tRF-19-DRMD5112在制备肾细胞癌诊断试剂盒中的应用制造技术

本发明专利技术公开了tRF

【技术实现步骤摘要】
tRF
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19
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DRMD5112在制备肾细胞癌诊断试剂盒中的应用


[0001]本专利技术涉及医学生物检测
，具体涉及tRF
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DRMD5112在制备肾细胞癌诊断试剂盒中的应用。

技术介绍

[0002]肾癌是世界上最常见的恶性肿瘤之一，约占所有癌症的3％，2020年全球新增病例超过40万例。肾癌中，约90％为肾细胞癌(RCC)，其中肾透明细胞癌(ccRCC)的占比约为75％。得益于靶向治疗的开展，RCC治疗已取得了巨大的进步，但RCC仍然是最致命的泌尿生殖系统癌症，5年生存率约为76％。然而，生存率统计数据高度依赖于诊断的初始阶段，局部RCC患者的5年生存率为93％，而远处转移患者的5年生存率仅为15.3％，转移性ccRCC患者的5年生存率仅为12％。目前，大约30％的RCC患者初诊为晚期或转移性肾癌，提高RCC早期检测率有望大大降低癌症相关死亡率。
[0003]早期肾癌多无临床症状，晚期肾癌可出现血尿、腰痛、腹部肿块“肾癌三联症”，但仅占6％～10％。无症状肾癌的发现率逐年升高，目前约占60％。肾癌的诊断包括临床诊断和病理诊断。临床诊断主要依靠影像学检查，通过超声、CT、MRI等将肾脏肿块划分为囊性和实性肿块。其中，CT检查被认为是肾癌诊断的金标准，准确率高于超声且相对MRI更简单便捷。CT检查的局限性是费用相对超声检查高、且具有电离辐射、造影剂可能导致过敏及肾毒性等。肾癌确诊依靠病理学检查，通过术后组织学确定的侵袭范围进行病理分期pTNM诊断。目前，RCC尚缺乏非侵入的早期诊断方式。
[0004]近年来，有研究者鉴定出一些基因突变、基因表达和蛋白质特征用于RCC的早期诊断。ccRCC中最常见的基因突变有VHL(45.8％)、PBRM1(32.6％)、SETD2(11.7％)和BAP1(9.1％)等，由染色体3p缺失所致。除了染色体畸变，启动子CpG超甲基化、错义和截短突变也在ccRCC DNA失调中占很大比例。从基因表达特征角度，Ujfaludi等人分析了关键ccRCC驱动基因VHL、SETD2、PBRM1和BAP1的转录组特征，发现这些基因的中位转录可以区分ccRCC与正常组织，敏感度和特异性分别为87％和77％。蛋白质特征角度的研究发现，可能用于诊断ccRCC的蛋白特征与蛋白质折叠和结合、细胞信号通路调控、微管蛋白形成和热休克蛋白反应相关，如Yang等通过高效液相色谱
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电喷雾串联质谱(LC
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ESI
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MS/MS)发现血浆RBP6、TUBB或ZFP3肽段可用于诊断ccRCC(AUC＝0.81～0.82)，Benjamin等提出CFL1、PFN1、NNMT和ALDOA这4种蛋白质可作为诊断ccRCC的候选标志物(AUC>0.7)，Zhang等通过定量蛋白组学分析和ELISA验证，鉴定出HSC71是区分RCC和良性泌尿系统疾病的潜在血清生物标志物(AUC＝0.86)，Papale等借助表面增强激光解吸电离飞行时间质谱(SELDI
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TOF
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MS)成功区分ccRCC患者和健康人(AUC＝0.93)，并鉴定RKIP为最重要的ccRCC患者尿液生物标志物。
[0005]转运RNA来源的小RNA(tsRNA)是一类长度为16～48nt的新型非编码RNA(ncRNA)，由tRNA前体或成熟tRNA的特异性切割产生。越来越多的研究揭示了tsRNA在多种人类疾病(包括癌症)进展中的关键作用，例如肺癌、乳腺癌、卵巢癌、结直肠癌、前列腺癌和肝癌等。tsRNA在循环中稳定性高，并且与miRNA相比，癌症患者与健康人之间差异更大，这提示
tsRNA可能作为癌症早期诊断更敏感的生物标志物。2021年，Wu等发现血浆tsRNA 5'
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tRF
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GlyGCC可能作为结直肠癌诊断的新型分子标志物(AUC＝0.882)。2022年，Yang等报道了血浆tsRNA AS
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tDR
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007333对非小细胞肺癌的诊断价值(AUC＝0.93)，并具备促进其恶性进展的生物学功能。然而，在肾癌中，尚无相关研究进展。

技术实现思路

[0006]1.所要解决的技术问题：
[0007]针对上述技术问题，本专利技术提供tRF
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DRMD5112在制备肾细胞癌诊断试剂盒中的应用。
[0008]2.技术方案：
[0009]tRF
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DRMD5112在制备肾细胞癌诊断试剂盒中的应用，所述tRF
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DRMD5112的命名源自MINTbase数据库，具体序列为：5
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AATCCCGGACGAGCCCCCA
‑3’
。
[0010]进一步地，所述诊断试剂盒是以tRF
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DRMD5112这一小RNA作为标志物对其在血浆中的表达量进行检测，对肾细胞癌进行早期诊断。
[0011]进一步地，所述诊断试剂盒包括以下组分：针对tRF
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DRMD5112的逆转录引物、针对tRF
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DRMD5112的上游引物、针对U6的逆转录引物、针对U6的上游引物、通用引物、5
×
逆转录缓冲液、逆转录酶混合液和SYBR Green qPCR混合液。
[0012]进一步地，针对tRF
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DRMD5112的逆转录引物的序列为：
[0013]GTCGTATCCAGTGCAGGGTCCGAGGTATTCGCACTGGATACGACTGGGGG。
[0014]进一步地，针对tRF
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DRMD5112的上游引物的序列为：
[0015]CGCGAATCCCGGACGAG。
[0016]进一步地，针对U6的逆转录引物的序列为：
[0017]CTCAACTGGTGTCGTGGAGTCGGCAATTCAGTTGAGAACGCTTC。
[0018]进一步地，针对U6的上游引物的序列为：
[0019]ACACTCCAGCTGGGACGCAAATTCGTGAAG。
[0020]进一步地，通用引物的序列为：
[0021]AGTGCAGGGTCCGAGGTATT。
[0022]进一步地，5
×
逆转录缓冲液和逆转录酶混合液来源于TAKARA的逆转录试剂盒(No.RR037A)；SYBR Green qPCR混合液来源于南京诺唯赞生物科技股份有限公司的ChamQ SYBR qPCR Master Mix试剂盒(No.Q711本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.tRF
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DRMD5112在制备肾细胞癌诊断试剂盒中的应用，其特征在于，所述tRF
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DRMD5112的具体序列为：5
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AATCCCGGACGAGCCCCCA
‑3’
。2.根据权利要求1所述的tRF
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DRMD5112在制备肾细胞癌诊断试剂盒中的应用，其特征在于，所述诊断试剂盒是以tRF
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DRMD5112这一小RNA作为标志物对其在血浆中的表达量进行检测，对肾细胞癌进行早期诊断。3.根据权利要求2所述的tRF
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DRMD5112在制备肾细胞癌诊断试剂盒中的应用，其特征在于，所述诊断试剂盒包括以下组分：针对tRF
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DRMD5112的逆转录引物、针对tRF
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DRMD5112的上游引物、针对U6的逆转录引物、针对U6的上游引物、通用引物、5
×
逆转录缓冲液、逆转录酶混合液和SYBR Green qPCR混合液。4.根据权利要求3所述的tRF
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DRMD5112在制备肾细胞癌诊断试剂盒中的应用，其特征在于，针对tRF
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DRMD5112的逆转录引物的序列为：GTCGTATCCAGTGCAGGGTCCGAGGTATTCGCACTGGATACGACTGGGGG。5.根据权利要求3或4所述的tRF
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DRMD5112在制备肾细胞癌诊断试剂盒中的应用，其特征在于，针对tRF
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DRMD5112的上游引物的序列为：CGCGAATCCCGGACGAG。6.根据权利要求5所述的tRF
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DRMD5112在制备肾细胞癌诊断试剂盒中的应用，其特征在于，针对U6的逆转录引物的序列为：CTCAACTGGTGTCGTGGAGTCGGCAATTCAGTTGAGAACGCTTC。7.根据权利要求6所述的tRF
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DRMD5112在制备肾细胞癌诊断试剂盒中的应用，其特征在于，针对...

【专利技术属性】
技术研发人员：刁文丽，丁梦，郭宏骞，刘光香，纪长威，
申请(专利权)人：南京鼓楼医院，
类型：发明
国别省市：