VO-Ohpic在制备逆转胚胎腭裂相关产品中的应用制造技术

本发明专利技术涉及分子生物学技术领域，具体公开了VO

【技术实现步骤摘要】
VO
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Ohpic在制备逆转胚胎腭裂相关产品中的应用


[0001]本专利技术涉及分子生物学
，具体地说，涉及VO
‑
Ohpic在制备逆转胚胎腭裂相关产品中的应用。

技术介绍

[0002]腭裂是在新生儿中较为常见的先天性颅面部发育畸形，发病率高。腭部的发生发展是一个复杂的过程，包括细胞间增殖、迁移和分化，这一过程由遗传网络指导，这些过程的任何失败都会导致腭裂。此外，腭裂也是一组在环境因素和遗传因素相互作用下发生的复杂疾病，其发病具有家族聚集性，遗传因素在唇腭裂的发生中发挥了重要作用。目前关于对腭裂发病机制的研究多集中于探究基因改变对增殖或迁移等过程的影响，由于增殖是腭部发育过程中的第一个重要环节，因此探究增殖异常引起的腭裂及发病机制尤为重要，尤其是研究基因改变在腭裂发病过程中对增殖带来的影响，不仅能为临床遗传咨询和疾病预防提供依据，而且对提升出生人口质量具有重要的意义。由于获取腭裂的产妇或胚胎样本是很困难的，且根据胚胎学和病因学研究，小鼠是一种容易获得的动物，其产仔率高，与人类的基因序列同源程度高(99％)，被公认为是大多数研究的合适动物模型。因此多选用小鼠作为腭裂体内研究的重要模型。
[0003]目前关于增殖异常导致小鼠腭裂的模型多集中于通过维甲酸(RA)灌胃诱导的腭裂，即在孕鼠怀孕的第10.5天(E10.5)，使用浓度为100mg/kg的RA对其进行灌胃，从而构建胎鼠腭裂模型。但在发育阶段已形成的腭裂是否可被挽救却仍有待研究。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的在于提供一种逆转胚胎腭裂的新方法，进而提出VO
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Ohpic的新应用。
[0005]本专利技术的技术方案如下：
[0006]第一方面，本专利技术提供了VO
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Ohpic在制备逆转胚胎腭裂相关产品中的应用。
[0007]本专利技术研究发现，在胚胎发育时期，对母体施用VO
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Ohpic后，可逆转胚胎因增殖异常引起的腭裂，进而提出了本专利技术。
[0008]VO
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Ohpic是一种高效的PTEN抑制剂，其在小鼠体内可实现对于Pten基因的有效抑制。本专利技术研究发现，VO
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Ohpic可以透过孕鼠的胎盘屏障，抑制胎盘内胎鼠Pten的表达量，从而，逆转胚胎腭裂，挽救已腭裂的胎鼠。本专利技术为研究VO
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Ohpic在胎盘屏障中的渗透作用及对胎鼠腭部组织的影响提供了理论依据；为研究增殖异常引起的腭裂的发病机制提供了新的作用机制及靶点，从正方两方面更完善深入地研究了增殖异常在腭部发育过程中的作用；为VO
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Ohpic应用于临床预防或治疗腭裂患儿提供了理论依据。提出了一种治疗胚胎腭裂的新方法和孕妇接触腭裂易感因素(如药物)，感染后的阻断措施。
[0009]第二方面，本专利技术提供了VO
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Ohpic在制备逆转胚胎腭裂药物中的应用。
[0010]本专利技术的应用中，所述药物的活性成分以游离形式或可药用盐的形式存在。
[0011]所述的活性成分或其可药用的盐还可以依据施用情况的需求，以水合物或其它溶剂的形式使用。
[0012]本专利技术的应用中，所述药物含有至少一种可药用载体。
[0013]本专利技术的应用中，所述药物的给药方式为口服、静脉注射或腹腔注射。
[0014]本专利技术的药物可以用现有常规的方法进行制备，例如通过常规的混合、制粒、包糖衣、溶解或冷冻干燥法来制备。其可包含治疗有效量的药理学活性成分或者还可以同时包含一种或多种可药用的载体。本专利技术药物优选的给药途径是腹腔注射。
[0015]本专利技术的药物的剂型可以是糖衣片、片剂或胶囊。各剂型中单个剂量所包含的活性成分的单位含量本身不一定需要构成有效量，其可以通过施用多个剂量单位来达到所必需的有效量。
[0016]在制备用于口服剂型的药物时，可以使用任何常规的药用介质，例如水、二醇类、油类或醇类；或在口服固体制剂例如粉剂、胶囊和片剂的情况中可使用载体如淀粉、糖、微晶纤维素、稀释剂、造粒剂、润滑剂、粘合剂、崩解剂等等。
[0017]本专利技术的应用中，所述药物在胚胎形成的腭发育早期(增殖期)时施用。
[0018]药物施用的有效剂量可以根据所用的给药方式、所治疗病症的严重程度而变化。
[0019]如，每日每千克体重VO
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Ohpic施用量不超过100μg。
[0020]第三方面，本专利技术提供了VO
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Ohpic在制备胚胎腭裂逆转动物模型中的应用。
[0021]第四方面，本专利技术提供了一种胚胎腭裂逆转动物模型的构建方法，其通过在妊娠第10.5天至13.5天向孕鼠施用VO
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Ohpic来构建，所述孕鼠为怀有腭裂胎鼠的孕鼠。
[0022]所述胎鼠的腭裂是因增殖异常引起的。
[0023]本专利技术在妊娠的特定时期，对孕鼠施用VO
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Ohpic，可有效完成胚胎腭裂逆转，进而成功构建动物模型，成功率高，避免了采用基因敲除模型构建方法对胎鼠及母体致死性的影响。
[0024]本专利技术的构建方法中，施用方法为腹腔注射，每天的注射剂量为100μg/kg。
[0025]腹腔注射的方法操作方便、实验结果说明性强，且施用本专利技术的注射剂量减少了胚胎的死亡率，大大提高了孕鼠及胎鼠的存活率。
[0026]本专利技术的构建方法中，所述胎鼠的腭裂由人工诱导形成，所用的诱导剂为维甲酸。
[0027]本专利技术中，也可使用其他方式诱导胎鼠的腭裂。
[0028]本专利技术构建的模型可以观察出生后胎鼠的表型，比较其与腭裂胎鼠和正常胎鼠的体型大小(包括头部、身体等)，或者观察是否有其他地方的畸形等，从而更好的说明抑制剂的作用。
[0029]本专利技术的有益效果至少在于：
[0030]本专利技术提供了一种新的逆转胚胎腭裂的方法，扩展了VO
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Ohpic的应用领域，为腭裂发育和治疗机理研究提供了理论基础。本专利技术的胚胎腭裂逆转动物模型建模周期短，操作简单，费用低，孕鼠存活率高，成功率高。
附图说明
[0031]图1为空白对照组(control)、实验对照组(RA)和实验组(RA+10μg/kg vo
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ohpic、RA+100μg/kg vo
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ohpic、RA+1mg/kg vo
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ohpic)的部分体式显微镜观察结果。
[0032]图2为空白对照组(control)、实验对照组(RA)和实验组(RA+100μg/kg vo
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ohpic)的部分EdU染色观察结果。
[0033]图3为空白对照组(control)、实验对照组(RA)和实验组(RA+100μg/kg vo
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ohpic)的部分体式显微镜观察结果。
[0034]图4为空白对照组(control)、实本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.VO
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Ohpic在制备逆转胚胎腭裂相关产品中的应用。2.VO
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Ohpic在制备逆转胚胎腭裂药物中的应用。3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述药物的活性成分以游离形式或可药用盐的形式存在。4.根据权利要求2或3所述的应用，其特征在于，所述药物含有至少一种可药用载体。5.根据权利要求2
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4任一项所述的应用，其特征在于，所述药物的给药方式为口服、静脉注射或腹腔注射。6.根据权利要求2
‑
5任一项所述的应用，...

【专利技术属性】
技术研发人员：杜娟，王旖嘉，陈静，王小同，彭霞，
申请(专利权)人：首都医科大学附属北京口腔医院，
类型：发明
国别省市：