新型高效的先导编辑器及其应用制造技术

本发明专利技术属于生物医药技术领域，公开了一种基因先导编辑系统，包含载体，所述载体含有编码pegRNA的基因以及编码融合蛋白的基因，所述pegRNA包含sgRNA、逆转录模板RTT、主要结合位点PBS和RNA茎环结构；所述融合蛋白为Cas9切口酶或其变体与逆转录酶的融合蛋白。本发明专利技术采用通过在pegRNA的3'末端加入RNA颈环结构开发了sPEs,通过让pegRNA的3'末端结合到Cas9，开发了tPEs，以此来提高Cas9/pegRNA复合物的稳定性，进一步的提高在不同细胞中不同基因组位点的编辑效率。的编辑效率。的编辑效率。

【技术实现步骤摘要】
新型高效的先导编辑器及其应用


[0001]本专利技术属于生物医药领域，涉及新型高效的先导编辑器及其应用，开发的新型高效的先导编辑器(prime editors):sPEs and tPEs技术属于基因治疗的平台技术，可以用于定点突变，插入，筛除基因组DNA片段等疾病的基因治疗。

技术介绍

[0002]人类的疾病大多与基因密切相关，所以根据基因进行针对性的改变一直是生命科学的长期愿望。尽管基因编辑技术取得了快速进展，但与疾病相关的75000多个人类已知的遗传变异中，大多数疾病还是存在难以纠正的问题。
[0003]利用工程性核酸酶例如ZFPs,TALENs或者CRISPR
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Cas可以有效的利用DNA 双链断裂(double strand breaks,DSBs)介导的DNA编辑方式，在特定基因组位点进行插入与缺失。但是，DSB的产生会导致许多不良的结果，比如编辑不单一，基因序列易位和P53的激活。
[0004]在细胞体内，染色质经常发生DNA双链断裂(DNA double
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strand bre本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种基因先导编辑系统，包含载体，所述载体含有编码pegRNA的基因以及编码融合蛋白的基因，其特征在于，所述pegRNA包含sgRNA、逆转录模板RTT、主要结合位点PBS和RNA茎环结构；所述融合蛋白为Cas9切口酶或其变体与逆转录酶的融合蛋白。2.如权利要求1所述的系统，其特征在于，所述RNA茎环结构选自以下至少一项：1)序列分别如SEQ ID NO.1～4所示的MS2、PP7、ComBS或Csy4BS；2)在1)的5
′
端和/或3
′
端添加一个或几个核苷酸得到的RNA序列；3)与1)或2)的RNA序列具有85％以上的同一性的RNA序列。3.根据权利要求1所述的系统，其特征在于，选自以下至少一项：1)所述RNA茎环结构连接于所述主要结合位点PBS的3
’
端；2)所述pegRNA为RNA分子，从5
’
端至3
’
端依次为sgRNA、逆转录模板RTT、主要结合位点PBS和RNA茎环结构；3)所述融合蛋白还含有RNA结合蛋白RBP；所述RBP为特异性结合RNA茎环结构的蛋白；所述RBP为一个或多个；4)所述融合蛋白还含有RNA结合蛋白RBP；所述融合蛋白由N端至C端依次包括RBP、Cas9或其变体、逆转录酶；5)所述载体为一个或多个；6)所述编码pegRNA的基因或编码融合蛋白的基因为一个或多个；7)所述编码pegRNA的基因或编码融合蛋白的基因位于同一载体或不同载体上。4.根据权利要求3所述的系统，其特征在于，选自以下任一项：1)所述RBP选自tdMCP、tdPCP、COM、Csy4H29A中的任一种；2)所述Cas9切口酶为H840A；3)所述逆转录酶为MMLV；4)所述系统还含有筛选标记蛋白。5.一种pegRNA，其特征在于，所述pegRNA为权利要求1～4任一项所述的系统中所述的pegRNA。6.一种融合蛋白，其特征在于，所述融合蛋白为权利要求1～4任一项所述的系统中所述的融合蛋白。7.一种核酸，其特征在于，所述核酸编码如权利要求5所述的pegRNA和/或如权利要求6所述的融合蛋白。8.一种构建体，所述构建体含有如权利要求7所述的核酸。9.一种宿主细胞，其特征在于，所述宿主...

【专利技术属性】
技术研发人员：马涵慧，冯颖，刘思远，
申请(专利权)人：上海科技大学，
类型：发明
国别省市：