CD19定向的嵌合抗原受体构建体制造技术

本申请公开了编码抗CD19抗体的结构域的CAR构建体、包括并表达CD19CAR构建体的T细胞以及使用方法，如使用表达所述CD19CAR构建体的CAR

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】CD19定向的嵌合抗原受体构建体
[0001]本申请根据35U.S.C.
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119要求于2020年10月12日提交的并且题为“CD19定向的嵌合抗原受体构建体”的美国临时申请第63/090,440号的优先权的权益，所述临时申请的内容通过引用整体并入本文。
[0002]序列表
[0003]本申请含有名称为2021
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10
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11_01223
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0087
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00PCT_Sequence_Listing_ST25.txt的序列表，所述序列表于2021年10月11日创建，并且大小为56,997字节。序列表已经以ASCII格式电子提交并且特此通过引用整体并入。


[0004]本公开提供了一种针对CD19和表达CD19 CAR的T细胞群体的CAR(嵌合抗原受体)构建体。T细胞表现出对表达CD19的肿瘤细胞的细胞毒性，并且可以用于治疗疾病，如癌症。

技术介绍

[0005]嵌合抗原受体(CAR)是合成受体，其中靶向部分与单个融合分子中的一个或多个信号传导结构域相关。具有新型特异性的T细胞已经通过编码CAR的构建体的基因转移而产生，所述CAR可以与所关注靶标特异性结合。CAR已被成功地用于工程化T细胞，使其针对来自各种恶性肿瘤(包含淋巴瘤和实体瘤)的肿瘤细胞的表面处表达的抗原。
[0006]通常，CAR的胞外靶向部分由单链抗体(scFv)的抗原结合结构域组成，包括通过柔性连接子接合的单克隆抗体的轻和重可变片段。第一代CAR的胞内信号传导结构域来自CD3ζ或Fc受体γ链的胞质区。第一代CAR已被证明成功地重定向了T细胞的细胞毒性，然而，它们未能在体内提供延长的扩增和抗肿瘤活性。来自包含CD28、OX
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40(CD134)和4
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1BB(CD137)的共刺激分子的信号传导结构域已被单独(第二代CAR)或组合(第三代CAR)添加，以增强CAR修饰的T细胞的存活率和增加所述细胞的增殖。
[0007]T细胞具有处理正常或恶性细胞的能力，如在病毒性和自身免疫性疾病中以及在罕见的癌症自发缓解中所见。然而，T细胞很容易对自身或肿瘤抗原产生耐受性，并且“免疫监视”未能阻止临床上明显的每种癌症的肿瘤进展。CAR
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T研究的目标是通过提供抗体定义的抗恶性细胞标志物识别根据恶性细胞对CAR所识别的抗原的表达杀死所述恶性细胞，来为患者的T细胞提供特异性和亲和力，而不考虑其“内源性”T细胞受体(TCR)库。
[0008]已经探索了通过输注T细胞工程化的CAR用于重定向杀肿瘤活性的过继性免疫疗法来治疗转移性癌症。CAR是通过将抗体的抗原识别结构域与T细胞的受体的信号传导结构域接合而构建的。用CAR基因修饰T细胞使T细胞具有重新靶向的抗体型抗肿瘤细胞毒性。因为杀伤不受主要组织相容性复合物(MHC)限制，所述方法为所有携带相同抗原的患者提供了一种通用疗法。用抗原特异性CAR工程化的T细胞被称为“CAR
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T细胞”或“T体”(Eshar等人,1993《美国国家科学院院刊(Proc.Nat'l.Acad.of Sci.USA)》90(2):720
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724)。第一代CAR，免疫球蛋白
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T细胞受体(IgTCR)，被工程化为含有仅传递激活刺激(信号1)的信号传导结构域(TCR
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CD3ζ)(Gross等人,1989《美国国家科学院院刊》86(24):10024
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10028；Eshar等
人,1993《美国国家科学院院刊》90(2):720
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724；Haynes等人,2001《免疫学杂志(J Immunol.)》166(1):182
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187)。由于次优激活，被工程化为仅表达第一代CAR的T细胞表现出有限的抗肿瘤功效。第2代CAR，免疫球蛋白D28
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CD3ζ
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T细胞受体(IgCD28TCR)，将共刺激CD28(信号2)整合到第一代受体中，增加了CAR
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T细胞的抗肿瘤能力(Finney等人,1998《免疫学杂志》161(6):2791
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2797；Hombach等人,2001《免疫学杂志》167(11):6123
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6131；Maher等人,2002《自然生物技术(Nat Biotechnol.)》20(1):70
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7；Emtage等人,2008《临床癌症研究(Clin Cancer Res.)》14(24):8112
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812；Lo等人,2010《临床癌症研究》16(10):2769
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2780)。
[0009]目前使用过继性免疫疗法治疗患者的方案基于自体细胞转移。在这种方法中，从患者体内回收T淋巴细胞，对其进行基因修饰或体外选择，在体外培养，以便在必要时扩增细胞数量，并且最后将其输注到患者体内。除了淋巴细胞输注之外，宿主(患者)可以以支持T细胞移植或其参与免疫应答的其它方式进行操纵，例如预处理(用放射或化学疗法)和施用淋巴细胞生长因子(如IL
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2)。每个患者接受单独制造的治疗，使用患者自己的淋巴细胞(即，自体疗法)。
[0010]可替代地，可以使用同种异体策略，将来自供体的T细胞输注到患者体内。可以预先用CAR构建体转染来自健康供体的同种异体T细胞，用于治疗癌症，并且避免昂贵且耗时的制备和测试每个个体患者的T细胞。为了避免供体细胞与患者之间的不相容性，供体可以是与患者HLA匹配的，或者表达CAR构建体的同种异体T细胞可以被进一步基因改变以消除内源性T细胞受体的表达。
[0011]CD19是免疫球蛋白超家族的95kD的II型跨膜糖蛋白，具有由B细胞谱系的细胞表达的长的C端胞质结构域。在个体发育期间，CD19出现在B谱系定向干细胞上，并且其表达随着B细胞成熟而增加，其中成熟B细胞表达的表面密度为未成熟B细胞的大约三倍。CD19也在恶性B细胞上表达，并且已被用作来源于B细胞谱系的抗肿瘤疗法的靶标，包含例如非霍奇金淋巴瘤(NHL)、急性淋巴细胞白血病(ALL)和慢性淋巴细胞白血病(CLL)。

技术实现思路

[0012]本公开提供了一种编码嵌合抗原受体(CAR)的核酸分子，所述嵌合抗原受体包括能够靶向表达CD19的肿瘤细胞的抗CD19抗体。更具体地，本公开提供了一种CD19 CAR核酸构建体，其中编码的CAR包括与CD19特异性结合的单链抗体(scFv)，其中所述scFv抗体具有轻链可变(VL)结构域和重链可变(VH)结构域，所述VL结构域具有与SEQ ID NO:1的氨基酸序列至少95％同源的氨基酸序列，所述VH结构域具有与SEQ ID NO:2的氨基酸序列至少95％同源的氨基酸序列。编码的CD19 CAR进一步包含跨膜结构域和至少一个胞内信号传导结构域，并且优选地进一步包含位于抗原本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种CD19嵌合抗原受体(CAR)核酸构建体，其包括编码以下各项的核酸序列：i)scFv抗体，所述scFv抗体与CD19结合，其中所述scFv抗体包括重链可变(VH)结构域和轻链可变(VL)结构域，所述VH结构域包括与SEQ ID NO:1的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列，所述VL结构域包括与SEQ ID NO:2的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列；ii)长度为至少65个氨基酸的铰链区；iii)跨膜结构域；以及iv)第一胞内结构域和第二胞内结构域，所述第一胞内结构域与SEQ ID NO:7具有至少95％同一性，所述第二胞内结构域与SEQ ID NO:8具有至少95％同一性，其中与不表达由所述构建体编码的CAR的T细胞对CD19阳性肿瘤细胞表现出的细胞毒性相比，表达由所述构建体编码的所述CAR的T细胞对所述CD19阳性肿瘤细胞表现出更高的细胞毒性。2.根据权利要求1所述的CD19 CAR构建体，其中所述scFv抗体包括位于所述重链可变(VH)结构域与所述轻链可变(VL)结构域之间的肽连接子。3.根据权利要求1所述的CD19 CAR构建体，其中所述肽连接子包括SEQ ID NO:3的氨基酸序列。4.根据权利要求1所述的CD19 CAR构建体，其中所述scFv抗体包括SEQ ID NO:12的氨基酸序列或与SEQ ID NO:12具有至少95％同一性的氨基酸序列。5.根据权利要求1所述的CD19 CAR构建体，其中所述铰链区包括与SEQ ID NO:4具有至少95％同一性的第一氨基酸序列和与SEQ ID NO:5具有至少95％同一性的第二氨基酸序列。6.根据权利要求1所述的CD19 CAR构建体，其中所述铰链区包括与SEQ ID NO:13具有至少95％同一性的氨基酸序列。7.根据权利要求1所述的CD19 CAR构建体，其中跨膜区包括与SEQ ID NO:6具有至少95％同一性的氨基酸序列。8.根据权利要求1所述的CD19 CAR构建体，其中所述CAR包括信号肽。9.根据权利要求1所述的CD19 CAR构建体，其中所述CAR包括myc标签(SEQ ID NO:15)。10.根据权利要求1所述的CD19 CAR构建体，其中所述CAR包括与SEQ ID NO:24的氨基酸序列具有至少95％同一性的氨基酸序列。11.根据权利要求1所述的CD19 CAR构建体，其中所述CAR包括SEQ ID NO:24的氨基酸序列。12.根据权利要求1所述的CD19 CAR构建体，其中所述CAR包括与SEQ ID...

【专利技术属性】
技术研发人员：Q，
申请(专利权)人：索伦托药业有限公司，
类型：发明
国别省市：