碱性磷酸酶激活剂的制备方法及应用技术

本发明专利技术提供了一种根据碱性磷酸酶热点结构域制备碱性磷酸酶的激活剂的方法，所述热点区域包括热点区域1和热点区域2；所述热点区域1由（R213，D214，F259，K260，P261，R262，Y263，K264，D284，Y285）组成，所述热点区域2由（K322，N323，P324，K325）组成。结合这两个热点区域的抗体能够激活碱性磷酸酶的活性，抗体包含抗体的重链区（VH）和/或轻链可变区（VL），所述VH包含：如SEQ ID NO:1所示的VH CDR1；如SEQ ID NO:2所示的VH CDR2；和/或，如SEQ ID NO:3所示的VH CDR3；所述VL包含：如SEQ ID NO:4所示的VL CDR1；如SEQ ID NO：5所示的VL CDR2；和/或，如SEQ ID NO:6所示的VL CDR3。本发明专利技术的蛋白质对碱性磷酸酶有强力的结合，能够增强碱性磷酸酶及其突变蛋白的催化活性。酶及其突变蛋白的催化活性。

【技术实现步骤摘要】
碱性磷酸酶激活剂的制备方法及应用


[0001]本专利技术属于生物
，具体涉及碱性磷酸酶激活剂的制备方法及应用。

技术介绍

[0002]碱性磷酸酶共编码524个氨基酸，其中1
‑
17位氨基酸是信号肽，502
‑
524位氨基酸片段在成熟后会被切割。该蛋白质在内质网在内质网上经正确的折叠、组装后形成具有活性的同型二聚体，包含钙结合位点、冠状区、同型二聚体结合结构域、N端螺旋结构域及活性催化结构域5个结构域，通过C端的糖基磷脂酰肌醇(glycophosphatidylinositol,GPI)锚点与细胞膜链接，定向使得活性位点面向胞外环境。
[0003]在功能上，碱性磷酸酶能够水解无机焦磷酸(Inoranic Pyrophosphate，PPi)产生磷酸，参与羟基磷灰石晶体的形成，促进成骨细胞的矿化作用。在低磷酸酯酶症(hypophosphatasia，HPP)中，碱性磷酸酶的活性水平降低，导致PPi不断累积，PPi和钙离子通过跨膜转运蛋白Ank进入细胞，引起Ras/MAPK/ERK1/2信号通路被激活本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.碱性磷酸酶的热点区域作为靶标用于制备碱性磷酸酶激活剂的用途；所述热点区域包括热点区域1和/或热点区域2；所述热点区域1由(R213，D214，F259，K260，P261，R262，Y263，K264，D284，Y285)组成，所述热点区域2由(K322，N323，P324，K325)组成。2.一种激活碱性磷酸酶活性的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：碱性磷酸酶激活剂结合碱性磷酸酶的热点区域，所述热点区域包括热点区域1和/或热点区域2；所述热点区域1由(R213，D214，F259，K260，P261，R262，Y263，K264，D284，Y285)组成，所述热点区域2由(K322，N323，P324，K325)组成。3.碱性磷酸酶靶向物在以下任一作用中的用途：(1)制备激活碱性磷酸酶的产品；(2)制备促进成骨分化的产品；所述碱性磷酸酶靶向物能够结合碱性磷酸酶的热点区域，所述热点区域包括热点区域1和/或热点区域2；所述热点区域1由(R213，D214，F259，K260，P261，R262，Y263，K264，D284，Y285)组成，所述热点区域2由(K322，N323，P324，K325)组成。4.如权利要求3所述的用途，其特征在于，还包括以下特征中的一项或多项：1)所述激活碱性磷酸酶是指对碱性磷酸酶具有激活效果；2)所述碱性磷酸靶向物为产品的唯一有效成分或有效成分之一；3)所述碱性磷酸酶靶向物选自核酸分子、碳水化合物、脂类、化学小分子药、抗体、多肽、蛋白、病毒或细胞。5.如权利要求4所述的用途，其特征在于，特征3)中，所述抗体包含轻链可变区VL和/或重链可变区VH；所述VH包含：如SEQ ID NO:1所示的VH CDR1；如SEQ ID NO:2所示的VHCDR2；和/或，如SEQ ID NO:3所示的VH CDR3；所述VL包含：如SEQ ID NO:4所示的VL CDR1；如SEQ ID NO：5所示的VL CDR2；和/或，如SEQ ID NO:6所示的VL CDR3。6.一种抗碱性磷酸酶的抗体，其特征在于，所述抗碱性磷酸酶的抗体能够结合碱性磷酸酶的热点区域，所述热点区域包括热点区域1和热点区域2；所述热点区域1由(R213，D214，F259，K260，P261，R262，Y263，K264，D284，Y285)组成，所述热点区域2由(K322，N323，P324，K325)组成。7.如权利要求6所述的抗碱性磷酸酶的抗体，其特征在于，所述抗体包含重链可变区VH和/或轻链可变区VL；所述VH包含：如SEQ ID NO:1所示的VH CDR1；如SEQ ID NO:2所示的VHCDR2；和/或，如SEQ ID NO:3所示的VH CDR3；所述VL包含：如SEQ ID NO:4所示的VL CDR1；如SEQ ID NO：5所示的VL CDR2；和/或，如SEQ ID NO:6所示的VL CDR3。8.如权利要求6或7所述的抗碱性磷酸酶的抗体，其特征在于，所述抗碱性磷酸酶的抗体选自全长抗体、Fab、Fab
’
、F(ab
’
)2、Fv例如scFv、双特异性抗体、多特异性抗体、重链抗体或单域抗体VHH，或由上述抗体制得的单克隆抗体或多克隆抗体。9.如权利要求8所述的抗碱性磷酸酶的抗体，其特征在于，所述抗体选自包括抗体重链恒定区和抗体轻链恒定区的全...

【专利技术属性】
技术研发人员：马培翔，秦安，曹禹，赵杰，夏莹，于亚婷，戎柯纬，
申请(专利权)人：上海交通大学医学院附属第九人民医院，
类型：发明
国别省市：