一种可促进软骨细胞生长的软骨肽及其制备方法技术

本发明专利技术公开了一种可促进软骨细胞生长的软骨肽及其制备方法，属于多肽制备技术领域，包括如下步骤：获得软骨粗提物；蒸汽爆破得到蒸汽爆破物料；将蒸汽爆破物料和软化水研磨，加入复合蛋白酶，酶解后接种发酵菌种，发酵得到酶解发酵液；向酶解发酵液中加入澄清剂去除杂质，加入脱色剂脱色过滤，纯化，得到软骨肽，本发明专利技术所得软骨肽平均分子量范围在300

【技术实现步骤摘要】
一种可促进软骨细胞生长的软骨肽及其制备方法


[0001]本专利技术属于多肽制备
，具体涉及一种可促进软骨细胞生长的软骨肽及其制备方法。

技术介绍

[0002]骨关节炎(osteoarthritis，OA)是一种以关节软骨的变性、破坏及骨质增生为特征的慢性关节疾病，又称骨关节病、退行性骨关节病，可以影响全身大部分关节包括颈腰椎、膝关节、髋关节和趾间关节等。骨关节炎是逐渐进展加重性的疾病，目前的治疗以延缓病情发展，减轻疼痛和改善关节功能为目的，随着人口老龄化趋势，骨关节炎会越老越影响人们的身体状况和生活质量。
[0003]目前有很多研究发现，从动物软骨中提取的软骨肽，可以缓解骨关节炎患者的疼痛，提高关节灵活度。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的在于提供一种可促进软骨细胞生长的软骨肽及其制备方法，所得软骨肽能够特异性修复受损的软骨细胞，促进细胞外基质生成，起到预防和改善骨关节炎的效果。
[0005]本专利技术的目的可以通过以下技术方案实现：
[0006]一种可促进软骨细胞生长的软骨肽的制备方法，包括如下步骤：
[0007]步骤S1、脱脂：以动物软骨为原料，利用NaOH溶液浸泡2
‑
12h后取出，软化水清洗3
‑
5次，清洗后向物料中加入10倍体积软化水得到溶液a，再接种腐生葡萄球菌和假肠膜明串珠菌，进行发酵，之后排出发酵液，清洗，得到软骨粗提物；
[0008]步骤S2、蒸汽爆破：将上述软骨粗提物置于弹射式汽爆机内，控制温度180
‑
270℃，爆破功率密度EPD(MW/m3)为20
‑
50，保压5
‑
100s，得到蒸汽爆破物料；
[0009]步骤S3、软骨肽制备：将蒸汽爆破物料和软化水按照质量比1：10加入胶体磨中，研磨至细度为2
‑
50μm，加入复合蛋白酶，在温度为45
‑
60℃的条件下，酶解2
‑
8h，得到酶解液；
[0010]将酶解液于90℃环境中灭酶30min，之后控制pH为6
‑
7.5，温度35
‑
40℃下，接种发酵菌种，发酵2
‑
6h，得到酶解发酵液；
[0011]向酶解发酵液中加入澄清剂，静置2
‑
8h去除杂质，向澄清后料液中加入脱色剂，60℃脱色30
‑
60min，板框过滤，所得滤液采用2KD超滤膜过滤，再通过纳滤膜去除无机盐和水溶性游离氨基酸，经过UHT灭菌，浓缩喷雾干燥，进风温度180
‑
220℃，出风温度80
‑
110℃，得到软骨肽。
[0012]进一步地，动物软骨为鸡胸软骨。
[0013]进一步地，NaOH溶液的质量分数为0.1
‑
1％，腐生葡萄球菌的接种量为1
×
107‑8×
107cfu/g，假肠膜明串珠菌接种量为1
×
107‑8×
107cfu/g，以溶液a质量为单位计算，发酵温度为35
‑
40℃，发酵时间2
‑
10h。
[0014]进一步地，腐生葡萄球菌为自行从侗族酸肉中分离，通过表型和生化鉴定得到，假肠膜明串珠菌购自上海谷研实业有限公司。
[0015]进一步地，蒸汽爆破过程中保压时间优选为30
‑
60s，温度优选为200
‑
250℃，爆破功率密度EPD(MW/m3)优选为28
‑
48。
[0016]进一步地，复合蛋白酶加入量为蒸汽爆破物料质量的0.2％
‑
2％，酶解pH值为7.5
‑
8.5，复合蛋白酶由碱性蛋白酶、无花果蛋白酶和猕猴桃蛋白酶按照质量比3:1
‑
2:1
‑
2组成，酶解pH值为7.5
‑
8.5。
[0017]进一步地，发酵菌种接种量1
×
109‑6×
109cfu/g，以蒸汽爆破物料质量为单位计算，发酵菌种为瑞士乳杆菌、啤酒片球菌和布氏乳杆菌的一种或几种按照任意比例组成。
[0018]进一步地，澄清剂的加入量为酶解发酵液质量的0.2
‑
5％，澄清剂由聚天冬氨酸钾、罗望子胶和刺梧桐胶按照质量比1：1
‑
5:2
‑
4组成。
[0019]进一步地，脱色剂加入量为酶解发酵液质量的0.2
‑
5％，脱色剂由活性炭、硅藻土和白土的一种或几种按照任意比例组成。
[0020]进一步地，一种可促进软骨细胞生长的软骨肽，由上述制备方法制得。
[0021]本专利技术的有益效果：
[0022]本专利技术提供一种可促进软骨细胞生长的软骨肽及其制备方法，所制备的软骨肽平均分子量范围在300
‑
3000道尔顿之间，富含有硫酸软骨素、羟脯氨酸、羟赖氨酸，具有安全无毒副作用，易于消化，完全溶于水，溶液澄清透明，耐酸耐高温，可以作为药品、化妆品、保健食品和食品的原料，特异性修复受损的软骨细胞，促进细胞外基质生成，起到预防和改善骨关节炎的效果。
具体实施方式
[0023]下面将结合本专利技术实施例，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其它实施例，都属于本专利技术保护的范围。
[0024]实施例1
[0025]一种可促进软骨细胞生长的软骨肽的制备方法，包括如下步骤：
[0026]步骤S1、称取鸡胸软骨1000g，加入10kg质量分数为0.3％的NaOH溶液浸泡10h，之后用去离子水清洗3次，加入10倍体积水，按照料液重量，按照接种量2.6
×
107cfu/g接种腐生葡萄球菌和接种量3.4
×
107cfu/g假肠膜明串珠菌，温度37℃发酵8h，之后排出发酵液，用去离子水清洗两次，得到软骨粗提物；
[0027]步骤S2、蒸汽爆破：将上述软骨粗提物置于弹射式汽爆机内，控制温度240℃，爆破功率密度EPD(MW/m3)为30，保压60s，得到870g蒸汽爆破物料；
[0028]步骤S3、软骨肽制备：将蒸汽爆破物料和去离子水按照质量比1：10加入胶体磨中，研磨至细度为2
‑
50μm，加入中碱性蛋白酶6g，无花果蛋白酶2g，猕猴桃蛋白酶4g，在温度55℃条件下，酶解6h，得到酶解液；
[0029]将酶解液于90℃环境中灭酶30min，之后控制pH为6.5，温度37℃下，以蒸汽爆破物料计算，按照3.2
×
109cfu/g接种量接种瑞士乳杆菌、1.6
×
109cfu/g接种量接种啤酒片球<本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种可促进软骨细胞生长的软骨肽的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤S1、以动物软骨为原料，利用NaOH溶液浸泡2
‑
12h后取出，清洗后向物料中加入10倍体积软化水得到溶液a，接种腐生葡萄球菌和假肠膜明串珠菌，发酵，之后排出发酵液、清洗，得到软骨粗提物；步骤S2、将上述软骨粗提物置于弹射式汽爆机内，控制温度180
‑
270℃，爆破功率密度为20
‑
50，保压5
‑
100s，得到蒸汽爆破物料；步骤S3、将蒸汽爆破物料和软化水按照质量比1：10加入胶体磨中，研磨至细度为2
‑
50μm，加入复合蛋白酶，在温度为45
‑
60℃的条件下，酶解2
‑
8h，得到酶解液；将酶解液于90℃环境中灭酶30min，控制pH为6
‑
7.5，温度35
‑
40℃下，接种发酵菌种，发酵2
‑
6h，得到酶解发酵液；向酶解发酵液中加入澄清剂，静置2
‑
8h去除杂质，向澄清后料液中加入脱色剂，60℃脱色30
‑
60min，板框过滤，所得滤液采用2KD超滤膜过滤，再通过纳滤膜去除无机盐和水溶性游离氨基酸，经过UHT灭菌，浓缩喷雾干燥，得到软骨肽。2.根据权利要求1所述的一种可促进软骨细胞生长的软骨肽的制备方法，其特征在于，NaOH溶液的质量分数为0.1
‑
1％。3.根据权利要求1所述的一种可促进软骨细胞生长的软骨肽的制备方法，其特征在于，腐生葡萄球菌的接种量为1
×
107‑8×

【专利技术属性】
技术研发人员：王海燕，刘爱青，刘爽，王佳，
申请(专利权)人：安徽盛美诺生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：