葡糖淀粉酶变体和编码它们的多核苷酸制造技术

本发明专利技术涉及具有改善的热稳定性的葡糖淀粉酶变体以及包含此类变体的组合物。本发明专利技术进一步涉及编码此类变体的多核苷酸，和包含编码此类变体的基因的载体和宿主细胞，其中这些载体和宿主细胞也能够产生此类变体。本发明专利技术还涉及使用或应用这些变体或组合物液化含淀粉材料的方法，以及从而通过该方法产生的糖化。本发明专利技术还涉及使用或应用这些变体或组合物糖化含淀粉材料的方法，以及从而通过该方法生产的糖类。本发明专利技术进一步涉及从含淀粉材料或含纤维素材料生产发酵产物的工艺，以及酶共混物或组合物、或适用于在本发明专利技术的工艺中使用的重组宿主细胞或发酵生物。主细胞或发酵生物。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】葡糖淀粉酶变体和编码它们的多核苷酸
[0001]序列表的引用
[0002]本申请含有计算机可读形式的序列表，将其通过引用并入本文。
[0003]专利技术背景


[0004]本专利技术涉及葡糖淀粉酶变体和包含此类变体的组合物。本专利技术进一步涉及编码此类变体的多核苷酸，和包含编码此类变体的基因的载体和宿主细胞，其中这些载体和宿主细胞也能够产生此类变体。本专利技术还涉及使用或应用这些变体或组合物对含淀粉材料进行液化和/或糖化的方法。本专利技术进一步涉及从含淀粉材料或含纤维素材料生产发酵产物的工艺，以及酶共混物或组合物、或适用于在本专利技术的工艺中使用的重组宿主细胞或发酵生物。

技术介绍

[0005]葡糖淀粉酶(1,4
‑
α
‑
D
‑
葡聚糖葡糖水解酶，EC 3.2.1.3)是催化D
‑
葡萄糖从淀粉或相关寡糖和多糖分子的非还原端释放的酶。葡糖淀粉酶由若干丝状真菌和酵母产生，其中来自曲霉属(Aspergillus)的那些葡糖淀粉酶在商业上最为重要。
[0006]在商业上，葡糖淀粉酶被用于将已通过α
‑
淀粉酶部分地水解的淀粉材料转化成葡萄糖。然后可以使用发酵生物将葡萄糖直接或间接地转化成发酵产物。商业发酵产物的实例包括醇(例如，乙醇、甲醇、丁醇、1,3
‑
丙二醇)；有机酸(例如，柠檬酸、乙酸、衣康酸、乳酸、葡糖酸、葡糖酸盐、乳酸、丁二酸、2,5
‑
二酮
‑
D
‑
葡糖酸)；酮(例如，丙酮)；氨基酸(例如，谷氨酸)；气体(例如，H2和CO2)，和更复杂的化合物，包括例如抗生素(例如，青霉素和四环素)；酶；维生素(例如，核黄素、B
12
、β
‑
胡萝卜素)；激素和其他难以合成生产的化合物。发酵过程通常还用于可食用酒精(例如，啤酒和酒)工业、乳制品(例如，在酸乳和奶酪的生产中)工业中。
[0007]本专利技术的目的是提供具有葡糖淀粉酶活性的多肽和编码这些多肽的多核苷酸，并且这些多肽和多核苷酸在发酵产物的生产过程(例如乙醇生产过程)中提供高产率。

技术实现思路

[0008]本专利技术提供了与亲本葡糖淀粉酶相比具有改善的特性的葡糖淀粉酶变体。
[0009]本专利技术涉及葡糖淀粉酶变体，这些变体在对应于以下位置的一个或多个位置处包含取代：SEQ ID NO:1的6、7、31、34、50、132、447、481、484、501、539、568、595；并且任选地进一步在对应于以下位置的一个或多个位置处包含取代：SEQ ID NO:1的11、75、77、78、79、80、103、105、107、110、135、138、379、445、504、566、568、594，并且其中所述变体与SEQ ID NO:1
‑
13的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、约85％、约90％、约91％、约92％、约93％、约94％、约95％、约96％、约97％、约98％、约99％但小于100％序列同一性。
[0010]本专利技术涉及葡糖淀粉酶变体，这些变体在对应于以下位置的一个或多个位置处包含取代：SEQ ID NO:1的6、7、11、31、34、50、75、77、78、79、80、103、105、107、110、132、135、138、379、445、447、481、484、501、504、539、566、568、592、594、595；并且其中所述变体与SEQ ID NO:1
‑
13的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、约85％、约90％、约91％、约92％、约93％、约94％、约95％、约96％、约97％、约98％、约99％但小于100％序列同一性。
[0011]本专利技术涉及葡糖淀粉酶变体，这些变体在对应于以下位置的一个或多个位置处包含取代：SEQ ID NO:1的6、7、31、34、50、132、447、481、484、501、539、568、595；并且任选地进一步在对应于以下位置的一个或多个位置处包含取代：SEQ ID NO:1的11、75、77、78、79、80、103、105、107、110、135、138、379、445、504、566、568、594，并且其中所述变体与SEQ ID NO:1
‑
13的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、约85％、约90％、约91％、约92％、约93％、约94％、约95％、约96％、约97％、约98％、约99％但小于100％序列同一性，并且其中所述变体具有葡糖淀粉酶活性，并且其中与亲本葡糖淀粉酶相比，该葡糖淀粉酶变体具有增加的热稳定性。
[0012]本专利技术还涉及葡糖淀粉酶变体，这些变体在对应于以下的一个或多个位置处包含取代：SEQ ID NO:1的6、7、11、31、34、50、75、77、78、79、80、103、105、107、110、132、135、138、379、445、447、481、484、501、504、539、566、568 592、594、595；并且其中该变体具有葡糖淀粉酶活性，并且其中所述变体与SEQ ID NO:1
‑
13的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、约85％、约90％、约91％、约92％、约93％、约94％、约95％、约96％、约97％、约98％、约99％但小于100％序列同一性，并且其中所述变体具有葡糖淀粉酶活性，并且其中与亲本葡糖淀粉酶相比，该葡糖淀粉酶变体具有增加的热稳定性。
[0013]本专利技术还涉及包含本专利技术的变体多肽的组合物。
[0014]本专利技术还涉及编码根据本专利技术的变体的多核苷酸、包含编码根据本专利技术的变体的多核苷酸的核酸构建体、包含编码根据本专利技术的变体的多核苷酸的表达载体、和包含编码根据本专利技术的变体的多核苷酸的宿主细胞。
[0015]本专利技术还涉及产生葡糖淀粉酶变体的方法，该方法包括(a)在适于表达这些变体的条件下培养本专利技术的宿主细胞；以及(b)回收这些变体。
[0016]本专利技术进一步涉及获得亲本葡糖淀粉酶的葡糖淀粉酶变体的方法，该方法包括以下步骤：在对应于以下位置的一个或多个位置处引入取代：SEQ ID NO:1的6、7、31、34、50、132、447、481、484、501、539、568、595；并且任选地进一步包括在对应于以下位置的一个或多个位置处引入取代：SEQ ID NO:1的11、75、77、78、79、80、103、105、107、110、135、138、379、445、504、566、568、594，从而所述方法提供所述亲本葡糖淀粉酶的葡糖淀粉酶变体，其中所述变体与SEQ ID NO:1
‑
13的多肽的氨基酸序列具有至少60％，例如至少65％，例如至少70％，例如至少75％，例如至少80％，例如约85％、约本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种葡糖淀粉酶变体，该变体在对应于以下位置的一个或多个位置处包含取代：SEQ ID NO:1的6、7、31、34、50、132、447、481、484、501、539、568、595；并且其中所述变体与SEQ ID NO:1
‑
13的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、约85％、约90％、约91％、约92％、约93％、约94％、约95％、约96％、约97％、约98％、约99％但小于100％序列同一性。2.根据权利要求1所述的葡糖淀粉酶变体，其中该变体任选地进一步在对应于以下位置的一个或多个位置处包含取代：SEQ ID NO:1的11、75、77、78、79、80、103、105、107、110、135、138、379、445、504、566、594。3.根据权利要求1
‑
2所述的葡糖淀粉酶变体，其中该变体在对应于以下位置的一个或多个位置处包含取代：SEQ ID NO:1的6、7、11、31、34、50、75、77、78、79、80、103、105、107、110、132、135、138、379、445、447、481、484、501、504、539、566、568、592、594、595；并且其中所述变体与SEQ ID NO:1
‑
13的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、约85％、约90％、约91％、约92％、约93％、约94％、约95％、约96％、约97％、约98％、约99％但小于100％序列同一性。4.根据前述权利要求中任一项所述的葡糖淀粉酶变体，其中该变体相对于亲本具有改善的特性，其中该改善的特性是增加的热稳定性。5.根据前述权利要求中任一项所述的葡糖淀粉酶变体，其中与所述亲本葡糖淀粉酶相比，所述改善的特性是增加的热稳定性，该增加的热稳定性使用TSA测量为至少0.1℃、至少0.2℃、至少0.3℃、至少0.4℃、至少0.5℃、至少0.6℃、至少0.7℃、至少0.8℃、至少0.9℃、至少1℃、至少1.5℃、至少2℃、至少2.5℃、至少3℃、至少3.5℃、至少4.0℃、至少4.5℃，或至少1℃、至少1.5℃、至少2℃、至少2.5℃、至少3℃、至少3.5℃、至少4.0℃、至少4.5℃或至少5℃或至少5.5℃或至少6℃或至少6.5℃或至少7℃或至少7.5℃或至少8℃或至少8.5℃或至少9℃或至少9.5℃或至少10℃的增加的解链温度。6.根据前述权利要求中任一项所述的葡糖淀粉酶变体，其中与所述亲本葡糖淀粉酶相比，变体在91℃下具有至少150，优选地至少200，更优选地至少250，最优选地至少300的相对活性。7.根据前述权利要求中任一项所述的葡糖淀粉酶变体，其中所述变体在对应于以下位置的位置处包含以下取代中的一个或多个：SEQ ID NO:1的G6S、G7T、P11F、R31F、K34Y、E50R、D75N、D75S、R77D、R77G、A78Q、A78W、V79D、F80Y、S103N、S105E、S105L、P107L、T110W、A132P、A132R、R135S、R138G、R138L、R138P、S379P、D445N、V447S、S481P、T484P、E501A、E501L、E501V、Y504T、N539P、D566T、T568V、V592T、Q594R、F595S，并且其中所述变体与SEQ ID NO:1
‑
13的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、约85％、约90％、约91％、约92％、约93％、约94％、约95％、约96％、约97％、约98％、约99％但小于100％序列同一性。8.根据前述权利要求中任一项所述的变体，其中该变体包含以下取代或取代的组合中的至少一个：SEQ ID NO:1的D75N+R77D+A78Q；D75S+R77G+A78W+V79D+F80Y；K34Y+S103N；
K34Y+D445N+V447S；K34Y+Y504T；S103N+D445N+V447S；S103N+Y504T；D445N+V447S+Y504T；K34Y+S103N+D445N+V447S；K34Y+S103N+D445N+V447S+E501V+Y504T；K34Y+S103N+Y504T；K34Y+S103N+D445N+V447S+D566T；K34Y+S103N+Q594R+F595S；K34Y+S103N+Y504T+Q594R+F595S；K34Y+S103N+D445N+V447S+Y504T+Q594R+F595S；S105L；S105E；A132R；K34Y+S105L+Y504T+Q594R+F595S；K34Y+S103N+S105L+Y504T+Q594R+F595S；K34Y+S103N+S105L+Y504T+Q594R+F595S；K34Y+S103N+S105L+Y504T D566T Q594R F595S；K34Y+S103N+S105L+D445N+V447S+Y504T+D566T+Q594R+F595S；K34Y+S103N+S105L+A132R+D445N+V447S+Y504T+D566T+Q594R+F595S；K34Y+S103N+S105L+D445N+V447S+D566T+Q594R+F595S；K34Y+S103N+S105L+A132R+D445N+V447S+E501V+Y504T+D566T+Q594R+F595S；K34Y+S103N+A132R+D445N+V447S+Y504T+D566T+Q594R+F595S；K34Y+S103N+S105L+A132R+D445N+V447S+Y504T+D566T+V592T；G6S+G7T+K34Y+S103N+S105L+A132R+D445N+V447S+Y504T+D566T+Q594R+F595S；K34Y+S103N+P107L+A132R+D445N+V447S+Y504T+D566T+Q594R+F595S；G6S+G7T+K34Y+S103N+P107L+A132R+D445N+V447S+Y504T+D566T+Q594R+F595S；G6S+G7T+K34Y+S103N+P107L+A132R+D445N+V447S+Y504T+D566T+V592T+Q594R+F595S；G6S+G7T+K34Y+S103N+P107L+A132P+D445N+V447S+Y504T+D566T+Q594R+F595S；G6S+G7T+K34Y+S103N+P107L+A132R+D445N+V447S+Y504T+D566T+T568V+Q594R+F595S；G6S+G7T+K34Y+S103N+P107L+A132P+D445N+V447S+Y504T+D566T+T568V+Q594R+F595S；G6S+G7T+K34Y+S103N+P107L+A132R+D445N+V447S+S481P+Y504T+D566T+Q594R+F595S；G6S+G7T+K34Y+S103N+P107L+A132R+D445N+V447S+S481P+Y504T+D566T+T568V+Q594R+F595S；G6S+G7T+K34Y+S103N+P107L+A132P+D445N+V447S+D566T+T568V+Q594R+F595S；G6S+G7T+K34Y+S103N+P107L+T110W+A...

【专利技术属性】
技术研发人员：仓方悠马，富木亚纪，
申请(专利权)人：诺维信公司，
类型：发明
国别省市：