靶向MRSA嵌合抗原受体、药物递送体、CAR-巨噬细胞及应用制造技术

本发明专利技术属于生物医药技术领域，涉及靶向MRSA嵌合抗原受体、药物递送体、CAR

【技术实现步骤摘要】
靶向MRSA嵌合抗原受体、药物递送体、CAR
‑
巨噬细胞及应用


[0001]本专利技术属于生物医药
，涉及靶向MRSA(耐甲氧西林金黄色葡萄球菌)嵌合抗原受体、药物递送体、CAR
‑
巨噬细胞及应用。

技术介绍

[0002]公开该
技术介绍
部分的信息仅仅旨在增加对本专利技术的总体背景的理解，而不必然被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已经成为本领域一般技术人员所公知的现有技术。
[0003]MRSA是临床常见的多重耐药菌，其造成的感染已成为世界三大难治感染性疾病之一。
[0004]巨噬细胞因天然的吞噬、消化、抗原提呈作用，是机体抗感染的第一道防线。然而，据专利技术人研究了解，MRSA能够通过表达蛋白和多糖抵抗由补体和抗体介导的调理作用，从而逃避巨噬细胞的吞噬；而且，MRSA能够诱导caspase
‑
11/caspase
‑
4(CASP11)蛋白在巨噬细胞内表达，CASP11可介导胞内MRSA逃逸线粒体活性氧(mtROS)的杀伤，进而实现MRSA在巨噬细胞内持久存活。因此，MRSA能够保护自身免受巨噬细胞清除。若能有效克服MRSA的免疫逃逸，则有利于巨噬细胞实现耐药菌MRSA的有效根除。

技术实现思路

[0005]为了解决现有技术的不足，本专利技术的目的是提供靶向MRSA嵌合抗原受体、药物递送体、CAR
‑
巨噬细胞及应用，本专利技术通过特异性靶向MRSA嵌合抗原受体修饰巨噬细胞，能够实现对耐药菌MRSA的精准识别，同时能够提高巨噬细胞对耐药菌MRSA的吞噬活性和抗原呈递能力，从而提高对MRSA感染性疾病的治疗效果，增强机体抗菌免疫，降低MRSA感染的复发概率，改善患者预后。
[0006]为了实现上述目的，本专利技术的技术方案为：
[0007]一方面，一种靶向MRSA嵌合抗原受体，如SEQ ID NO.1所示。
[0008]本专利技术提供的靶向MRSA嵌合抗原受体能够特异性靶向MRSA，从而为实现对耐药菌MRSA的精准识别提供基础。
[0009]另一方面，一种编码上述MRSA嵌合抗原受体的核酸分子，所述核酸分子能够转录成表达靶向MRSA嵌合抗原受体的mRNA，所述表达靶向MRSA嵌合抗原受体的mRNA如SEQ ID NO.2所示，所述mRNA为线性或环状。
[0010]本专利技术通过提供所述核酸分子能够转录成表达靶向MRSA嵌合抗原受体的mRNA，从而实现靶向MRSA嵌合抗原受体的表达。
[0011]第三方面，一种药物递送体，由脂质纳米粒包覆RNA药物形成，所述RNA药物包括表达靶向MRSA嵌合抗原受体的mRNA(SasA
‑
CAR mRNA)和靶向CASP11的小干扰RNA(siCASP11)；
[0012]所述脂质纳米粒由可电离脂质、胆固醇、DOPE、PEG
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脂质按照摩尔比(5～50):(5～60):(5～80):(0.2～25)自组装形成，PEG
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脂质为DMG
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PEG和DSPE
‑
PEG
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CRV的混合物，DMG
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PEG和DSPE
‑
PEG
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CRV的摩尔比为(1～10):(1～10)；
[0013]所述可电离脂质(YHS
‑
12)的化学结构式如下所示：
[0014][0015]通过特异性CAR修饰能够增强巨噬细胞对MRSA的吞噬活性，进而克服MRSA的细胞外免疫逃逸。但MRSA已经进化出巨噬细胞胞内免疫逃逸策略，能够避免在巨噬细胞内被消化杀伤，因此仅通过增强巨噬细胞对MRSA的吞噬活性无法彻底清除MRSA。鉴于CASP11蛋白在介导MRSA逃逸巨噬细胞胞内线粒体活性氧(ROS)杀伤中发挥关键作用，我们通过添加针对CASP11蛋白的siRNA(siCASP11)来有效沉默CASP11蛋白，实现基于线粒体活性氧介导的胞内MRSA杀伤。由于SasA
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CAR mRNA与siCASP11的分子量、稳定性和分子构象等分子特征截然不同，因此将两者共同包载是本专利技术实现RNA药物递送的难点。本专利技术实验表明通过选择YHS
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12、胆固醇、DOPE、DMG
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PEG和DSPE
‑
PEG
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CRV共同形成的脂质纳米粒作为载体，能够大大提高对SasA
‑
CAR mRNA与siCASP11的包封率，使其包封率可达90％以上，从而显著提高了RNA药物的利用效率。
[0016]第四方面，一种上述药物递送体的制备方法，通过乙醇预混法将可电离脂质、胆固醇、DOPE、PEG
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脂质制成脂质体，然后通过微流控方法将所述脂质体与RNA药物进行复合包载。
[0017]第五方面，一种CAR
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巨噬细胞，由上述靶向MRSA嵌合抗原受体修饰的巨噬细胞。
[0018]第六方面，一种CAR
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巨噬细胞的制备方法，采用上述药物递送体转染巨噬细胞。
[0019]第七方面，一种上述药物递送体或CAR
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巨噬细胞在制备MRSA感染性疾病的药物中的应用。
[0020]本专利技术的有益效果为：
[0021]1.本专利技术提供了靶向MRSA嵌合抗原受体，并利用靶向MRSA嵌合抗原受体修饰巨噬细胞，能够实现对耐药菌MRSA的精准识别，从而提高巨噬细胞对MRSA感染性疾病的治疗效果。
[0022]2.本专利技术通过脂质纳米粒包覆RNA药物形成药物递送体，并利用药物递送体转染巨噬细胞，实现了核酸药物的有效递送。通过选择YHS
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12、胆固醇、DOPE、DMG
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PEG和DSPE
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PEG
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CRV共同形成的脂质纳米粒作为载体包覆SasA
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CAR mRNA与siCASP11，大大提高RNA药物的包封率，从而提高RNA药物的有效利用。另外，本专利技术通过乙醇预混法将YHS
‑
12、辅助脂质与功能化脂质自组装制得脂质体，进一步通过微流控能够有效实现脂质纳米粒与RNA药物的复合，从而有效实现RNA药物的有效递送。
[0023]3.本专利技术通过药物递送体在体内外有效构建CAR
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巨噬细胞。经验证，该CAR
‑
巨噬细胞对MRSA具有显著的吞噬、胞内消化作用并能有效重建机体抗菌免疫，改善疾病治疗效果。
附图说明
[0024]构成本专利技术的一部分的说明书附图用来提供对本专利技术的进一步理解，本专利技术的示意性实施例及其说明用于解释本专利技术，并不构成对本专利技术的不当限定。
[0025]图1是本专利技术实施例2中可电离脂质YHS
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12的合成路线图；
[0026]图2是本专利技术实施例3的CRV<本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种靶向MRSA嵌合抗原受体，其特征是，如SEQ ID NO.1所示。2.一种编码权利要求1所述的MRSA嵌合抗原受体的核酸分子，其特征是，所述核酸分子能够转录成表达靶向MRSA嵌合抗原受体的mRNA，所述表达靶向MRSA嵌合抗原受体的mRNA如SEQ ID NO.2所示，所述mRNA为线性或环状。3.一种药物递送体，其特征是，由脂质纳米粒包覆RNA药物形成，所述RNA药物包括表达靶向MRSA嵌合抗原受体的mRNA和靶向CASP11的小干扰RNA；所述脂质纳米粒由可电离脂质、胆固醇、DOPE、PEG
‑
脂质按照摩尔比(5～50):(5～60):(5～80):(0.2～25)自组装形成，PEG
‑
脂质为DMG
‑
PEG和DSPE
‑
PEG
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CRV的混合物，DMG
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PEG和DSPE
‑
PEG
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CRV的摩尔比为(1～10):(1～10)；所述可电离脂质的化学结构式如下所示：4.如权利要求3所述的药物递送体，其特征是，可电离脂质、胆固醇、DOPE、PEG
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脂质的摩尔比为(10～25):(15～30):(10～40):(0.5～2.5)，优选为15:10:25:2.5；或，DMG
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PEG和DSPE
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PEG
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CRV的摩尔比为5:(4～6)；或，S...

【专利技术属性】
技术研发人员：姜新义，唐春伟，韩坤，赵坤，
申请(专利权)人：山东大学，
类型：发明
国别省市：