一种ESKAPE病原菌快速检测方法及系统技术方案

技术编号:38435532 阅读:25 留言:0更新日期:2023-08-11 14:20
本发明专利技术属于病原菌检测技术领域,公开了一种ESKAPE病原菌快速检测方法及系统,所述ESKAPE病原菌快速检测方法包括:进行扩增;进行cas12a反应;进行荧光/试纸条检测;所述ESKAPE病原菌快速检测方法还包括ESKAPE病原菌种属特异性基因分析,其中铜绿假单胞菌特异性序列为SEQ ID NO:1,鲍曼不动杆菌特异性序列为SEQ ID NO:2。本发明专利技术提供的ESKAPE病原菌快速检测方法,1小时内即可完成,检测成本为100~150元,不需要依赖机器或仅需紫外灯,检测灵敏度高,对技术要求较小,能够实现POCT检测。测。测。

【技术实现步骤摘要】
一种ESKAPE病原菌快速检测方法及系统


[0001]本专利技术属于病原菌检测
,尤其涉及一种ESKAPE病原菌快速检测方法及系统。

技术介绍

[0002]目前,ESKAPE病原菌正在威胁人类健康。预计在2050年,全球每年100万人死于ESKAPE感染。感染的早期诊断可以挽救无数的肢体和生命,因此,早期快速诊断意义重大。目前使用的诊断方法具体见表1。
[0003]但是,现有ESKAPE病原菌的诊断方法检测时间长,成本高,仪器依赖度高,且对技术要求也较高。因此,亟需进行基于CRISPR

cas12a技术的ESKAPE病原菌快速检测技术的研发。
[0004]表1目前使用的诊断方法
[0005][0006]通过上述分析,现有技术存在的问题及缺陷为:传统核酸检测技术采用普通PCR、荧光定量PCR等,现有ESKAPE病原菌的传统细菌培养、高通量测序等诊断手段需要的检测时间长,成本高,仪器依赖度高,且对生物分析等技术要求较高。
[0007]解决以上问题及缺陷的难度为:每种ESKAPE病原体微生物的本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种ESKAPE病原菌快速检测方法,其特征在于,所述ESKAPE病原菌快速检测方法包括以下步骤:步骤一,进行扩增。反应体系包含一对用于扩增ESKAPR病原菌基因的特异性引物;步骤二,进行cas12a反应。反应体系包含CRISPR

Cas12a反应的crRNA和ssDNA荧光报告探针/试纸条探针,Cas12a蛋白核酸酶活性激活后,切割ssDNA荧光报告探针/试纸条探针,形成荧光基团

ssDNA淬灭基团

ssDNA/6
’‑
FAM

ssDNA和生物素

ssDNA;步骤三,进行荧光/试纸条检测。用于荧光检测时,针对含有荧光基团

ssDNA的反应体系,在紫外光照射下发光;用于试纸条检测时,质控线T线的链酶亲和素结合生物素

ssDNA,检测线负载的抗IgG结合抗FAM抗体与6
’‑
FAM

ssDNA...

【专利技术属性】
技术研发人员:黄广涛黄斯旖吴军魏在荣王达利汪显峰
申请(专利权)人:深圳市第二人民医院深圳市转化医学研究院
类型:发明
国别省市:

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