包含N-取代氨基酸残基的肽化合物的制造方法技术

本发明专利技术的课题在于提供有效率地以高收率制造高纯度的肽化合物的方法。发现能够通过在固相法的最初延伸反应之前使肽加载于固相合成用树脂而解决上述课题。成用树脂而解决上述课题。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】包含N
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取代氨基酸残基的肽化合物的制造方法


[0001]本专利技术涉及包含N
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取代氨基酸残基的肽化合物的制造方法。

技术介绍

[0002]中分子化合物(分子量500
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2000)作为能够实现阻碍蛋白质
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蛋白质相互作用等为代表的棘手靶标的药物开发的模态受到关注(非专利文献1)。
[0003]由于肽通常类药性(代谢稳定性或膜透过性)低，因此肽本身难以开发成为医药品。近年来发现，通过肽的环化或在肽中使用N
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甲基氨基酸所示例的非天然氨基酸，代谢稳定性或膜透过性提高(非专利文献2、3)。
[0004]已知在包含非天然氨基酸的环状肽中，特别是包含N
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取代氨基酸的环状肽具有类药性(专利文献1)。
[0005]还提示了包含非天然氨基酸的环状肽的文库化合物对产生蛋白质
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蛋白质相互作用的抑制剂有用(非专利文献4)。
[0006]还明确了包含非天然型氨基酸的环状肽是具有可作为医药品使用程度的膜透过性和代谢稳定性的类药分子的条件，作为医药品模态的环状肽的关注度进一步提高(专利文献2、3)。
[0007]另一方面，关于在序列中包含N
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甲基氨基酸的肽的制造，N
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甲基的空间位阻引起的缩合反应的低反应性和氨基酸残基的α位的外消旋化等导致的目的物的收率降低成为课题。另外，还报告了N
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甲基氨基酸残基部位的酰胺键在酸性条件下容易发生开裂反应、二酮哌嗪形成导致的N末端的2个氨基酸残基的脱离反应容易引起缺损等许多课题，与天然型肽的合成相比，其难度较高(非专利文献5)。
[0008]肽的合成是通过形成酰胺键并延伸所需序列来实现。作为更具体的方法，可以举出液相法和固相法(非专利文献6)。
[0009]其中，固相法包括：加载工序：制备以连接于聚合物树脂(固相合成用树脂)的原子团作为接头、氨基酸或肽的C末端加载于固相合成用树脂的固相合成用树脂的工序；加载于固相合成用树脂的氨基酸或肽的N末端氨基的脱保护工序；缩合工序；通过缩合反应导入N末端被保护的氨基酸作为下一个序列；延伸工序：通过重复达到所需序列的这些脱保护工序和缩合工序，使氨基酸残基连接，直到具有目的序列的肽链为止；脱树脂工序：从固相合成树脂切割具有目的序列的肽。作为延伸工序中使用的N末端被保护的氨基酸，主要广泛使用N末端的氨基被Fmoc基或Boc基保护的氨基酸(非专利文献7、8)。
[0010]固相合成用树脂由与树脂中使用的聚合物结合的成为接头的原子团大致区分，通用包含三苯甲基骨架或苄基骨架的接头原子团结合的固相合成用树脂。更具体地，CTC树脂、Wang树脂、SASRIN树脂或Rink Amide树脂等为代表(非专利文献8)。
[0011]脱树脂工序主要在酸性条件下实施，但根据接头原子团对酸的稳定性来确定脱树脂的容易度。例如，来自CTC树脂的肽的脱树脂反应也可以在弱酸性试剂中实施，上述CTC树脂以三苯甲基骨架作为接头能够加载肽残基。另一方面，来自Wang树脂的肽的脱树脂反应
适用强酸条件，上述Wang树脂以苄基骨架作为接头能够结合肽(非专利文献8)。
[0012]使用CTC树脂时，在更温和的酸性条件下可以进行肽的脱树脂反应，因此在使用CTC树脂的肽的制造中，可以将具有在酸性下容易被除去的保护基的肽在不脱保护该保护基的情况下选择性地脱树脂。因此，CTC树脂对制造被这种保护基保护的肽有用(非专利文献9)。另一方面，报道了在使用CTC树脂的肽的固相合成中，由于肽可以在温和的条件下从CTC树脂脱树脂，因此在缩合反应条件下，加载于CTC树脂的氨基酸或肽与树脂的接头的共价键被切断，目的肽的收率降低(也称为过早切割(premature cleavage)或过早肽释放(premature peptide release)、过早酸切割(premature acidolytic cleavage))(非专利文献10、11)。
[0013]现有技术文献
[0014]专利文献
[0015]专利文献1：国际公开第2013/100132号
[0016]专利文献2：国际公开第2018/115864号
[0017]专利文献3：国际公开第2020/122182号
[0018]非专利文献
[0019]非专利文献1：Future Med.Chem.，2009，1，1289
‑
1310.
[0020]非专利文献2：Acc.Chem.Res.，2008，41，1331
‑
1342.
[0021]非专利文献3：Angew.Chem.Int.Ed.，2013，52，254
‑
269.
[0022]非专利文献4：Chem.Rev.，2019，119，10360
‑
10391.
[0023]非专利文献5：J.Peptide Res.，2005，65，153
‑
166.
[0024]非专利文献6：Amino Acids，Peptides and Proteins in Organic Chemistry：Building Blocks，Catalysis and Coupling Chemistry，Volume 3，2011
[0025]非专利文献7：Amino Acids，2018，50，39
‑
68.
[0026]非专利文献8：Solid phase peptide synthesis(Bachem公司发行)[2020年11月6日检索]、网站<URL：https://www.bachem.com/fileadmin/user_upload/pdf/Catalogs_Brochures/Solid_Phase_Peptide_Synthesis.pdf>
[0027]非专利文献9：QSAR Comb.Sci.，2007，26，1027
‑
1035.
[0028]非专利文献10：Biopolymers，2012，98，89
‑
97.
[0029]非专利文献11：ACS Comb.Sci.，2013，15，229
‑
234.

技术实现思路

[0030]专利技术要解决的课题
[0031]本专利技术的课题在于提供有效率地以高收率制造高纯度的肽化合物的方法。
[0032]非专利文献10、11中说明了在加载于CTC树脂的天然氨基酸的氨基与被Fmoc保护的天然氨基酸的羧基缩合而形成酰胺键的缩合反应中，使用oxyma、HOBt、HOAt等酸性添加剂时，会发生伴随过早切割的产量降低，而使用碱性条件HBTU和DIPEA的缩合反应中，可以提高产量。然而，由于过早切割的抑制效果是有限的，而且在本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种通过固相法制造包含至少一个N
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取代氨基酸残基的肽化合物、其盐或它们的溶剂化物的方法，其特征在于，在固相法中的最初延伸反应之前，肽被加载于固相合成用树脂。2.一种通过固相法制造包含至少一个N
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取代氨基酸残基的肽化合物、其盐或它们的溶剂化物的方法，其包括使肽加载于固相合成用树脂的工序。3.根据权利要求1或2所述的方法，其中，肽是包含两个以上氨基酸残基的寡肽。4.根据权利要求1～3中任一项所述的方法，其中，肽的C末端的氨基酸残基和/或与该C末端的氨基酸残基相邻的氨基酸残基是非天然氨基酸残基。5.权利要求1～4中任一项所述的方法，其中，肽的C末端的氨基酸残基是非天然氨基酸残基。6.根据权利要求5或6所述的方法，其中，非天然氨基酸残基是N
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取代的氨基酸残基。7.根据权利要求1～6中任一项所述的方法，其中，肽的C末端的氨基酸残基通过与氨基的β位的碳原子或γ位的碳原子结合的羧基加载于固相合成用树脂。8.根据权利要求1～7中任一项所述的方法，其中，肽的C末端的氨基酸残基和/或与该C末端的氨基酸残基相邻的氨基酸残基具有体积大的侧链。9.根据权利要求8所述的方法，其中，体积大的侧链是任选取代的支链烷基。10.根据权利要求9所述的方法，其中，支链烷基结合在羧基的α位的碳原子。11.根据权利要求10所述的方法，其中，支链烷基在羧基的β位的碳原子或γ位的碳原子具有分支。12.根据权利要求1～11中任一项所述的方法，其中，固相合成用树脂是CTC树脂、Wang树脂、...

【专利技术属性】
技术研发人员：森田雄也，野村研一，
申请(专利权)人：中外制药株式会社，
类型：发明
国别省市：