；用双蒸水补足至20μl。8.根据权利要求6或7所述的方法，其特征在于，PCR反应条件为：95℃下反应5分钟；然后进行10个循环：95℃反应30秒，64℃反应30秒，每个循环下降1℃，7...

【专利技术属性】
技术研发人员：于佳希，邓健文，王朝霞，袁云，
申请(专利权)人：北京大学第一医院，
类型：发明
国别省市：