一种用于果实基因组DNA提取的裂解液、试剂盒及提取方法技术

本发明专利技术涉及基因组DNA提取技术领域，具体涉及一种用于果实基因组DNA提取的裂解液、试剂盒及提取方法，所述裂解液包括CTAB、十二烷基硫酸钠（SDS）、乙基苯基聚乙二醇（NP

【技术实现步骤摘要】
一种用于果实基因组DNA提取的裂解液、试剂盒及提取方法


[0001]本专利技术涉及基因组DNA提取
，具体涉及一种用于果实基因组DNA提取的裂解液、试剂盒及提取方法。

技术介绍

[0002]水果含有大量的膳食纤维，可以维持肠道的功能，维持正常的菌群，保持人体的营养均衡。长期坚持吃水果可以使人体的皮肤红润、有光泽，因为水果中还有大量的天然植物化合物，可以改善体内的激素代谢。水果中还含有多种的维生素、微量元素，长期吃水果可以预防人体的疾病发生，增进食欲。因此，水果已经成为人们生活中的一部分。
[0003]随着生物技术的发展以及人们对高品质水果需求的增长，为了培育出高品质的水果，近年来，越来越多的研究人员开始聚焦于水果果实的发育机理，挖掘决定果实品质的相关基因，再通过相应的技术来提高果实的品质。而这一切研究的前提是获得水果果实基因组DNA。分析这些果实的DNA，对生产抗病、高产、美味的果实有重要意义。
[0004]由于果实中纤维和酚类含量较多，目前市面上的果实基因组DNA提取方法，研磨和裂解效果不佳，得到的DNA纯度较低或者得率较低，不能满足后续实验分析要求，同时，对果实种类适用性不高。因此，有必要研发出一种对果实种类适应性广，果实基因组DNA提取纯度和得率高的提取试剂盒和提取方法。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的在于提供一种用于果实基因组DNA提取的裂解液、试剂盒及提取方法，本方法可以简单、快速地从常见果实中，比如苹果、梨、桃子、杏、葡萄、桔子等水果果实中提取高质量的、可直接应用于下游分子实验的DNA。同时，该试剂盒及提取方法可搭配磁珠纯化体系，进行大批量的样本提取。
[0006]为实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：本专利技术一方面提供了一种用于果实基因组DNA提取的裂解液，所述裂解液包括CTAB、十二烷基硫酸钠（SDS）、乙基苯基聚乙二醇（NP
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40）、NaCl、Tris
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HCl、巯基乙醇和乙二胺四乙酸（EDTA）。
[0007]进一步地，所述裂解液中，CTAB的质量浓度为0.5
‑
1.5%，SDS的质量浓度为0.5
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1.5%，NP
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40的质量浓度为0.5
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1.5%，NaCl的浓度为1
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3mol/L，Tris
‑
HCl的浓度为0.05
‑
0.15mol/L，巯基乙醇的含量为0.1
‑
0.3%，EDTA的浓度为0.05
‑
0.15mol/L。
[0008]更进一步地，所述裂解液中，CTAB的质量浓度为1
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1.5%，SDS的质量浓度为1
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1.5%，NP
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40的质量浓度为1
‑
1.5%，NaCl的浓度为1
‑
3mol/L，Tris
‑
HCl的浓度为0.05
‑
0.15mol/L，巯基乙醇的含量为0.1
‑
0.3%，EDTA的浓度为0.05
‑
0.15mol/L。
[0009]优选裂解液为：CTAB的质量浓度为1%，SDS的质量浓度为1%，NP
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40的质量浓度为1%，NaCl的浓度为2M，Tris
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HCl的浓度为0.1M，巯基乙醇的含量为0.2%，EDTA的浓度为0.1M。
[0010]本专利技术另一方面提供了一种果实基因组DNA提取的试剂盒，包括研磨材料、前文所
述的裂解液、绑定液、漂洗液1、漂洗液2以及洗脱液。
[0011]进一步地，所述研磨材料为陶瓷研磨珠、钢珠和玻璃砂的混合材料。其中，陶瓷研磨珠直径1
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3mm，钢珠直径4
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6mm，优选地研磨材料组成为：0.2g 2mm陶瓷研磨珠、1颗5mm钢珠和0.1g的玻璃砂。
[0012]进一步地，所述绑定液包括磁珠溶液、PEG8000和NaCl，磁珠为硅基磁珠，PEG8000的质量浓度为20
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40%，NaCl的浓度为1
‑
3mol/L。优选绑定液为PEG8000的质量浓度为30%，NaCl的浓度为2mol/L。
[0013]进一步地，所述漂洗液1包括异硫氰酸胍、盐酸胍、乙醇和Tris
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HCl，异硫氰酸胍的浓度为1
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3mol/L，盐酸胍的浓度为2
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4mol/L，乙醇的体积浓度为50
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70%，Tris
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HCl的浓度为0.3
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0.8mol/L。优选地，漂洗液1异硫氰酸胍的浓度为2mol/L，盐酸胍的浓度为3mol/L，乙醇的体积浓度为60%，Tris
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HCl的浓度为0.5mol/L。
[0014]进一步地，所述漂洗液2包括乙醇和Tris
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HCl，乙醇的体积浓度为60
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80%，Tris
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HCl的浓度为0.05
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0.2mol/L。优选地，漂洗液2乙醇的体积浓度为70%，Tris
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HCl的浓度为0.1mol/L。
[0015]进一步地，所述洗脱液为5
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15mmol/L的Tris
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HCl缓冲液。优选洗脱液为10mmol/L的Tris
‑
HCl缓冲液。
[0016]本专利技术第三方面提供了一种利用前文所述的果实基因组DNA提取的试剂盒提取果实基因组DNA的方法，包括以下步骤：S1，容器a中加入研磨材料和待测样本，加入裂解液，研磨1
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3min，然后60
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70℃水浴15
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30min；S2，容器a冷却至室温，加入与裂解液等体积的氯仿，震荡混匀11000
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13000rpm离心4
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6min；S3，吸取S2中的上清液至容器b中，加入磁珠和绑定液后置于混匀仪上，室温振荡混匀40
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90s；S4，将容器b放置在磁力架上，静置，磁珠完全吸附后，弃上清；S5，向完成S4的容器b中加入漂洗液1，将容器b从磁力架上取下，放入混匀仪上，振荡混匀，静置，磁珠完全吸附后，弃上清；S6，向完成S5的容器b中加入漂洗液2，将容器b从磁力架上取下，放入混匀仪上，振荡混匀，静置，磁珠完全吸附后，弃上清；S7，将完成S6的容器b室温下晾干；S8，向晾干的容器b中加入洗脱液，从磁力架上转移到混匀仪上，振荡混匀40
‑
90s；S9，将完成S8的容器b置于磁力架上静置2
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5min，磁珠完全吸附后，将上清溶液转至容器c中，容器c中的上清液即为提取得到的DNA产物。
[0017]与现有技术相比，本专利技术的有益效本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于果实基因组DNA提取的裂解液，其特征在于：所述裂解液包括CTAB、SDS、NP
‑
40、NaCl、Tris
‑
HCl、巯基乙醇和EDTA。2.根据权利要求1所述的一种用于果实基因组DNA提取的裂解液，其特征在于：所述裂解液中，CTAB的质量浓度为0.5
‑
1.5%，SDS的质量浓度为0.5
‑
1.5%，NP
‑
40的质量浓度为0.5
‑
1.5%，NaCl的浓度为1
‑
3mol/L，Tris
‑
HCl的浓度为0.05
‑
0.15mol/L，巯基乙醇的含量为0.1
‑
0.3%，EDTA的浓度为0.05
‑
0.15mol/L。3.根据权利要求1所述的一种用于果实基因组DNA提取的裂解液，其特征在于：所述裂解液中，CTAB的质量浓度为1
‑
1.5%，SDS的质量浓度为1
‑
1.5%，NP
‑
40的质量浓度为1
‑
1.5%，NaCl的浓度为1
‑
3mol/L，Tris
‑
HCl的浓度为0.05
‑
0.15mol/L，巯基乙醇的含量为0.1
‑
0.3%，EDTA的浓度为0.05
‑
0.15mol/L。4.一种果实基因组DNA提取的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒包括研磨材料、权利要求1
‑
3任一项所述的裂解液、绑定液、漂洗液1、漂洗液2以及洗脱液。5.根据权利要求4所述的一种果实基因组DNA提取的试剂盒，其特征在于：所述研磨材料为陶瓷研磨珠、钢珠和玻璃砂的混合材料。6.根据权利要求4所述的一种果实基因组DNA提取的试剂盒，其特征在于：所述绑定液包括磁珠溶液、PEG8000和NaCl，磁珠为硅基磁珠，PEG8000的质量浓度为20
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40%，NaCl的浓度为1
‑
3mol/L。7.根据权利要求4所述的一种果实基因组DNA提取的试剂盒，其特征在于：所述漂洗液1包括异硫氰酸胍、盐...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴昆林，殷楠楠，蒙艳婷，王建冬，
申请(专利权)人：杭州联川基因诊断技术有限公司，
类型：发明
国别省市：