蟾蜍它灵在制备抗肿瘤药物中的应用制造技术

本发明专利技术提供了蟾蜍它灵在制备抗肿瘤药物中的应用，涉及抗肿瘤药物技术领域。本发明专利技术提供了蟾蜍它灵在制备抗肿瘤药物中的应用，所述肿瘤包括肝癌、肺癌、胃癌、结肠癌、乳腺癌、卵巢癌、口腔癌、食道癌、胆管癌、白血病和神经胶质瘤中的一种或多种。本发明专利技术公开了蟾蜍它灵具有广谱抗肿瘤作用，在一定浓度下对肿瘤细胞具有很高的抑制率，明显的强于阳性药10

【技术实现步骤摘要】
蟾蜍它灵在制备抗肿瘤药物中的应用


[0001]本专利技术涉及抗肿瘤药物
，特别是涉及蟾蜍它灵在制备抗肿瘤药物中的应用。

技术介绍

[0002]肿瘤(Tumor)是机体在各种致癌因素作用下，局部组织的某一个细胞在基因水平上失去对其生长的正常调控，导致其克隆性异常增生而形成的新生物。肿瘤是一种严重危害人类健康的疾病，它在很多国家引起的死亡率居第二位，仅次于心血管疾病。通常用于治疗肿瘤的手段有手术、化疗和放疗。现有的治疗手段往往存在副作用很大的缺点。现有的化疗药物大多有毒性大，对人体健康细胞损伤大的缺点。同时由于肿瘤细胞耐药性等原因，已有的治疗药物或手段又对某些肿瘤不太有效。
[0003]近年来，专利技术人致力于从天然产物提取物中分离具有生物活性物质。蟾蜍它灵是一种蟾蜍毒素，主要是从蟾蜍毒素中提取获得。蟾蜍它灵的结构式如下：
[0004][0005]但是还未有关于蟾蜍它灵抗肿瘤的相关报道。

技术实现思路

[0006]为了解决上述问题，本专利技术提供了蟾蜍它灵在制备抗肿瘤药物中的应用，提供了蟾蜍它灵的新用途。
[0007]为了实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：
[0008]本专利技术提供了蟾蜍它灵在制备抗肿瘤药物中的应用，所述肿瘤包括肝癌、肺癌、胃癌、结肠癌、乳腺癌、卵巢癌、口腔癌、食道癌、胆管癌、白血病和神经胶质瘤中的一种或多种。
[0009]优选的，所述药物还包括医学上可接受的辅料。
[0010]肿瘤细胞的基因表达在被施用蟾蜍它灵前后有明显的变化。通过流式细胞仪的检测，施用蟾蜍它灵后，肿瘤细胞的bcl
‑
2、c
‑
myc和c
‑
ha
‑
ras的表达明显降低，同时p53、bax和c
‑
fos的表达上升。c
‑
myc和c
‑
ha
‑
ras的表达过量与肿瘤形成有密切关系，而bcl
‑
2是抑制肿瘤细胞凋亡的基因。c
‑
fos的表达多少是肿瘤细胞分化的标志，他的表达上升说明蟾蜍它灵使肿瘤细胞的分化细胞上升。P53基因可促进肿瘤细胞的凋亡：bax基因的表达上升也可以
促进肿瘤细胞的凋亡。这些结果均说明蟾蜍它灵可使肿瘤细胞产生分化凋亡。
[0011]本专利技术公开了蟾蜍它灵具有广谱抗肿瘤作用，在一定浓度下对肿瘤细胞具有很高的抑制率，明显的强于阳性药10
‑
羟基喜树碱，而对于正常细胞有较低毒性。所述的肿瘤包括但不限于肝癌、肺癌、胃癌、结肠癌、乳腺癌、卵巢癌、口腔癌、食道癌、胆管癌、白血病和申请胶质瘤。
具体实施方式
[0012]本专利技术提供了蟾蜍它灵在制备抗肿瘤药物中的应用，所述肿瘤包括肝癌、肺癌、胃癌、结肠癌、乳腺癌、卵巢癌、口腔癌、食道癌、胆管癌、白血病和神经胶质瘤中的一种或多种。在本专利技术中，所述药物还优选包括医学上可接受的辅料。本专利技术对所述蟾蜍它灵的来源没有特殊限定，采用常规的市售产品或采用常规制备方法制备得到即可。本专利技术对所述药物的剂型没有特殊限定，采用蟾蜍它灵可接受的剂型即可。
[0013]为了进一步说明本专利技术，下面结合实施例对本专利技术进行详细地描述，但不能将它们理解为对本专利技术保护范围的限定。
[0014]从千年不烂心中制备蟾蜍它灵
[0015]蟾蜍它灵的提取和纯化方法为把千年不烂心的全草粉碎，碎片干燥后用醇提取。提取物干燥后先后用有机溶剂提取，再用氯仿：甲醇(1：1)进行洗脱得到纯蟾蜍它灵。其收获为1公斤千年不烂心提取200
‑
400mg蟾蜍它灵。
[0016]实施例1
[0017]蟾蜍它灵的抗人肝癌细胞(HepG2)作用
[0018](1)在96孔细胞培养板内无菌接种人肝癌细胞，每孔接种0.1ml含1
×
105细胞完全细胞培养液DMEM。
[0019](2)每孔加入0.1ml含不同浓度如上制备的蟾蜍它灵完全细胞培养液DMEM，与细胞混合后，将细胞放入37℃细胞培养箱内(含5％CO2)培养48小时。
[0020](3)终止细胞培养，用MTT法测定培养细胞活力。
[0021](4)结果发现蟾蜍它灵对上述人肝癌细胞生长具有明显的抑制作用，细胞抑制作用的IC
50
为0.245
±
0.05μM，而相对应的正常细胞生长无明显抑制作用，相对应的阳性药物组为10
‑
羟基喜树碱，其细胞抑制的IC
50
为6.49
±
0.86μM。
[0022](5)用流式细胞术分析结果表明：0.245μM蟾蜍它灵能明显的诱导上述人肝癌细胞发生凋亡，其凋亡率达70％。
[0023](6)DNA ladder和凝胶电泳结果表明：肿瘤细胞的bcl
‑
2、c
‑
myc和c
‑
ha
‑
ras的表达明显降低，同时p53、bax和c
‑
fos的表达上升。
[0024]实施例2
[0025]蟾蜍它灵的抗人肝癌细胞耐药株组(R
‑
HepG2)作用
[0026](1)在96孔细胞培养板内无菌接种人肝癌细胞耐药株，每孔接种0.1ml含1
×
105细胞完全细胞培养液DMEM。
[0027](2)每孔加入0.1ml含不同浓度如上制备的蟾蜍它灵完全细胞培养液DMEM，与细胞混合后，将细胞放入37℃细胞培养箱内(含5％CO2)培养48小时。
[0028](3)终止细胞培养，用MTT法测定培养细胞活力。
[0029](4)结果发现蟾蜍它灵对上述人肝癌细胞耐药株生长具有明显的抑制作用，细胞抑制作用的IC
50
为8.2
±
0.5μM，而相对应的正常细胞生长无明显抑制作用，相对应的阳性药物组为10
‑
羟基喜树碱，其细胞抑制的IC
50
没有检测出。
[0030](5)用流式细胞术分析结果表明：8.2μM蟾蜍它灵能明显的诱导上述人肝癌细胞发生凋亡，其凋亡率达70％。
[0031](6)DNA ladder和凝胶电泳结果表明：肿瘤细胞的bcl
‑
2、c
‑
myc和c
‑
ha
‑
ras的表达明显降低，同时p53、bax和c
‑
fos的表达上升。
[0032]实施例3
[0033]蟾蜍它灵的抗人乳腺癌组(MCF
‑
7)作用
[0034](1)在96孔细胞培养板内无菌接种人乳腺癌细胞，每孔接种0.1ml含1
×
105细胞完全细胞培养液DMEM。
[0035](2)每孔加入0.1ml含不同浓度如上制备的蟾蜍它灵完全细胞培养液DMEM，与细胞混合本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.蟾蜍它灵在制备抗肿瘤药物中的应用，所述肿瘤包括肝癌、肺癌、胃癌、结肠癌、乳腺癌、卵巢癌、口腔癌、食道癌、胆管癌、白血...

【专利技术属性】
技术研发人员：贾强，陈烽华，江津津，黄利华，
申请(专利权)人：广州城市职业学院，
类型：发明
国别省市：