本发明专利技术公开了一种ANRIL在制备慢性肾脏病相关心血管病诊断试剂盒中的应用，属于慢性肾脏病诊断技术领域，本发明专利技术发现ANRIL在慢性肾脏病患者血浆中表达增高，其表达水平与肾功能负相关，与血管内皮功能状态负相关，在一定程度上可以反映CKD患者心血管病变的严重程度。同时，进一步探讨并验证其参与介导内皮细胞功能障碍的作用及机制。该检查方法简单易行，对受试者创伤性小，受试者顺从性更佳，同时为靶向性药物的研发奠定了理论基础。向性药物的研发奠定了理论基础。向性药物的研发奠定了理论基础。
【技术实现步骤摘要】
ANRIL在制备慢性肾脏病相关心血管病变诊断试剂盒中的应用
[0001]本专利技术涉及慢性肾脏病诊断
，更具体地说是涉及ANRIL在制备慢性肾脏病相关心血管病诊断试剂盒中的应用。
技术介绍
[0002]慢性肾脏病(chronic kidney disease，CKD)是影响全球人类健康的重要疾病，具有高发病率、高致死率、低知晓率的流行病学特点。我国成人慢性肾脏病的患病率高达10.8％，意味着患病人数达1.195亿之众，但其知晓率却仅有12.5％。糖尿病、高血压、肥胖和老龄化的增加，极大的推动CKD患病率的增加。同时，2020年WHO数据显示CKD在全球死因排行中已上升至第11位。心血管疾病是CKD患者的主要死因，所致死亡率约占慢性肾脏病患者总死亡率的50％。CKD是心血管疾病的独立危险因素，研究证实，肾小球滤过率(estimated glomerular filtration rate,eGFR)与心血管事件发生率和死亡率呈负相关；且随着肾功能下降，心血管疾病如动脉粥样硬化等发病率明显上升。心血管事件预测及早期诊断是降低CKD患者不良预后需解决的关键问题。
[0003]长链非编码RNA(long non
‑
coding RNAs，lncRNAs)是一类核苷酸数量大于200，且不具备蛋白质编码功能的RNA。可通过组蛋白修饰、染色质重塑、DNA甲基化和去甲基化、RNA干扰等多种机制在表观遗传学水平、转录水平、转录后水平对细胞的增殖、代谢、迁移和侵袭等产生重要的调控作用。血清血浆中的LncRNAs性质稳定、含量丰富、易于定量检测，且存在显著的疾病特异性，可以作为疾病的生物标志物。然而LncRNAs在CKD心血管事件中的作用仍未知，临床上尚缺乏用于CKD心血管事件预测的较为稳定的生物标志物的报道。
[0004]因此，如何提供一种可以作为CKD心血管事件发病诊断的标志物并对其进行应用是本领域技术人员亟需解决的问题。
技术实现思路
[0005]有鉴于此，本专利技术将ANRIL作为诊断慢性肾脏病的标志物，ANRIL在慢性肾脏病患者血浆中表达增高，其表达水平与肾功能负相关，与血管内皮功能状态负相关，在一定程度上可以反映CKD患者心血管病变的严重程度。
[0006]为了实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：
[0007]ANRIL(INK4基因座的反义非编码RNA)在制备慢性肾脏病相关心血管病诊断试剂盒中的应用。优选地，ANRIL作为一种慢性肾脏病的血清标志物，与慢性肾脏病血管内皮功能障碍、线粒体裂变异常相关，患者血浆中ANRIL水平升高。
[0008]优选地，以血清中ANRIL为检测指标，检测程序为：
[0009][0010]作为与上述技术方案相同的专利技术构思，本专利技术还请求保护一种诊断试剂盒，包括：检测引物和检测试剂；其中，所述引物序列如SEQ ID NO.1～SEQ ID NO.4所示；
[0011]ANRIL
‑
F：5
’‑
TACATCCGTCACCTGACACG
‑3’
，如SEQ ID NO.1所示；
[0012]ANRIL
‑
R：5
’‑
ACGAGGGGAGCCAGGAATAA
‑3’
，如SEQ ID NO.2所示；
[0013]β
‑
actin
‑
F：5
’‑
GAAGAGCTACGAGCTGCCTGA
‑3’
，如SEQ ID NO.3所示；
[0014]β
‑
actin
‑
R：5
’‑
CAGACAGCACTGTGTTGGCG
‑3’
，如SEQ ID NO.4所示。
[0015]优选地，检测试剂包括：
[0016][0017]作为与上述技术方案相同的专利技术构思，本专利技术还请求保护一种引物，如SEQ ID NO.1～SEQ ID NO.4所示。
[0018]作为与上述技术方案相同的专利技术构思，本专利技术还请求保护以ANRIL为作用靶点在制备治疗慢性肾脏病药物中的应用。
[0019]优选地，以ANRIL为作用靶点具体为：抑制ANRIL表达可改善尿毒症毒素IS所致的内皮细胞损伤、改善尿毒症毒素IS所致的内皮细胞线粒体裂变异常、逆转分裂关键蛋白DRP
‑
1和融合相关蛋白MFN2表达的异常。
[0020]经由上述的技术方案可知，与现有技术相比，本专利技术提供lncRNAANRIL在慢性肾脏病心血管事件预测中的作用。发现ANRIL与肾功能负相关，与血管内皮功能状态负相关；进一步研究证明，ANRIL可以介导血管内皮细胞功能相关蛋白表达异常，线粒体裂变异常，从而引起其功能障碍。因此，基于ANRIL为标志物，作为诊断慢性肾脏病心血管并发症的诊断标准之一，为临床上对慢性肾脏病心血管并发症的检测提供了简便快捷的方法，也为慢性肾脏病心血管并发症的靶向性药物提供了理论基础。
附图说明
[0021]为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本专利技术的实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据
提供的附图获得其他的附图。
[0022]图1为ANRIL与慢性肾脏病血管内皮功能障碍相关统计图；A为real
‑
timePCR检测显示，与健康人群对比，CKD患者血浆ANRIL水平明显增高，B为Spearman相关分析显示，ANRIL表达与肾小球滤过率(eGFR)呈负相关，C为ANRIL表达与血管内皮功能状态评价指标FMD水平负性相关，D为ELISA检测显示与健康人群对比，CKD患者血浆BDNF浓度明显降低，E为Spearman相关分析显示，CKD患者血浆BDNF浓度与肾小球滤过率(eGFR)呈负相关，F为ANRIL表达与BDNF水平负性相关，*表示与健康对照组相比P＜0.05；
[0023]图2为ANRIL表达水平示意图；A为real
‑
timePCR检测在尿毒症患者血清刺激的细胞模型中ANRIL表达水平，B为FISH检测在尿毒症患者血清刺激的细胞模型中ANRIL表达及分布，C为real
‑
timePCR检测采用不同浓度尿毒症毒素硫酸吲哚酚(IS)、马尿酸(HA)、吲哚
‑3‑
乙酸(IAA)、同型半胱氨酸(Hcy)刺激下内皮细胞ANRIL表达水平变化，*表示与对照组相比P＜0.05；
[0024]图3为基因调控效率验证图；A.real
‑
timePCR检测ANRIL的敲低效率，B.real
‑
timePCR检ANRIL的过表达效率，C.westernblot检测EZH2siRNA调控效率，D.westernbl本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.ANRIL在制备慢性肾脏病相关心血管病变诊断试剂盒中的应用。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，ANRIL作为一种慢性肾脏病的血清标志物，与慢性肾脏病血管内皮功能障碍、线粒体裂变异常相关，患者血浆中ANRIL水平升高。3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，以血清中ANRIL为检测指标，检测程序为：预变性95℃5min变性95℃10s退火58℃10s45个循环，扩增延伸72℃10s溶解曲线65
‑
95℃5min。4.一种慢性肾脏病诊断试剂盒，其特征在于，包括：检测引物和检测试剂；其中，所述引物序列如SEQ ID NO.1～SEQ ID NO.4所示；ANRIL
‑
F：5
’‑
TACATCCGTCACCTGACACG
‑3’
，如SEQ ID NO.1所示；ANRIL
‑
R：5
’‑
ACGAGGGGAGCCAGGAATAA
‑3’
，如SEQ ID NO....
【专利技术属性】
技术研发人员：吕智美，王荣，苏红，刘冰，
申请(专利权)人：山东第一医科大学附属省立医院山东省立医院，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。