本发明专利技术涉及一种大黄及其复方制剂中多型体的大黄酚与大黄素定量测定方法。其特征：集甲醇提取、酸水解于一步，删除三氯甲烷等毒害溶剂萃取、蒸干等步骤，使前处理时间由传统法的１０～１５小时，降低到０．５小时，高效率，低成本，少污染。通过对流动相组分及比例探讨，以乙腈－甲醇－０．１％磷酸（４０～４５∶２０～２７∶３８～３０）取代甲醇－０．１％磷酸（８５∶１５）为流动相，解决了难以辨认的大黄素包覆杂质峰难题，确保了测定结果的准确性。以大黄酚、大黄素为测定指标，采用同一流动相，同时测定制剂中的总、游离和结合蒽醌中的大黄酚、大黄素。率先使测定指标与制剂功效相结合，提高了质控指标的科学性、合理性。方法简便、快捷、准确，适用于所有含大黄的各种剂型。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种。
技术介绍
大黄具有泻热通肠，凉血解毒，逐瘀通经之功效。用于实热便秘，积滞腹痛，泻痢不爽， 湿热黄疸，血热吐衄，目赤，咽肿，肠痈腹痛，痈肿疔疮，瘀血经闭，跌扑损伤，外治水火 烫伤；上消化道出血。是临床上一味用量大，使用频率高的中药材。文献报道，大黄主含大 黄蒽醌类成分，以游离蒽醌、结合蒽醌和总蒽醌等多型体存在。游离蒽醌代表性成分是大黄 酚、大黄素、芦荟大黄素、大黄酸、大黄素甲醚等，结合蒽醌则是游离蒽醌与各种糖以不同 的连接方式形成的苷类。游离蒽醌具抗菌、消炎作用，而结合蒽醌具泻下作用。科学合理的 质量控制方法应是分别控制不同型体的蒽醌含量，质量控制标准才更有意义。但目前不论中 国药典还是地标升国标等法定标准收载的数百种含大黄的复方制剂，其质量控制标准存在着 较大缺陷。第一，不论功效是泻下通便还是抗菌消炎，其质量标准都是以大黄酚、大黄素计 的总蒽醌量。总蒽醌量高，不能反映具消炎作用的游离蒽醌含量高，同理也无法反映具泻下 作用的结合蒽醌含量高，甚至出现作为抗菌消炎的制剂结合蒽醌远高于游离蒽醌的情况。总 之质量控制的成分与功效不挂钩。第二，质控方法太繁琐、复杂，需用多量毒害溶剂纯化处 理，费时长，成本高、效率低、污染环境，危害健康。第三，流动相的耐用性试验不符合规 定，部分色谱柱大黄素波峰包覆杂质峰，且很难辨认分离(见图l)，导致测定结果的误判， 直接影响制剂安全性与有效性的正确评价。将目前有关大黄的质量控制方法归纳、分析如下-方法1取样品，剪碎，精密称取一定量，加上一定量的硅藻土，研匀，置索氏提取器 中，加乙醇适量，加热回流提取至提取液无色，提取液移至50ml量瓶中，加乙醇稀释至刻度， 摇匀，精密量取10ml，置烧瓶中，水浴蒸至近干，加盐酸-30%乙醇(1: 10)混合溶液15ml， 置水浴中加热水解l小时，立即冷却，用三氯甲垸强力振摇提取4次，每次15ml，合并三氯 甲烷液，回收三氯甲垸至干，残渣用甲醇溶解，转移至50ml量瓶中，并稀释至刻度，摇匀， 滤过，取续滤液测定大黄素、大黄酚的总量(中国药典05年版麻仁丸、麻仁润肠丸等含量处 理方法)。流动相甲醇-0.1%磷酸(85: 15)。方法分析本测定方法仅硅藻土研磨与索氏提取至无色就要花费时间大约7 8个小时， 而且样品与硅藻土研匀后，必须全部定量转移置索氏提取器中，否则，黏附在乳钵和乳锤上 的样品，要带来测定误差。研细的样品与硅藻土在提取时，易形成致密层，阻止了溶剂的穿 透，易造成提取不完全，进而影响结果的准确性。提取完成后，再取一定量溶液，蒸干、水 解、三氯甲烷萃取、再蒸干、定容，仅样品前处理就花费时间约i4 15小时，其中同时消费 电能与水资源的时间达IO小时以上，有机毒害试剂数百毫升。方法繁琐、费时、效率低、成 本高、污染环境、危害检验人员健康，方法准确性欠佳。方法2.取样品，剪碎，精密称取一定量，置烧杯中，加一定量水，温热，搅拌使溶散，加一定量硅藻土，拌匀，置烘箱中烘干，转移置锥形瓶中，并用一定量水洗涤烧杯及玻棒， 洗液并入锥形瓶中，置烘箱中烘干，精密加入盐酸-乙醇(1: 25)混合溶液25ml，称定重量， 超声处理10分钟。置水浴加热回流2小时，放冷，再称定重量，用盐酸-乙醇(1: 25)混合 溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液5ml，置蒸发皿中，蒸干，残渣加甲醇 适量使溶解，转移至5ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，测定大黄素、 大黄酚的总量(中国药典05年版清宁丸含量处理方法)。流动相甲醇-0.1%磷酸(85: 15)。方法分析本方法虽然无毒害试剂萃取，但程序显得仍较繁琐、复杂，费时。如温热，搅拌，硅藻土拌匀，烘箱烘干，转移，再烘干，水解，蒸干，定容等，样品前处理大约需花费2天时间，而且步骤越多，越易出现测定误差。方法3.取样品适量，精密称定，精密加入等量的硅藻土，研匀，精密称取约4g，置具 塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，称定重量，加热回流l小时，取出，放冷，再称定重量， 用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液5ml，置塞锥形瓶中，挥去甲醇，加 2. 5mol/L硫酸溶液20 ml,超声处理(功率250W，频率33kHz) 10分钟，置水浴中加热1 小时，立即冷却，移置分液漏斗中，加乙醚提取3次，每次25ml，合并乙醚液，用水15ml 洗涤，弃去水液，乙醚液通过铺有适量无水硫酸钠的漏斗滤过，用少量乙醚洗涤容器与滤器， 滤液低温回收溶剂至干，残渣加甲醇适量使溶解，并转移至25 ml量瓶中，加甲醇稀释至刻 度，摇匀，滤过，取续滤液测定大黄素、大黄酚的总量(中国药典05年版大黄蛰虫丸、槟榔 四消丸含量处理方法)。流动相甲醇-0.1%磷酸(85: 15)。方法分析本方法与方法l类同，不同之处是该方法以回流提取l小时替代了数小时的 索氏提取，较方法l节约了时间，但仍需将提取的甲醇溶液蒸干、水解，乙醚萃取，再蒸干， 定容等繁琐操作，花费时间约10小时。缺点与方法l相同。本专利技术就是针对上述大黄定量测定存在的缺陷，提供一种简便、快捷、准确、无污染、 高效、低耗、色谱柱耐用性广、测定指标与功效挂钩的质量控制方法。通过含量测定指标的 合理设定，首次使指标性成分与功效靠拢，质量标准更科学、合理、具实用价值。
技术实现思路
1. 专利技术了集甲醇提取、酸水解于一步，水解结束后，补重、滤过，取一定量水解液，中 和、稀释，即可。删除了三氯甲垸等有机溶剂萃取、蒸干等步骤，样品前处理时间由传统方 法的约10 15小时，降低到0.5小时。大大提高了检测效率，减少了环境污染，节约了检测 成本，方法简便、快捷、准确。2. 针对难以辨认的大黄素包覆杂质峰的问题，通过对流动相组分重组及比例探讨，以乙 腈-甲醇-0. 1%磷酸(40 45: 20 27: 38 30)取代甲醇-0. 1%磷酸(85: 15)为流动相，解 决了难以辨认的大黄素包覆杂质峰的难题(见图2),各波峰分离良好，并适用于目前市售的 各种反相色谱柱，确保了测定结果的准确性。3. 以大黄酚、大黄素为测定指标，采用同一流动相，同时测定制剂中的总蒽醌、游离蒽 醌和结合蒽醌中的大黄酚、大黄素的量。解决了多年来测定指标难以与功效结合的难题，实现了依据制剂的不同功能主治，测定不同功效成分的愿望，使质量控制更具有现实意义。 本专利技术解决其技术问题所采用的方案为1. 色谱条件与系统适用性试验以十八院基硅垸键合硅胶为填充剂；以乙腈-甲醇-0.1% 磷酸(40 45: 20 27: 38 30)为流动相；检测波长为254nm。理论板数按大黄酚峰计算 不低于3000。2. 对照品溶液制备精密称取大黄酚和大黄素对照品，加甲醇制成每lml含大黄酚10 50Pg、大黄素5 25ng的混合溶液，即得。3. 供试品溶液制备取样品，粉碎，精密称取一定量(约相当大黄酚1 1(kg,大黄素0. 5 5mg)，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇-盐酸(10: 1)的混合溶液20 50ml，称定重量，如 为药材、片剂、丸剂、散剂、颗粒剂、胶囊剂等无蜂蜜样品，置8(TC的水浴中加热回流20 40分钟；如为蜜丸类样品，需浸泡10小时以上，超声使溶散，再置8(TC的水浴中加热回流， 放冷，若瓶本文档来自技高网...
【技术保护点】
本专利技术涉及一种大黄及其复方制剂中多型体的大黄酚与大黄素定量测定方法。其特征在于： （１）色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈－甲醇－０．１％磷酸（４０～４５∶２０～２７∶３８～３０）为流动相；检测波长为２５４ ｎｍ。理论板数按大黄酚峰计算应不低于３０００。 （２）对照品溶液制备：精密称取大黄酚和大黄素对照品，加甲醇制成每１ｍｌ含大黄酚１０～５０μｇ、大黄素５～２５μｇ的混合溶液，即得。 （３）供试品溶液制备：取样品，粉碎，精密称取一定 量（约相当大黄酚１～１０ｍｇ，大黄素０．５～５ｍｇ），置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇－盐酸（１０∶１）的混合溶液２０～５０ｍｌ，称定重量，如为药材、片剂、丸剂、散剂、颗粒剂、胶囊剂等无蜂蜜样品，置８０℃的水浴中加热回流２０～４０分钟；如为蜜丸类样品，需浸泡１０小时以上，超声使溶散，再置８０℃的水浴中加热回流，放冷，若瓶壁有黏附，超声去除，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密吸取续滤液１～５ｍｌ，置５～１０ｍｌ量瓶中，加２％的氢氧化钠溶液１～２ｍｌ，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为测定总蒽醌中大黄酚、大黄素的供试品溶液。 再取上述粉碎的样品一定量（约相当大黄酚０．１～１．２５ｍｇ，大黄素０．０５～０．６ｍｇ），精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇１０～２５ｍｌ，称定重量，如为药材、片剂、 丸剂、散剂、颗粒剂、胶囊剂等无蜂蜜样品，超声处理（功率为１６０Ｗ，频率为５０ｋＨｚ）２０～４０分钟；如为蜜丸类样品，需浸泡１０小时以上，玻棒研磨使样品溶散，用数滴甲醇冲洗玻棒于锥形瓶中，再超声处理（功率为１６０Ｗ，频率为５０ｋＨｚ）２０～４０分钟；放冷，称定重量，用甲醇补足或挥散至原重量，摇匀，滤过，取续滤液作为测定游离蒽醌中大黄酚、大黄素的供试品溶液。 （４）测定法：分别精密吸取对照品溶液与上述二种供试品溶液各１０～２０μｌ，注入液相色谱仪，测定。分别计算总蒽醌中大黄 酚、大黄素与游离蒽醌中大黄酚、大黄素的量，以总蒽醌中大黄酚、大黄素的量减去游离蒽醌中的大黄酚、大黄素量，即为结合蒽醌中大黄酚、大黄素的量。...
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：韩桂茹，王金龙，赵志军，冯丽，封淑华，
申请(专利权)人：韩桂茹，
类型：发明
国别省市：13[中国|河北]
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