卡铂在制备预防或治疗多发性硬化症药物中的应用制造技术

本发明专利技术属于生物医药技术领域，具体而言，提供了一种卡铂在制备预防或治疗多发性硬化症药物中的应用。试验结果表明，口服卡铂可以减轻实验性自身免疫性脑脊髓炎的总体临床症状，减少脊髓炎症和脱髓鞘现象；体外细胞实验数据表明卡铂抑制活化T细胞的增殖并诱导其凋亡；从而表明卡铂可安全有效地应用于多发性硬化症治疗药物中。化症治疗药物中。化症治疗药物中。

【技术实现步骤摘要】
卡铂在制备预防或治疗多发性硬化症药物中的应用


[0001]本专利技术属于生物医药
，尤其涉及卡铂在制备预防或治疗多发性硬化症药物中的应用。

技术介绍

[0002]多发性硬化(Multiple sclerosis，MS)是一种中枢神经系统(Central Nervous System，CNS)的自身免疫性疾病。其特征是局部淋巴细胞浸润、髓鞘破裂、星形胶质细胞增殖、小胶质细胞活化和神经变性。MS的分子机制很复杂，人们普遍认为自身反应性T细胞在疾病的发展中起着关键作用。目前，美国至少批准了19种疾病修饰疗法(DMT)用于治疗多发性硬化症，所有这些疗法都可以通过发挥免疫抑制或免疫调节作用在一定程度上降低其复发率。然而，目前的药物仅对一些MS患者有效，对继发性进展性MS没有明显治疗作用。此外，这些治疗的长期效果与并发症相关，也会引起一些严重的副反应。因此，迫切需要开发一种新的、有效的治疗药物。实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis，EAE)是研究MS发病机制和开发新疗法的最佳动物模型。
[0003]卡铂(carboplatin，CA)是一种静脉给药的铂类配合物和烷基化剂，用作治疗各种癌症的化疗剂，主要是卵巢癌、头颈癌和肺癌。卡铂和顺铂作为烷基化剂，导致DNA链之间和链内的交联，导致DNA、RNA和蛋白质合成受到抑制，并触发程序性细胞死亡，主要发生在快速分裂的细胞中。1989年，卡铂在美国被批准用于癌症化疗。然而，关于卡铂在免疫系统中的调节功能的报道很少。因此，卡铂是否对MS有治疗作用尚不清楚。

技术实现思路

[0004]本专利技术所要解决的技术问题是提供一种卡铂在制备预防或治疗多发性硬化症药物中的应用，为多发性硬化症的治疗和预防提供方向。
[0005]本专利技术为解决上述技术问题而采用的技术方案是提供一种卡铂在制备预防或治疗多发性硬化症药物中的应用。
[0006]进一步地，所述多发性硬化症包括：局部淋巴细胞浸润、髓鞘破裂、星形胶质细胞增殖、小胶质细胞活化和神经变性。
[0007]进一步地，所述药物抑制T细胞增殖，并促进活化的T细胞和髓鞘少突胶质细胞糖蛋白特异性T细胞凋亡。
[0008]进一步地，所述药物包括所述卡铂及药学上可接受的载体。
[0009]进一步地，所述药物在预防多发性硬化症时，每隔两天口服一次，并控制卡铂的用量为30mg/kg
‑
100mg/kg。
[0010]本专利技术对比现有技术有如下的有益效果：本专利技术研究了卡铂对EAE神经病理学的影响。研究发现，口服卡铂可以减轻EAE的总体临床症状，减少脊髓炎症和脱髓鞘现象。此外，卡铂处理组EAE小鼠外周组织中T细胞的比例和数量明显降低。同时，质谱数据分析也表明对照组和卡铂处理组EAE小鼠的脾细胞中的差异表达蛋白主要与凋亡调控途径有关。体
外细胞实验数据表明卡铂抑制活化T细胞的增殖并诱导其凋亡。本专利技术的数据表明卡铂可安全有效地应用于MS治疗药物中。
附图说明
[0011]图1表明卡铂治疗减轻EAE小鼠的临床症状；
[0012]图2表明卡铂治疗减少了CNS中致病性T细胞的浸润；
[0013]图3表明卡铂治疗减少了EAE小鼠外周T细胞数量；
[0014]图4表明卡铂治疗增强了EAE期间的凋亡信号；
[0015]图5表明卡铂介导活化T细胞凋亡；
[0016]图6表明卡铂增强EAE小鼠中MOG特异性T细胞凋亡。
具体实施方式
[0017]下面结合附图和实施例对本专利技术作进一步的描述。
[0018]本专利技术试图评估口服卡铂是否可以用于改善EAE的病情。卡铂治疗降低了EAE小鼠的脊髓炎症、脱髓鞘和疾病评分。此外，卡铂治疗组的EAE小鼠的脾脏和引流淋巴结中的致病性T细胞(尤其是Th
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1和Th
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17)的数量和比例明显减少。蛋白质组差异富集分析表明，卡铂处理组脾细胞所表达的与凋亡信号相关蛋白发生显著变化。CFSE实验结果显示卡铂显著抑制T细胞增殖。最后，体外实验证明卡铂可以促进活化的T细胞和髓鞘少突胶质细胞糖蛋白(简称MOG)特异性T细胞凋亡。研究结果表明卡铂在EAE的发生和发展中起着保护作用，并且为治疗MS的新药设计成为可能。
[0019]以下详细公开实验、检测、理论分析。
[0020]一、实验中涉及的材料(动物模型)与本领域通用的实验和检测方法
[0021]1.动物模型
[0022]雄性C57BL/6小鼠购自江苏集萃药康生物科技股份有限公司(南京，中国)。所用C57BL/6小鼠为8
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10周龄，饲养于同济大学实验动物中心SPF级实验室，自由食用水和饲料。所有实验均获得批准，并按照同济大学的动物保护委员会的指导进行。
[0023]2.方法：建立小鼠EAE模型及药物治疗
[0024]C57BL/6小鼠(8
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10周)皮下注射200μg完全溶于完全弗氏佐剂并包含有热灭活结核杆菌(H37Ra，5mg/ml，BD Diagnostics)的MOG
35
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55
(MEVGWYRSPFSRVVHLYRNGK)。免疫第0天及第2天每只小鼠腹腔注射200ng/只百日咳毒素(Calbiochem)。每天根据临床症状为小鼠评分，评分标准如下：0分，无临床症状；1分，尾部瘫痪；2分，轻度瘫痪(单侧或双侧后肢无力，不完全瘫痪)；3分，截瘫(双侧后肢完全瘫痪)；4分，截瘫并前肢无力或瘫痪；5分，濒死状态或死亡。药物治疗，卡铂溶于无菌水中并按照(10mg/kg，30mg/kg,100mg/kg)剂量在免疫第3天灌胃给药直至实验结束，相同体积的200μl无菌水作为对照。
[0025]3.方法：组织病理和免疫组织化学分析
[0026]每只小鼠深度麻醉后0.9％NaCl心脏灌流去除各器官中的外周血，4％(w/v)多聚甲醛灌流进行固定。取腰髓组织样品置于4％多聚甲醛溶液，4℃固定过夜。石蜡包埋后H&E染色分析炎症浸润，快蓝染色分析脊髓脱髓鞘，Image
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Pro软件进行统计分析。
[0027]4.方法：中枢神经系统浸润细胞分离和分析
[0028]脑和脊髓用预冷的组织匀浆器进行匀浆，70μm细胞滤网过滤收集至15ml离心管中，500g 4℃离心10min获得细胞，然后将细胞重悬在8ml 37％Percoll中。在15ml离心管中先轻轻加入4ml 70％Percoll，瞬时离心去除离心管壁上残留的70％Percoll，避免与后面加入的37％Percoll互溶；沿着管壁缓缓加入37％Percoll细胞悬液，避免破坏界面层。780g 25℃密度梯度离心25min，收集位于37/70％Percoll界面处的细胞，进行分析。
[0029]5.方法：细胞染色和流式分析
[0030]脾脏细胞和引流淋巴结细胞本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.卡铂在制备预防或治疗多发性硬化症药物中的应用。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述多发性硬化症包括：局部淋巴细胞浸润、髓鞘破裂、星形胶质细胞增殖、小胶质细胞活化和神经变性。3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述药物抑制T细胞增殖，并促进活化的T细胞和髓鞘少突胶质细胞糖...

【专利技术属性】
技术研发人员：杜昌升，吕婕，
申请(专利权)人：同济大学，
类型：发明
国别省市：