转基因抗旱大豆土壤环境安全评价方法技术

本发明专利技术提供一种转基因抗旱大豆土壤环境安全评价方法。分别取转基因抗旱大豆根系和同一品种非转基因大豆根系１００ｇ匀浆后过滤，低温冷冻离心机４０００ｇ下离心后取上清液置于４℃冰箱中保存备用。针对每种功能微生物和病原微生物分别配制适合其生长的选择性培养基，在各选择性培养基中分别添加上述转基因抗旱大豆根系和同一品种非转基因大豆根系提取物０，１％，０．１％，０．０１％，０．００１％，０．０００１％后倒平板，５次重复。在倒平板后的每种不同的选择性培养集中分别接种功能微生物如固氮菌、硅酸盐细菌、木霉、巨大芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌等和大豆根部病原菌如疫霉菌。２８℃～３０℃条件下培养５～７天后测定各平板培养基中功能微生物和病原微生物菌落直径，比对各功能菌和病原菌在含有转基因抗旱大豆和同一品种非转基因大豆根系提取物培养基中菌落直径的差异显著性，确定转基因抗旱大豆对土壤功能微生物和病原微生物是否具有影响。将上述接种各功能菌的选择性培养基在２８～３０℃条件下继续培养至１０天后，在２８℃～３０℃条件下干燥后研细，测定每个培养基中功能菌对应的酶活性，如脲酶、磷酸酶和纤维素酶活性。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种转基因大豆环境安全评价方法，尤其是转基因抗旱大豆土壤环境安全评 价方法。
技术介绍
转基因大豆是把目的基因通过一定方法导入大豆后创制的大豆新品种。转基因大豆从创 制到生产中应用，需要经过环境和生物安全性评价，只有安全评价合格的转基因大豆才能够 进入生产中应用。对转基因作物商品化前的环境安全评价是防止转基因作物大面积种植所可 能带来的对生态系统和人类生存潜在威胁的重要手段。中国在转基因大豆新品种创制研究方 面刚刚起步，转基因抗旱大豆土壤环境评价方法是结合中国目前创制的自主知识产权的转基 因抗旱大豆而建立的土壤环境安全评价方法。
技术实现思路
转基因大豆目前在欧盟、美国、加拿大已经广泛种植，但目前种植的品种仅为转基因抗 除草剂大豆，因此欧美等国家所建立的转基因大豆环境安全评价方法也只适用于对转基因抗 除草剂大豆的环境安全评价。转基因抗旱大豆是为解决干旱这一制约中国大豆主产区产量和 品质瓶颈问题而创制的，由于转基因抗旱大豆与欧美等国目前种植的转基因抗除草剂大豆导 入的目的基因不同，因此欧美等国建立的转基因抗除草剂大豆安全评价方法则不适合对我国 自主研制的转基因抗旱大豆进行环境安全性评价。本项专利技术提出转基因抗旱大豆土壤环境安 全评价方法，应用可检测转基因抗旱大豆种植后是否 会对土壤功能微生物、病原微生物和土壤酶产生影响，对确保这一应用前景广阔的转基因抗 旱大豆安全地投入生产，提高中国大豆生产的产量和品质具有重要作用。此外，本项方法也 适用于对其他转基因抗旱作物进行土壤环境的安全性评价。本项专利技术解决其技术问题所采用的技术方案是利用转基因抗旱大豆根系提取物添加到 培养基中，把已经从土壤中分离并鉴定的土壤功能微生物和病原微生物接种到上述培养基中 培养，观察并测定转基因抗旱大豆根系分泌物对土壤功能微生物和病原微生物生长及其功能 微生物所产生相应酶活性的影响。本专利技术的有益效果是在室内采用培养基中添加转基因抗旱大豆根系提取物和适合微生物生长的纯培养条件下，可以快速检测转基因抗旱大豆对土壤功能微生物、病原微生物生长和功能微生物所产生相应酶活性的影响。室内检测，易于控制环境条件，准确且检测周期短。该方法可为转基因抗旱作物从研制到投入生产提供安全可靠的土壤环境评价方法，确保转基 因抗旱作物安全投入生产，并获得最佳经济效益。具体实施例方式分别取转基因抗旱大豆根系和冋一品种非转基因大豆根系100g匀浆后过滤，低温冷冻离 心机4000g下离心后取上清液置于4。C冰箱中保存备用。针对每种功能微生物和病原微生物分别配制适合其生长的选择性培养基，在各选择性培养基中分别添加上述转基因抗旱大豆根系 和同一品种非转基因大豆根系提収物O， 1%， 0.1%， 0.01%， 0.001%, 0.0001%后倒平板，5次重复。在倒平板后的每种不同的选择性培养基中分别接种功能微生物如固氮菌、硅酸盐细菌、 木霉、巨大芽孢杆菌、枯草芽孢杆茵等和大豆根部病原菌如疫霉菌。28'C 3(TC条件下培养5 7天后测定各平板培养基中功能'i:生物和病原微生物菌落直径，比对各功能菌和病原菌在含有转基因抗旱大豆和同一品种非转^因大豆根系提取物培养基中菌落直径的差异显著性，确定 转基因抗旱大豆对土壤功能微生物和病原微生物是否具有影响。将上述接种各功能菌的选择性培养基在28 3(TC条件下继续培养至10天后，在28'C 30'C条件下干燥后研细，测定每:个培养基中功能菌对应的酶活性，如脲酶、磷酸酶和纤维素酶 活性。权利要求，其特征是1.分别取转基因抗旱大豆根系和同一品种非转基因大豆根系100g匀浆后过滤，低温冷冻离心机4000g下离心后取上清液置于4℃冰箱中保存备用。针对每种功能微生物和病原微生物分别配制适合其生长的选择性培养基，在各选择性培养基中分别添加上述转基因抗旱大豆根系和同一品种非转基因大豆根系提取物0，1％，0.1％，0.01％，0.001％，0.0001％后倒平板，5次重复。在倒平板后的每种不同的选择性培养基中分别接种功能微生物如固氮菌、硅酸盐细菌、木霉、巨大芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌等和大豆根部病原菌如疫霉菌。28℃～30℃条件下培养5～7天后测定各平板培养基中功能微生物和病原微生物菌落直径，比对各功能菌和病原菌在含有转基因抗旱大豆和同一品种非转基因大豆根系提取物培养基中菌落直径的差异显著性，确定转基因抗旱大豆对土壤功能微生物和病原微生物是否具有影响。2.将上述接种各功能菌的选择性培养基在28～30℃条件下继续培养至10天后，在28℃～30℃条件下干燥后研细，测定每个培养基中功能菌对应的酶活性，如脲酶、磷酸酶和纤维素酶活性。1. 分别取转基因抗旱大豆根系和同一品种非转基因大豆根系100g匀浆后过滤，低温冷冻离 心机4000g下离心后取上清液置于4'C冰箱中保存备用。针对每种功能微生物和病原微生物 分别配制适合其生长的选择性培养基，在各选择性培养基中分别添加上述转基因抗旱大豆根 系和同一品种非转基因大豆根系提取物O， 1%， 0.1%， 0.01%， 0.001%， 0.0001%后倒平板， 5次重复。在倒平板后的每种不同的选择性培养基中分别接种功能微生物如固氮菌、硅酸盐 细菌、木霉、巨大芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌等和大豆根部病原菌如疫霉菌。28'C 3(TC条件 下培养5 7天后测定各平板培养基中功能微生物和病原微生物菌落直径，比对各功能菌和病 原菌在含有转基因抗旱大豆和同一品种非转基因大豆根系提取物培养基中菌落直径的差异显 著性，确定转基因抗旱大豆对土壤功能微生物和病原微生物是否具有影响。2. 将上述接种各功能菌的选择性培养基在28 3(TC条件下继续培养至10天后，在28'C 30 'C条件下干燥后研细，测定每个培养基中功能菌对应的酶活性，如脲酶、磷酸酶和纤维素酶 活性。全文摘要本专利技术提供一种。分别取转基因抗旱大豆根系和同一品种非转基因大豆根系100g匀浆后过滤，低温冷冻离心机4000g下离心后取上清液置于4℃冰箱中保存备用。针对每种功能微生物和病原微生物分别配制适合其生长的选择性培养基，在各选择性培养基中分别添加上述转基因抗旱大豆根系和同一品种非转基因大豆根系提取物0，1％，0.1％，0.01％，0.001％，0.0001％后倒平板，5次重复。在倒平板后的每种不同的选择性培养集中分别接种功能微生物如固氮菌、硅酸盐细菌、木霉、巨大芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌等和大豆根部病原菌如疫霉菌。28℃～30℃条件下培养5～7天后测定各平板培养基中功能微生物和病原微生物菌落直径，比对各功能菌和病原菌在含有转基因抗旱大豆和同一品种非转基因大豆根系提取物培养基中菌落直径的差异显著性，确定转基因抗旱大豆对土壤功能微生物和病原微生物是否具有影响。将上述接种各功能菌的选择性培养基在28～30℃条件下继续培养至10天后，在28℃～30℃条件下干燥后研细，测定每个培养基中功能菌对应的酶活性，如脲酶、磷酸酶和纤维素酶活性。文档编号C12Q1/18GK101665819SQ20091007298公开日2010年3月10日 申请日期2009年9月28日 优先权日2009年9月28日专利技术者伟 丁, 李文滨, 王振华, 闫春秀 申请人:东北农业大学本文档来自技高网...

【技术保护点】
转基因抗旱大豆土壤环境安全评价方法，其特征是：　　１．分别取转基因抗旱大豆根系和同一品种非转基因大豆根系１００ｇ匀浆后过滤，低温冷冻离心机４０００ｇ下离心后取上清液置于４℃冰箱中保存备用。针对每种功能微生物和病原微生物分别配制适合其生长的选择性培养基，在各选择性培养基中分别添加上述转基因抗旱大豆根系和同一品种非转基因大豆根系提取物０，１％，０．１％，０．０１％，０．００１％，０．０００１％后倒平板，５次重复。在倒平板后的每种不同的选择性培养基中分别接种功能微生物如固氮菌、硅酸盐细菌、木霉、巨大芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌等和大豆根部病原菌如疫霉菌。２８℃～３０℃条件下培养５～７天后测定各平板培养基中功能微生物和病原微生物菌落直径，比对各功能菌和病原菌在含有转基因抗旱大豆和同一品种非转基因大豆根系提取物培养基中菌落直径的差异显著性，确定转基因抗旱大豆对土壤功能微生物和病原微生物是否具有影响。２．将上述接种各功能菌的选择性培养基在２８～３０℃条件下继续培养至１０天后，在２８℃～３０℃条件下干燥后研细，测定每个培养基中功能菌对应的酶活性，如脲酶、磷酸酶和纤维素酶活性。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：丁伟，李文滨，闫春秀，王振华，
申请(专利权)人：东北农业大学，
类型：发明
国别省市：93[中国|哈尔滨]