一种基于PER循环扩增串联G四链体的生物传感器及其制备与应用制造技术

本发明专利技术涉及生物传感器制备技术领域，具体涉及一种基于PER循环扩增串联G四链体的生物传感器及其制备与应用。本发明专利技术利用G

【技术实现步骤摘要】
一种基于PER循环扩增串联G四链体的生物传感器及其制备与应用


[0001]本专利技术涉及生物传感器制备
，具体涉及一种基于PER循环扩增串联G四链体的生物传感器及其制备与应用。

技术介绍

[0002]生物传感器技术相对于传统的检测方法最主要的优点是其有很高的灵敏度，能够在恒温条件下对待测靶标物质进行高灵敏的检测。这主要是由于生物传感器具有检测信号放大效应，基于信号放大的核酸检测方式主要包括两种：一种是借助工具酶的核酸扩增技术，如RCA技术、SDA技术和RPA技术等；另一种是不依赖酶信号放大技术，如催化发夹自组装反应(CHA)、杂交链式反应(HCR反应)。然而，这些核酸检测方法使用过程中，一方面对条件要求严格，需要精密昂贵的检测仪器、实验室环境及专业操作人员；另一方面需要多级热循环、复共轭性，要么需要精心设计的探针供靶标延伸。
[0003]引物交换反应（Primer Exchange Reaction，PER)是一种恒温核酸扩增方法，只需通过一个短的引物序列（与催化发夹的短悬垂结构序列互补），在DNA置换酶的作用下，引物被拓展了一段本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种基于PER循环扩增串联G四链体的生物传感器，其特征在于，所述生物传感器包括具有特异性识别功能的DNA杂合体和相应的催化型发夹，当待测核酸分子存在时，所述DNA杂合体被激活产生Toehold介导的链置换反应，释放出一条单链；该单链与所述催化型发夹结合，在Bst聚合酶置换酶的作用下，引发PER扩增反应；所述PER扩增产物包含一段含有鸟嘌呤G的G
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四链体核苷酸序列；所述G
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四链体核苷酸序列与氯化血红素Hemin形成的具有过氧化物酶催化活性的DNA酶；DNA酶催化ABTS进行显色反应；实现待测核酸分子的可视化检测。2.根据权利要求1所述的生物传感器，其特征在于，所述DNA杂合体由引物序列和与之互补的寡核苷酸序列构成，且在互补序列的3
’
端存在一段用于启动链置换反应的支点链Toehold；所述支点链的碱基数为5
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10bp。3.根据权利要求1所述的生物传感器，其特征在于，所述催化型发夹包括茎、环和一个引物结合位点的垂悬部分；所述茎部分含有一段与G
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四链体核苷酸序列互补的碱基序列。4.一种基于PER循环扩增串联G四链体的生物传感器的制备方法，其特征在于，所述方法包括：（1）根据待测靶标核酸的基因序列设计特异性寡核苷酸序列P1及P1互补的寡核苷酸序列P2；P2序列的3
’
端含有一段未杂交结构域作为支点链Toehold；将P1、P2分别溶解于杂交缓冲液后同浓度等体积混合，置于95℃水浴变性5分钟，然后以每秒下降0.1℃的速度将温度逐步降至25℃，杂交形成DNA杂合体；（2）根据待测靶标核酸的基因序列设计催化型发夹，将其溶解于退火缓冲液中，95℃水浴变性5分钟，然后以每秒下降0.1℃的速度将温度逐步降至25℃，形成稳定的催化型发夹；（3）将步骤（1）得到的DNA杂合体与步骤（2）得到的催化型发夹相结合，加入MMg
2+
、MBst聚合置换酶、dNTPs形成待测靶标核酸反应体系，催化反应完成后实现对于待测靶标核酸的可视化检测。5.根据权利要求4所述的生物传感器的制备方法，其特征在于，所述杂交缓冲液的配比为：10mM Tris
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Hcl，50mM NaCl，10mM MgCl2，pH=7.4；所述退火缓冲液的配比为：10mM Tris
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Hcl，50mM NaCl，1mM EDTA，pH=7.5。6.根据权利要求4所述的生物传感器的制备方法，其特征在于，所述催化反应的反...

【专利技术属性】
技术研发人员：高恶斌，胡雨润，陆文茜，
申请(专利权)人：江苏大学，
类型：发明
国别省市：