一种用于核酸检测的扩增体系和方法技术

本发明专利技术公开一种用于核酸检测的扩增体系和方法。所述的核酸扩增体系中包括末端磷酸标记的核苷酸底物，DNA聚合酶，碱性磷酸酶等。所述DNA聚合酶包含功能等价于或位置等价于9

【技术实现步骤摘要】
一种用于核酸检测的扩增体系和方法


[0001]本专利技术涉及一种用于核酸检测的扩增体系和方法，属于分子生物学领域，更具体的，属于核酸扩增与检测领域。

技术介绍

[0002]核酸分子的检测是很多体外诊断项目的重要组成和“金标准”，在疾控、诊疗、预后、环境监测、农业育种、病虫害监测等多领域发挥不可替代的作用。目前主流的检测以可实时定量的PCR为主，包括实时荧光定量PCR(qPCR)和数字PCR(dPCR)方法。近些年来，恒温扩增技术也逐步发展，例如重组酶
‑
聚合酶恒温扩增技术(Recombinase Polymerase Amplification，RPA)，环介导的等温扩增技术(Loop
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mediated isothermal amplification，LAMP)，滚换扩增(rolling
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circle amplification，RCA)等，因其检测时间短、反应条件简单、灵敏度高等优势，成为继PCR方法后又一类被广泛研究和使用的实时检测手段。这些检测方法的发光原理都可归结为两种，一种是本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于核酸检测的扩增体系，其特征在于，包括：1)末端磷酸标记的核苷酸底物；或末端磷酸标记的核苷酸与未标记核苷酸的混合物；2)至少一种DNA聚合酶，所述DNA聚合酶包含功能等价于或位置等价于9
°
N DNA聚合酶氨基酸序列SEQ ID NO:1中的选自Lys464，Gln483，Glu578，Glu580的氨基酸的位置处的至少一个、至少两个、至少三个或四个氨基酸替换突变，和/或Leu408，Ala485中的一个或两个替换突变；3)碱性磷酸酶；4)缓冲液；所述缓冲液中包含至少一种二价金属阳离子，所述二价金属阳离子包括Mg
2+
离子；5)用于扩增靶核酸的引物；6)待检测样品，其中可能包含靶核酸。2.根据权利要求1所述的扩增体系，其特征在于，功能等价于或位置等价于Glu580的位置处的所述替换突变包含突变为Arg、His、Gln、Asn、Cys、Lys或Trp的突变；功能等价于或位置等价于Glu578的位置处的所述替换突变包含突变为Gly、Ala、Gln、His、Lys、Met、Arg或Trp的突变；功能等价于或位置等价于Gln483的位置处的所述替换突变包含突变为Gly、Pro、Ser、Phe或Cys的突变；功能等价于或位置等价于Lys464的位置处的所述替换突变包含突变为Leu、Ile、Pro、Phe或His的突变；功能等价于或位置等价于Ala485的位置处的所述替换突变包含突变为Leu、Lys、Phe、Arg、Glu、Ile、Trp、His或Thr的突变；功能等价于或位置等价于Leu408的位置处的所述替换突变包含突变为Ala、Phe、Tyr、His、Gln、Asn或Gly的突变。3.根据权利要求1或2任一项所述的扩增体系，其特征在于，所述末端磷酸标记的核苷酸可以作为DNA聚合酶或RNA聚合酶的底物，被DNA聚合酶或RNA聚合酶识别并掺入到DNA或RNA链中去，并释放出标记的多聚磷酸酯，所述标记的多聚磷酸酯具有独立的可检测的信号。4.根据权利要求3所述的扩增体系，其特征在于，所述标记的多聚磷酸酯中的标记是生荧光染料或者生色团。5.一种核酸检测试剂盒，其特征在于，包括：如权利要求1
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4任一项所述的1)末端磷酸标记的核苷酸底物；或末端磷酸标记的核苷酸与未标记核苷酸的混合物；2)至少一种DNA聚合酶，所述聚合酶包含功能等价于或位置等价于9
°
N DNA聚合酶氨基酸序列SEQ ID NO:1中的选自Lys464，Gln483，Glu578，Glu580的氨基酸的位置处的至少一个、至少两个、至少三个或四个氨基酸替换突变，和/或Leu408，Ala485中的一个或两个替换突变；3)碱性磷酸酶；4)缓冲液；所述缓冲液中包含至少一种二价...

【专利技术属性】
技术研发人员：孙悦，王选，段海峰，
申请(专利权)人：赛纳生物科技北京有限公司，
类型：发明
国别省市：