一种微生物复合菌剂及其制备方法和应用技术

本发明专利技术涉及一种微生物复合菌剂及其制备方法和应用。所述复合菌剂由白曲霉、米曲霉、细菌和酵母菌按比例混合组成，为液体复合菌剂，其中细菌为贝莱斯特芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌的混合菌，酵母菌为HX3酿酒酵母和异常威克汉姆酵母的混合菌。该复合菌剂的制备方法和应用步骤为

【技术实现步骤摘要】
一种微生物复合菌剂及其制备方法和应用


[0001]本专利技术涉及酿酒工艺
，具体为一种微生物复合菌剂及其制备方法和应用。

技术介绍

[0002]中国白酒一直以来都是以开放式、自然多菌种混合发酵为其特征，而陶融型白酒则是在此基础上应用了一系列经过优选后的纯菌种，采用固态培养技术制曲。在此观点之上，传统工艺白酒生产中的主要微生物及其代谢途径也将逐步明朗化，并逐步走上科学化的道路，让我们对一些传统观念重新认识。陶融型白酒的产品风格及质量对环境的依存度要比酱香型白酒、浓香型白酒低，因为这两个香型白酒的酿酒微生物完全来自于所处环境的微生物，而陶融型白酒的主要功能微生物可能要来自纯菌种。因此，更有利于陶融型白酒率先从地域的局限中突围，向全国推广。
[0003]酒曲是酿造白酒的灵魂，好的酒曲能够让酿造的白酒品质上好几个台阶。一般来说酒曲中所生长的微生物主要是霉菌、酵母菌，最新的研究表面，加入不同的细菌，会丰富酒体的层次感。尤其是在陶融型白酒酿造过程中，使用不同微生物的纯菌种进行制曲，可以有效提高陶融型白酒的口感，一定程度上也打破了麸曲白酒总比大曲白酒口感差的规律。
[0004]因此，开发一种以多种微生物纯培养后混合的微生物复合菌剂用于酒曲进行发酵，一方面可以提高酒体的层次程度，丰富口感，另一方面可以控制各种微生物的用量，避免不必要的未知因素导致酒体不稳定，口感不佳等状况。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的在于克服现有技术的缺点，提供一种微生物复合菌剂及其制备方法和应用，本专利技术旨在提供一种由米曲霉、白曲霉、细菌和酵母菌组成的液体复合菌剂，用于酿造陶融型白酒，具有香气清雅，入口有酸甜的果香及烘焙咖啡香，甜醹柔润，余味回甘的陶融型白酒，其出酒率和优质酒率均较高。
[0006]为了实现以上目的，本专利技术采用的技术方案为：
[0007]一种微生物复合菌剂，该微生物复合菌剂由白曲霉、米曲霉、细菌和酵母菌的菌液组成，其混合菌液组成体积比为白曲霉：米曲霉：细菌：酵母菌＝1:1:1.6:1；其中所述细菌为贝莱斯特芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌的混合菌液；酵母菌为HX3酿酒酵母和异常威克汉姆酵母的混合菌液。
[0008]为了更好的实现本专利技术，进一步的，其中白曲霉、米曲霉、细菌和酵母菌为本公司分离选育驯化，分别保存于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏单位地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号；中国工业微生物菌种保藏管理中心，保藏单位地址：北京市朝阳区酒仙桥中路24号院6号楼，其编号为：
[0009]亮白曲霉Aspergillus candidus，CGMCC No.23820；米曲霉Aspergillus oryzae，CICC 41239；
[0010]贝莱斯芽孢杆菌Bacillus velezensis，CGMCC No.23741；地衣芽孢杆菌Bacillus licheniformis，CGMCC No.23742；枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis，CGMCC No.23743；
[0011]酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae，CGMCC No.23749；异常威克汉姆酵母Wickerhamomyces anomalus，CICC 31090。
[0012]一种微生物复合菌剂的制备方法及应用，包括以下步骤：
[0013]步骤一、单独培养白曲霉、米曲霉：
[0014]a、一级种子：将白曲霉和米曲霉菌种分别接种到试管培养基中，在28～35℃下培养48～72h，得到试管一级种子；
[0015]b、二级种子：在150ml三角瓶内装入50ml马铃薯葡萄糖培养基，接种上述一级种子，接种量为0.5～1.0cm2，接种后在28～35℃下培养48～72h，得到两种霉菌的二级种子菌液；
[0016]c、试管培养基配比和制备方法为：马铃薯葡萄糖琼脂培养基，称取200g去皮马铃薯，切小块，加1000ml水煮沸30min，纱布过滤，加入20g葡萄糖，15～20g琼脂，定容到1000ml，分装后进行灭菌，121℃，20min，冷却后摆好试管，得到马铃薯葡萄糖琼脂培养基试管。
[0017]步骤二、培养细菌：所述细菌为贝莱斯特芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌的混合菌；
[0018]a、一级种子：分别将贝莱斯特芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌接种到试管培养基中，在35～37℃下培养24h，得到试管一级种子；
[0019]b、二级种子：在150ml三角瓶内装入30～50ml营养肉汤培养基，分别接种上述一级种子，接种量为0.5～1.0cm2，接种后放入摇床进行培养，温度35～37℃，摇床转速200rpm，培养24h得到三种细菌的二级种子液，将三种细菌的二级种子液按体积比1:1:1混合，得到二级混合种子；
[0020]c、三级种子：在10L卡氏罐装入6L营养肉汤培养基，接种上述二级混合种子，接种量为0.5～1.0L，接种后放入卡氏罐专用摇床培养培养，温度35～37℃，摇床转速200rpm，培养24h，得到三级种子；
[0021]d、试管培养基配比和制备方法为：蛋白胨10g，牛肉浸粉3g，氯化钠5g，琼脂15～20g，定容到1000ml，分装后灭菌，灭菌条件121℃，20min。
[0022]营养肉汤培养基的配比和制备方法为蛋白胨10g/L，牛肉浸粉3g/L，氯化钠5g/L，按比例称取各原料后，用蒸馏水溶解混匀后定容，121℃灭菌20min，自然冷却后备用；
[0023]步骤三、培养酵母菌：所述酵母菌为酿酒酵母和异常威克汉姆酵母的混合菌；
[0024]a、一级种子：分别将酿酒酵母和异常威克汉姆酵母，菌接种到试管培养基中，在25～30℃下培养24～36h，得到试管一级种子；
[0025]b、二级种子：在150ml三角瓶内装入30～50ml葡萄糖麦芽汁液体培养基，分别接种上述一级种子，接种量为1.0～2.0cm2，接种后放入摇床进行培养，温度25～30℃，摇床转速200rpm，培养24～36h得到两种酵母菌的二级种子液，将两种二级种子液按照体积比1:1进行混合，得到二级混合种子；
[0026]c、三级种子：10L卡氏罐装填6L葡萄糖麦芽汁液体培养基，接种上述酵母二级混合种子，接种量为1.0～2.0L，接种后放入卡氏罐专用摇床培养培养，温度28～30℃，每隔2～
4h摇晃一次，培养24～48h，得到三级种子；
[0027]d、试管培养基配比和制备方法为：葡萄糖50g，麦芽汁浸粉130g，琼脂15～20g，定容到1000ml，分装后灭菌，灭菌条件121℃，20min。
[0028]葡萄糖麦芽汁液体培养基的配比和制备方法为：葡萄糖50g/L，麦芽汁浸粉130g/L，按比例称取各原料后，用蒸馏水溶解混匀后定容，121℃灭菌30min，自然冷却后备用；
[0029]步骤四、将上述各步骤得到的菌液按比例进行混合，混合体积比为白曲霉：米曲霉本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种微生物复合菌剂，其特征在于，该微生物复合菌剂由白曲霉、米曲霉、细菌和酵母菌的菌液组成，其混合菌液组成体积比为白曲霉：米曲霉：细菌：酵母菌＝1:1:1.6:1；其中所述细菌为贝莱斯特芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌的混合菌液；酵母菌为HX3酿酒酵母和异常威克汉姆酵母的混合菌液。2.根据权利要求1所述的一种微生物复合菌剂，其特征在于，其中白曲霉、米曲霉、细菌和酵母菌为本公司分离选育驯化，分别保存于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心和中国工业微生物菌种保藏管理中心，其编号为：亮白曲霉Aspergillus candidus，CGMCC No.23820；米曲霉Aspergillus oryzae，CICC 41239；贝莱斯芽孢杆菌Bacillus velezensis，CGMCC No.23741；地衣芽孢杆菌Bacillus licheniformis，CGMCC No.23742；枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis，CGMCC No.23743；酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae，CGMCC No.23749；异常威克汉姆酵母Wickerhamomyces anomalus，CICC 31090。3.一种微生物复合菌剂的制备方法及应用，其特征在于，包括以下步骤：步骤一、单独培养白曲霉、米曲霉：a、一级种子：将白曲霉和米曲霉菌种分别接种到试管培养基中，在28～35℃下培养48～72h，得到试管一级种子；b、二级种子：在150ml三角瓶内装入50ml马铃薯葡萄糖培养基，接种上述一级种子，接种量为0.5～1.0cm2，接种后在28～35℃下培养48～72h，得到两种霉菌的二级种子菌液；c、试管培养基配比和制备方法为：马铃薯葡萄糖琼脂培养基，称取200g去皮马铃薯，切小块，加1000ml水煮沸30min，纱布过滤，加入20g葡萄糖，15～20g琼脂，定容到1000ml，分装后进行灭菌，121℃，20min，冷却后摆好试管，得到马铃薯葡萄糖琼脂培养基试管。步骤二、培养细菌：所述细菌为贝莱斯特芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌的混合菌；a、一级种子：分别将贝莱斯特芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌接种到试管培养基中，在35～37℃下培养24h，得到试管一级种子；b、二级种子：在150ml三角瓶内装入30～50ml营养肉汤培养基，分别接种上述一级种子，接种量为0.5～1.0cm2，接种后放入摇床进行培养，温度35～37℃，摇床转速200rpm，培养24h得到三种细菌的二级种子液，将三种细菌的二级种子液按体积比1:1:1混合，得到二级混合种子；c、三级种子：在10L卡氏罐装入6L营养肉汤培养基，接种上述二级混合种子，接种量为0.5～1.0L，接种后放入卡氏罐专用摇床培养培养，温度35～37℃，摇床转速200rpm，培养24h，得到三级种子；d、试管培养基配比和制备方法为：蛋白胨10g，牛肉浸粉3g，氯化钠5g，琼脂15～20g，定容到1000ml，分装后灭菌，灭菌条件121℃，20min。营养肉汤培养基的配比和制备方法为蛋白胨10g/L，牛肉浸粉3g/L，氯化钠5g/L，按比例称取各原料后，用蒸馏水溶解混匀后定容，121℃灭菌20min，自然冷却后备用；步骤三、培养酵母菌：所述酵母菌为酿酒酵母和异常威克汉姆酵母的混合菌；a、一级种子：分别将酿酒酵母和异常威克汉姆酵母，菌接种到试管培养基中，在25～30
℃下培养24～36h，得到试管一级种子；b、二级种子：在150ml三角瓶内装入30～50ml葡萄糖麦芽汁液体培养基，分别接种上述...

【专利技术属性】
技术研发人员：韩素娜，黄润娜，刘琳，王龙霞，李华，杜海，王晓毅，
申请(专利权)人：河南仰韶酒业有限公司，
类型：发明
国别省市：